Фагоустойчивый штамм 13-э внии бакпрепарат-продуцент энтобактерина

Фагоустойчивый штамм 13-э внии бакпрепарат-продуцент энтобактерина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБР ЕТЕ Н И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскнх

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к а вт. овид-ву— (22) Заявлено 3!.08,73 (21) 1958137/30-15 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.02.76. Бюллетень М 5 (45) Дата опубликования описания 15.07.76 (51) М.Kë. А 01 И 15/00

Государственный комитет

Совета й1иннстров СССР ло делам изобретений (53) УДК 576.851.51:

: 576.8.077.5 (088.8) и открытий (72) Авторы изобретения

Э. Р. Зурабова, Г. В. Кузнецова, Н. А. Рассомагина, Т. Е. Зискинд и А. С. Рыжкова (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств загциты растений и бактериальных препаратов (54) ФАГОУСТОЙ Ч И В Ы Й ШТАММ

BACILLUS THURINGIENSIS (CEREUS) ЧАК. GALLERIAE

13-Э ВИИИ БАКПРЕПАРАТ-ПРОДУЦЕНТ

ЭНТОБАКТЕРИ HA

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, а именно к штамм ам-продуцентам, используемым для производства энтомопатогенных бактериальных препаратов, применяемых в сельском и лесном хозяйствах для борьбы с вредными насекомыми.

Известен штамм Bacillus thuringiensis (cereus) var. galleriae, из биомассы которого приготавливают энтобактерин.

Однако этот штамм чувствителен к бактериофагам, встречающимся при производстве эитомопатогенных препаратов.

Цель изобретения — устранение указанного недостатка. Применение предлагаемого штамма при изготовлении энтобактерина позволяет избежать массового лизиса на производстве.

Штамм Bacillus thuringiensis (cereus) var.

galleriae 13-Э ВНИИ бакпрепарат выделен из погибших гусениц пчелиной огневки (Galleriae mellonella 1 ) во время естественной эпизоотии этого вредителя на пасеке в Дагестанской АССР, подвергнут селекции путем направленного улучшающего отбора, хранится в коллекции культур ВНИИ микробиологических средств защиты растений и бактериальных препарато в под _#_o 13-Э и имеет следующие морфолопическую и физиологическую характеристики.

Морфология. Крупные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно, парами и цепочками, на агаризованны: средах цепочки короткие. Размер клеток

1,6 — 1,8 х 3 — 6 лк.

П е р е т р и х и. Грамположительные, а также дают положительную реакцию Фельгена. Форма спораигиев, и спор овальная.

Морфологической особенностью является наличие белковых параспоровых токсических включений. Форма па распоровых тел — в виде ромбов с нечеткими сглаженными гранями или округлая.

Аэроб. По типу питания гетеротроф.

Культуральные и биохимические признаки.

Мясо-пептонный агар. Мягкий, гладкий, беловатый, матовый налет с волнистым краем.

Мясо-пептонный бульон. Образует кольцеобразную пленку.

На коагулированном желтке и на ломтиках картофеля дает рост, но пигмента не образует. Молоко свертывает и пептонизируст без образования пигмента. Не образует лицитиназу на яично-желтковых средах.

Образует уреазу на среде с мочевиной. Келатину разжижает.

Крахмал гидролизует.

Нитраты восстанавливает.

Не продуцирует термостабильный экзоток—

3Q син

501727

3 ,ю4

Источйики углерода. Использует глюкозу, сахарозу, эскулин, салицин, крахмал, мелассу, гидрол., Образует ацетилметилкарбинол из глюкозы.

Источники азота. Использует пелтон, ферментативные и кислотные гидролизаты беляка, дрожжевой автолизат, мясные и рыбные отзары и бульоны, кукурузный и пшеничный экстракты. Дает рост на кукурузной, соевой и гороховой муке.

Антигенные свойства. Относится к пятому (5) серотипу вида Bacillus thuringiensis Berliner.

Патогенные свойства. Обладает высокой

-.оксичностью .для тест-объекта — гусениц пчечиной огневми (Galleriae гпеllопеllа 1.) и других видов насекомых из отряда чешуекрылых (Lepidoptera). Штамм Bacillus thuringiensis (cereus) var. galleriae 13-Э ВНИИ бакпрепаоат устойчив к производственным фагам кульгуры Ва illus thuringiensis (cereus) var. galleг1ае.

П р и м ер. Для приготовления посевного материала споровую культуру в возрасте

6 — 7 суток псресевают с агарового,косяка на жидкую стерильную регламентно-,производственную среду, включающую кормовые дрожжи (2 — 3% ), полисахарид (1 — 1,5% кукурузной муки или 0,2 — 0,5% крахмала) с рН б,б—

7,0; либо на жидкую стерильную регламентнопроизводственную среду, включающую 4% кукуруз ного экстракта и 0,7 — 1% глюкозы с р Н вЂ” 7,0.

Бациллы выращивают 30 — 36 час при 28—

30 С глубинным методом в колбах на 750 мл

" 50 — 100 мл питательной среды на круговой качалке при интенсивной аэрации и перемешивании (220 — 240 об)мин).

Культура дает титр на обеих средах—

2 — 3 млрд спор и токсических включений в

1 мл среды. Полученную посевную культуру используют для засева ферментеров. 1 — 2 колбы жидкой посевной культуры используют для засева одного ферментера (700 л питательной среды) .

Ферментация длится 30 — 36 час при 30 С

" титром культуры 2 — 3 млрд спор и токсических включений в 1 мл культуральной жидкости. По окончании ферментации культуральчую жидкость сепарируют, полученную пасту

",иофилизируют, размалывают и смешивают с чаполнителем (например с каолином) до концентрации 30 млрд спор и токсических включений в 1 г сухого препарата.

Для определения биологической активности готовый препарат энтобактерин-3 скармливают гусеницам пчелиной огневки (Galleriae

mellonella 1 ).

Биологическая активность 1 %-ной водной суспензии энтобактерина,,приготовленного на фагоустойчивом штамме 13-Э, составляет 80%.

Формула изобретения

5 Фагоу стойчи вый штамм Bacillus thuringiens!s (cereus) var. galleriae 13-Э ВНИИ бакпрепа рат-,продуцент энтобактерина.

М о р ф о л о г и я. Крупные палочки с закругленными .концами, расположенные одиночно, парами и цепочками, на агаризованной среде цепочки короткие. Размер клеток

1,6 1,8х 3 — 6 мк.

П е р е т р и х и. Грамположительные, а также дают положительную реакцию Фельгена.

15 Форма спорангиев и спор овальная.

Мор фологической особенностью является наличие бел ковых параспоровых токсических включений. Форма параспоровых тел — в виде ромбов с нечеткими сглаженными гранями

20 или округлая. Аэроб. По типу питания гетеротроф.

Культуральные и биохимические признаки.

Мясо-пептонный агар. Мягкий гладкий, беловатый, матовый налет с волокнистым краем.

Мясо-пептонный бульон. Образует кольцеобразную, пленку. На коагулированном желтке и на ломтиках картофеля дает рост, но пигмента не образует.

Молоко свертывает и пептонизирует без образования пигмента. Не образует лецитиназу на яично-желтковых средах. Образует уреазу на среде с мочевиной.

Жел а тину р аз жижа ет.

ЗБ Крахмал гидролизует.

Нитраты восстанавливает.

Не продуцирует термостабильный экзотоксин.

Источники углерода. Использует глюкозу, 4о сахарозу, эскулин, салицин, крахмал, мелассу, гидрол. Образует ацетилметилкарбинол из глюкозы.

Источники азота. Использует пептон, ферментативные и кислотные гидролизаты белка, 45 дрожжевой автолизат, мясные и рыбные отвары .и бульоны, кукурузный и пшеничный экстракты. Дает рост на кукурузной, соевой и гороховой муке.

Антигенные свойства. Относится к пятому (5) серотипу вида Bacillus thuringiensis Berliner. ,Патогенные свойства. Обладает высокой токсичностью для тест-объекта — гусениц пчелиной огневки (Galleriae гпе1!опеllа L) и других видов насекомых из отряда чешуекрылых

Lepidoptera). Штамм Bacillus thuringiensis (cereus) var. galleriae 1З-Э ВНИИ бакпрепарат устойчив к производственным фагам культуры Bacillus thuringiensis (cereus) var. да l l er i а е.