Способ выделения кислой фосфатазы

Способ выделения кислой фосфатазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное и авт. св; д-зу— !т " (22) Заяв1ено 26.03.73 (21) 1898785/28-13 (51) Ч. Кл.- С 12 1Э 13/10

С 07 G 7,/028 с присоединением заявки—

Гасударственный комитет

Совета Министров CCCP по делам изобретений и открытий (23) Прпорпте-;— (53) УДК 577.15.07 (088 8) 1 з) Оп\;б 11 1. онаllo, 5 02 76 Q " 1 . Tе,;ь 1 0

1 ) (45) ДBTB OIIu блпкова 1ия OIIHCBHIIH 30.07.76 (72) AIITOpbl изобретения В. Г. Кирсе, А. A. Пииие, C. Я. Скуиня, А. М. Ирген и Р. Я. Радзиия (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного

Знамени научно-исследовательского института химических реакт1лвов и особо чистых химических веществ «ИРЕА» (54) СГ1ОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ КИСЛОЙ с1 ОСФАТАЗЫ

25

Изобретение относится к микробиологической промышле н ности, а именно к способу выделения кислой фосфатазы, применяемо11

B Hccëåäîâ Bòåëücêoé работе,и в клинической биохимии. 5

Известегн способ, выделения кислой фосфатазы из мицелия плесневых грибов Aspergil lus r1yTeM sxcT!paI

С целью расширения сырьевой базы для 10 получения высокоактивной .кислой фасфатазы с павышенгной активностью предложено выделение фосфатазы осуществлять из плесневых грибов, относящихся к виду Aspergillus 1еrreus. При этом лз плееневых грибов 15 вида Aspergil lus terreus èñïîëüçóþò п родуценты итаконозой,кислоты.

Способ заключается в следующем.

Мицелий отделяют от питательной среды, размельчают, экстрагируют водой в интервалах рН 4 — 7, при этом отношение мицелия к экстрагенту равно 1: 4. Осаждение кислой фосфатазы проводят одним из осадителей: сернак1лслым а|ммонием в пределах насыщения 50 — 80%, метанолом, этанолам, пропанолом пр1 70% концентрации.

Полученный осадок цент рифугируют при

0 — 5 С. Г1ри осаждении сернокислым аммо,нием проводят диализ с последующей лиофильной сушкой; при осаждении спиртами осадок лиофилизируют.

Применение микрооргBнизмов рода Aspergillus terreus в качестве .продуцента кислой фосфатазы позволяет использовать оТходы и таконозой кислоты для промы шл ел ного производства кислой фосфатазы в широких ма сштабах на легкодоступном сырье нз мнкроо,рганизмов.

Пример 1. 0,5 кг 13-дневного мпцелия отделяют от гитательной среды, промывают водой. Мицелпй высушивают и обрабатывают два раза 10 л холодного ацетона (5 С).

Ацетон отделяют, мицелий высушивают в течение 1 час. Мицелий гомогенизируют и проводят экстракцmю с водой (рН 6,0) в течение

1 час при 5 С. Ф ракциани рованно осаждают белок сернокислым амманием.

П р H м е р 2. 0,4 кг мицелия в конце цикла брожения итаконавой кислоты отделяют от культуральной жидкости и размельчают. Экст рагируют в течение 1 час lIpll KQMHBTlHoII TeuIllepaTyipe (25 С) с водой. Мицелпй отделяют .и белок осаждают сернокисл ы и аси мани ем при насыщении 50 — 80%ным. Диализируют и лиофилизируют.

Выход — 0,15 г, активность — 1,5 ед/л1г препарата, 3,6 ед/мг беляка.

П p:им ер 3. 0,4 кг 12-дневного мицелия отделяют от питательной среды,и размельчаФормула изобретения

Состазитель М. Ларина

Техред Е. Подурушина

Редактор Л. Гончарова

Корректор В. Гутман

Заказ 715/898 Изд. № 300 Тираж 551 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, К-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип, Харьк. фил. пред. «Патент» ют. Экстр акцию проводят при 5 С в течение

l час в. 0,1 М фоофатном буфере (рН 7,8). Твердую фазу отделяют, и оглох о"aждают

íaсыщенным ра створам до 80% cepfHокислым аммонием. Диализи руют и лиофилизируют.

Выход — 0,20 г, активность — 3,6 ед/мг

1.peIIaipara, 6,5 ед/мг белка.

П р и и е р 4. 0,5 кг 8-дневного мицелия отделяют от культуральной жидкости и размельчают. Экстрагируют при 5 С 1 час в фоофатгном буфере (1 М), рН 7,5 и осаждают белок этиловым спи ртом — 50% 4 80%.

Осадок лиофилизируют.

:Выход — — 0,2 г, активность — 1,9 ед/лаг препарата, 3,0 ед/лг белка. 15

Пример 5. 0,6 кг 4-дневного мицелия огделяют от питательной среды, промывают два раза водой, а затем деми нерализованной водой и гомогенизируют. Экстракция происходит при 5 С в течение 1 час в воде, подкисленной,до рН 2,5, и осаждение беляка ведут при насыщении сернокислым аммонием до 50% и 80%. Диализируют и лиофилизирую т. .В ы ход — 0,25 г, а кти в ность — 1,5 едlмг пре aoàòà, 2.5 ед/иг белка.

Пip,игм е р 6. 0,5 кг 10-дневного мицелия отделяют от питательной среды и гомогенизи руют. Зкстрак цию проводят в деминерализова нной воде при рН 6,0 и 5 С в течение

1 час, После экстракции доводят рН экстракта до 5,0 1 н NaOH. Белок осаждают до

80% насыщения сухим сернокислым аммонием.

Ди ал изи руют и лиофилизируют.

Выход — 0,15 г, активность — 2,4 ед/л г препарата, 4,0 едlмг белка.

1. Способ выделения кислой фосфатазы из .4ицелпя плесневых грибов Aspergillus путем экстракции и осаждения фермента из полученного экстракта, отличающийся тем, что, с целью расширения сырьевой базы, выделение фоофатазы осуществляют из глеоневых грибов, относящихся к виду Aspergillus terreus.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что из;плесневых грибов вида Aspergillus terreus используют продуценты итаконовой кислоты.