Способ получения ингибитора амилазы

Способ получения ингибитора амилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С- А Н И Е „„ во4вой

ИЗОБРЕТЕЙ ИЯ. Союз Советсмик

Социаяистммеских

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 23.02.73 (21) 1885530/28-13 (51) М. Кл.

С 12П 13/00 (32) 01.03.72 (23) Приоритет

Гасударственный комитат

Сааата Министроа СССР на данам изобратаний н атирытий (3!) Р 22 09 833.5 (33) ФРГ (43) Опубликовано 25.02.76 Бюллетень №7 (53) УДК

6 15.3 (080.8) (45) Дата опубликования описания 30.04.76

Иностранцы

Вернер Фроммер, Вапьтер Пульс я Дельф Шмидт (ФРГ) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма

"Бай еуйАГ" (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА АМИЛАЗЫ

Изобретение относится к области фармацевтической промьццпенности.

Известен способ попучения ингибитора

1амипазы из фипьтрата купьтуральной жид-! кости Ас пор ал.о:сеет SE б0,выращенной на среде, содержащей крахмал (2%). Культурапьная жидкость содержит 30 00040 000 едияиц ингибитора амипазы в 1 мп, ;а саМые чистые препараты имеют удельную . P. 6

" активность 3-8 10 единиц ингкбитора амипазы на 1 г.

UeIIь Iизобретения — повышение удельной активности и выхода пепевого продукта.

Дпя этого куль гуру Дс1ьгьоу а,пасееттЯ

50/13 выращивают на среде, содержащей

2-6% крахмапа.

Пример 1. (одержашуюся в колбе

Зрпе1,мейера емко<.тью 1 и жидкую питатепьную среду в копии»стае 120 мп, состоящую

20 из 2% крахмапа, 1Ъ гпюкозы, 0,5% продук гга гидропиза ка»ица, 1% дрожжевого экст ракта, 0,4% СаСО (стерилизация: 30 мин

3 о при 121 С, зц; г»пп» рЦ до стерилизации посредством КОН у< гацавпивают на 7,2), 25 заражают 1 и предварительной культуры из .штамма SE 50/13, полученного в жидкой питатепьйой среде с составом 3% глицерина, 3%соевой муки, 0,2%СаСО (стерилизация:

3 о, 0 мин при темперагуре 121 С, значение рН послес терилизации 7,2) и инкубируют в вибрапи, ° г. о онной машине для взбаптывания при 28 С. После ферментации в течение 3 дней полу- чают купьтуральный бульон, содержащий 55 000 А1 Е/мл. с

Пример 2. Также как и в примере, 1, но с применением жидкой питетепьной ,среды, содержащей 5% крахмапа, 1% дрожжевого экстракта, 0,2% К НРО . Попуча2 4

tIoT купьтурапьный бульон, содержащий

l108 000 А1Е/мп, П р H м е р 3. Жидкую нитатепьнут среду с составом 4% крахмапа, 0,7% дрож(жевого экстракта, анапоги шо примеру 1,,:заражают штаммом Е 50/13 и получают ,IIocJIe ферментации 3 дней купьтурапьный бульон с 80 000 А1Е/мп.

504502

СоставитеЛь В. Остапчук

Редактор !1. Козлова ТехредА. Демьянова. Корректор Л. Тромбола

Заказ 110

Тираж 551

Подписное

1(1!11111!И Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

1l. 3035,Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Фнлилл Г1!И! "Патент, r. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Пример 4. Жидкую питательную среду, содержащую 6%> крахмала, 1,3% дрожжеййчъ экстракта, 0,2% К НРО аналогич-

:4о примеру 1, заражают штаммом Е 50/13,1

После ферментации в течение 4 дней полу-: чают культуральный бульон с 120 000

A1E/мл, ° Пример 5. 6 л культурального булЬ- она (105 10 А1Е/л, общая активность ф

6

630 . . 10 A1E) после охлаждения Щь о

20 С с помощью полуконцентрироваиной

Hll0 устанавливают на значение рН 2,5, 3

l6 .добавляют 30 г высокоактивного угля для

Обесивечивщщщ и перемешивают в течение

10 мин, Затем в течение 15 мин центрифугируют при 10 000 об/мин, и полученный прозрачный светло-желтый остаток

j(5,1 л, 100 10 А1Е/л, общая актив, ность 510 10 А1 Е ) после нейтрали

1 6

Ванин С Н3 сгущают де 500мл (970 10

-- ь----6 ф

AlE/ë,îáùàÿ активность 485 .х 10 А1Е).

500 мл концентрата в течение 45 мин. размешивак1т с 200 г исскуственной смо:лы „AmberCite 3RA 410 С1, отсасыва» т иа нутче и лобаиляют 4/б объема (4OCl g .мл метанола) для осаждения главного

: количества более высокомолекулярных про дуктов раэложения кракмала (вместе с

, ймеюшимися еще остатками активного угля). б

В течение 5 мин. центрифугируют при

5000 об/мин. Отстоявшиеся 650 мл ос6 татка (450 х 10 Л1F/л, общая актив6 ность 380 к 10 AlE) интенсивно размешивая, вкапывают в 4 л сухого спирта.

Белый, .хлопьевидный осадок отсасывают ,на нутче, 3 раза промывают сухим спиртом и,;два раза простым эфиром, и при

50 С высушивают в вакууме. Быход: 36 r. !

6 белого порошка с 10 х 10 Л1Е (об(цая

,активность 360 х 10 A1E) - 57% выхода (в пересчете на активность).. Формула изобретения

Способ получения ингибитора амилазы путем выращивания культуры родаkct(поу-!

8а.паеаеп на среде с крахмалом и последующим выделением целевого продукта, о т л и ч а ю (и и и с я тем, что, с целью повышения удельной активности и выхода целевого продукта, культуру Actiaop8awacjga,M50/13 выращивают на. среде, содержа(цей 2-6% крахмала.