Способ электрофоретического определения гликозаминогликанов

Способ электрофоретического определения гликозаминогликанов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Респу6лии (и} 500582 (6!) Дополнительное к авт. свнд-ву— (22) Заявлено28,12.73 (2)) 1979661/28-13 с присоединением заявки №(23) Приоритет (43) Опубликовано 25.01.76 Бюллетень № 3 (45) Дата опубликования описания 17 О5.76 (5!) M. Кл. Q г1М 33!16

Гооударственный комнтет

6оввтв Мнннстроо СССР оо делам неооретеннй о отнропнЙ (g3) УД (61 5.47(088.8) (72) АвтоРы A. Я. Дьячкова, Г. Е. Цимаркина, Д, Г. Чукаева и Е. И. Зорин изобретения (7 ) Зажитепи Институ г педиатрии и детской хирургии и Специальное конструкторское бюро физической аппаратуры (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОЗАМ1П!ОГЛИКАНОВ

Мономер (акрипамид — 28 г; метиленбисакркпамид-0,735 r в 100 мп дистиплированной воды 1,0

Трис-оопяный буфврный раство (48 мп сопяной кислоты

1H + трис 36,6 r в 100 мп дистиллированной воды) 0,2

Вода дистиппированная 2,8

Персупьфат аммония (0,14 o) 2,0

0,001

120 мм.

Темед

Высота гепевого столба

Попимеризацию геля проводят B термоста» те при 32-34 С в течение 20-25 мин.

Исспедуемый образец в количестве

0,3 мп: . (5-1 0 гамм I пикозамппо пиканоь) Изобретение относится к медицине, а именно к способам анализа гпикоэаминогпиканов мочи дпя проведения дифференциашной диагностики, Известен способ анапиза гпикозаминогпи- > канов путем эпектрофоретического разделения в стопбиках .. 6%-ного попиакриламйдного геля с использованием в качестве гепеобразуюшего и эпектродного буферов фосфатно-формиатных буферов с поспедуюшим окрашиванием фракций гпикозаминогликанов толуидиновым синим. Этот способ позвопяет удовпетворитепьно расфракционировать и идентифицировать только чистые препараты гпикоэаминогпиканов (ГАГ). Однако таким способом (а нельзя с большой точностью расфракционировать и идентифицировать гликозаминогпиканы, например нативной мочи, без предваритегпного выдепения их в чистом виде.

С цепью аиапиза гпикозаминогпиканощ QQ беэ предварительного выделения их в чистом. . виде, используют 5%-ный попиакрипамидный гель, в ка естве гепеобразуюшего и эпект родного буферов используют концентрирован-ный трис-сопянокиспый и трис-глициновый буферы, а дпя окрашивания фракций - 1%ный раствор апьцианового синего в 3%-ной уксусной кислоте.

Анапиз ГАГ мочи проводят с помошью метода эпектрофореза, столбиках попиакрип) амидного геля.

Состав гепевого раствора, мп:

Составитель 1 « оловина

"едактор А.Бер Техред И.Карандашова Корректор В.Брыксина

Из«И Ч! ф

Тираж Подписное

Заказ 4915

11НИИПИ Государственного комптета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, 113035, Раушская наб., 4

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 наносят на поверхность столбика геля, а сверху наслаивается тряс-глициновый буферный раствор с ионной силой 0,025>рН

8,3. Этот же буферный раствор используют для заливки электродных кювет, 6

Электрофорез проводят при силе тока

0,5 мА на трубку в течение 3 час, затем 2 час при токе 2 мА иа трубку.

По окенчаиии процесса электрофореза столбикя геля извлекают из.трубочек и ок- 19 рашивают 1Ъ-HI IM раствором альцианового синего в 3%-ной уксусной кислоте в течеIIIIe 30 мин.

Отмывку геля от избытка красителя произво3ят погружением столбика в 3%ный 15 раствор уксусной кислоты и периодической сменой етого раствора

При применении такогоспособа сокрашается время електрофореза благодаря использованию геля, обладающего крупнопористой Ж структурой; анализу подвергается нативная моча,и имеюшиеся в ней ниэкомолекулярные вещества не меша от делению на фракции, так как они отдиализовываются в геле; хорошая раэрешаюшая способность и воспроизводимостьаб

4 метода обеспечиваются обоснованным выбором процентного содержания и состава гелевого раствора: одновременный анализ нескольких проб обеспечивается тем, что каждый столб геля находится в идентичных условиях и дает совершенно точный результат, так как влияние на него, искажающее рэзультат, исключается.

Предмет изобретения, Спбсоб электрофоретического определения гликозаминогликанов путем електрофоретического разделения их в столбиках полиакриламидного геля с использованием гелеобразуюшего и електродного буферов я окрашивания фракций, о т л и ч а ю ш и йс я тем, что, с целью анализа гликозамвногликанов без предварительного выделе ния их в чистом виде, разделение ведут

5Ъ-ным полиахриламидным гелем с использованием концентрированного трио-солянокислого и трио-глицинового буферов, а окp&tUHSBIOT фракции 1%юным pGCTBODOM GllbIIH анового синего в 3%-ной уксусной кислоте.