Способ получения фибринолитического фермента

Способ получения фибринолитического фермента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ!! !) 4935О4

Са!сз Сооетскил

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 22.11.72 (21) 1848808/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.11.75. Бюллетень № 44

Дата опубликования описания 09.06.76 (51) М. Кл. С 12d 13,10

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР ао делам изобретений и открытий (53) УДК 615.779.94 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Н. С. Егоров, H. С, Ландау и T. А. Прийдак

Московский ордена Ленина и ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИБРИНОЛИТИЧЕСКОГО

ФЕРМЕНТА

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть применено в медицине.

Известен способ получения протеолитического фермента, обладающего фибринолитической активностью, заключающийся в том, что культуральную жидкость Aspergillys oryzae

B 1273 опускают через колонку с анионитом, сырец фермента получают путем осаждения ацетоном, осадок растворяют в.воде, осаждaIOT примеси, добавляя соли тяжелых металлов, фильтрат диализируют и лиофилизируют.

С целью получения высокоактивного фермента в качестве продуцента используют культуру Uocardia species штамм 1 или культуру Nocardia trarIsvalensis штамм 19, или культуру Proactinomyces ruber штамм 26.

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. В синтетическую среду CP-1 (глюкоза 2%, KNO: 0,1%, К;НР04 0,005%, A1gSO4 0 05%, IUaC1 0 05%, СаСО> 0 1%, FeSO. 10 мкг/л) после стерилизации вносят

5% по объему трехсуточного жидкого посевного материала Nocardia species штамм 1, выращенного на среде МПБ с глюкозой. Культивирование проактиномицета осуществляют глубинным способом в колбах на 750 мл со

100 мл среды на качалках при 30 С в течение 3 суток. По истечении этого времени культуральная жидкость содержит 2081 ед/мл фибринолитического фермента, для выделения которого применяют дробное высаливание сернокислым аммонием. Для этого в культуральную жидкость вносят (NH4) zSO4 в кон5 центрации 0,2 насыщения. Выпавший осадок удаляют фильтрованием, а оставшийся фильтрат донасыщают (ХН4) >SO4 до 08 насыщения и оставляют для более полного высаливания на 24 час при 4 С.

10 Выпавший осадок, содер>кащий фибринолитический фермент, растворяют в исходном объеме дистиллированной воды и получают раствор с активностью 1997 ед/мл, что составляет 96% от активности культура Iьной жид15 кости. Затем раствор фермента диализуют в течение 24 час при 4 С против 0,1 М трисбуфера при рН 7,4 с 0,005 М СаС1 . После диализа акт:Ië Ioñòü ферментного раствора составляет до 90% исходной активности, а пос20 ле лиофильного высушивания раствора получают 950 мг сухого порошка с 1 л культуральной жидкости со специфической фибринолитической активностью, равной 14264 ед/мг белка.

25 Пример 2. В синтетическую среду Гудзина (глюкоза 2,р, глицерин 40/o, l-аспарагин

05%, NaqHPO4 0,4%, КН2РО4 03%, MgSO4

0,1%, натрий лимоннокислый трехзамещенный

0,25%, FeCl3 10 мг/л, тиамин 400 мкг/л, био30 тин 2 мкг/л, пантотеновая кислота 1000 мкг/л) 493504

Предмет изобретения

Составитель С. Малютина

Техред 3. Тараненко

Корректор А. Степанова

Редактор М. Дмитриева

Заказ 928/7 Изд. Re 2042 Тираж 529 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 после стерилизации вносят 5 по объему трехсуточного жидкого посевного материала

Nocardia transvalensis штамм 19, выращенного на среде МПБ с глюкозой. Культивирование продуцента осуществляют в течение 3 суток в колбах на 750 мл со 100 мл среды на качалках при 30 С. По истечении этого времени культуральна я жидкость содержит

2239 ед/мл активности. Для выделения фермента используют дробное высаливание сернокислым аммонием с конечным насыщением в 0,8. После растворения осадка фермента получают раствор с содержанием 2059 ед/мл, то есть 92о/в активности культуральной жидкости. Для удаления низкомолекулярных примесей раствор фермента диализуют против трис-буфера рН 7,4 с 0,005 M СоС1з. После диализа активность ферментного раствора со4 ставляет 85% исходной активности, а после лиофильного высушивания с 1 л культуральной жидкости получают 800 мг сухого порошка со специфической фибринолитической ак5 тивностью, равной 10653 ед/мг ферментного белка.

Способ получения фибринолитического фер10 мента путем выращивания проуцента на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли с последующим выделением и очисткой, отличающийся тем, что, с целью получения высокоактивного фермента, 15 в качестве продуцента используют культуру

Nocardia species штамм 1 или культуру Nocardia transvalensis штамм 19, или культуру

Proactinomyces ruber штамм 26.