Способ получения рибонуклеозид-5монофосфатов

Способ получения рибонуклеозид-5монофосфатов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Ъ г;г: гну

". - .1, ОПИСАНИЕ 4 (н1 50478

Йоаз Советский

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 22,03.74 (21) 2007018/23-4 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 28.02.76. Бюллетень ЛЪ 8

Дата опубликования описания 12.05.76 (51) М. Кл С 07Н 19/02

Государственный комитет

Созвтв Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 547.963.6.02 (088.8) (72) Авторы изобретения

И. И. Колодкина, H. Н. Калинина, Е. И. Пичужкина, H. Г. Сурикова и А. М. 1Оркевич

Всесоюзный научно-исследовательский витаминный институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ Р И БОН УКЛ ЕОЗ ИД-5 МОНОФОСФАТОВ

Изобретение относится к усовершенствованному способу получения соединений, которые находят применение в биохимии.

Известен способ получения рибонуклеозид5 -монофосфатов фосфорилированием соответствующих рибонуклеозидов с предварительной защитой 2, 3 -цисдиольных гидроксильных групп рибонуклеозидов, не участвующих в образовании фосфодиэфирных связей. Чаще всего для этих целей используют 2, 3 -0-алкилиденнуклеозиды.

Однако известный способ обладает рядом существенных недостатков, основным из которых является трудность удаления защитной группировки, проводимой в жестких условиях, приводящих к получению побочных веществ.

Вследствие этого требуется дополнительная очистка целевого продукта.

Предлагаемый способ позволяет упростить технологию получения целевого продукта за счет использования в качестве промежуточ ых соединений арилборных эфиров уклеозидов.

Описываемый способ получения рибопуклеозид-5 -монофосфатов заключается в том, что рибонуклеозиды обрабатывают арилоорпой кислотой в полярных растворителях, например диоксане, пиридине или дпметплформампде, после чего полученные арилборпые эфиры подвергают фосфорилировапию, удалению защитной группы водой и выделению целевого продукта известным методом.

Как правило, в качестве фосфорилирующих агентов используют P -дифенил-P -морфолидопирофосфохлорид в диоксане или Р-цианэтилфосфат или 2-цианэтилфосфат в пирпдинс.

Пример 1. К раствору 5,5 r безводной дифенилфосфорной кислоты в 40 мл диоксана прибавляют при размешивании 4,5 г морфолидофосфодихлорида и 3,2 мл 2,6-лутидина.

Спустя 15 мин добавляют фепплборный эфир аденозина в 12 мл диоксана (получен нагреванием смеси 6,2 r аденозипа и 3.06 г фе илборпой кислоты в диоксане; может быть выделен в аналитически чистом виде с выходом 95% последующей упаркой диоксана и добавлением 10-кратного количества серного эфира) и смесь оставляют при перемешивапии при 18 — 20 С на 48 час. В этих условиях ре2О акция сопровождается количественным и избирательным фосфорилированием первичной гидроксильной группы нуклеозидов (хроматографическпй контроль пробы после предварительного гидролиза в системе: этанол — 0.5М

2з ацетат аммония, насыщенный бурой = 5: 2).

Затем —,oáàâëëþò 300 мл воды (р11 раствора

1,6 — 2,0) и размешивают 4 час при 30 — 40 С до полного гидролиза P — N u P — С1-связей образующегося при фосфорилированпи аденоЗ зин-5 фосфоморфолидхлорпда. (Анализ т. с.

504784

Составитель В. шестков

Текред 3. Тараиенко корректор М. Лейзерман

Редактор Е. Шепелева

Заказ 916/14 Изд. No 1149 Т Г1одпис изе

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, )l(-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 хроматографией в системе: «цетоп — n.-бутанол — Н О = 8: 1: 1). Полученный раствор нейтрализуют 3%-ным раствором аммиака до рН 6,0 и помещают при 5 — 8 С íà ovëàæäàемую колонку со смолой КУ-2 (Н+) (6,0;С

X5,30). Колонку промываютводой от примесей фосфорной, дифенилфосфорной и фенплборпой кислот. Аденозин-5 -монофосфат элюируют в виде аммонийпой соли 1%-ным раствором аммиака. Выход 75 /о (спектрофотометрическое измерение). Раствор аммонийной соли упаривают до концентрации нуклеотидного материала 15 — 20 /о и подкисляют 10%-ный соляной кислотой до рН 1,8. Выпавший при охлаждении осадок отфильтровывают, промывают водой. спиртом, высушивают в вакууме при 40—

45 С. Получают около 3 г (58 — 60/о) аденозин-5 -монофосфата; содержание основного вещества 98,5 — 100%, примеси исходного нуклеозида и изомерных нуклеозид моно- и дифосфатов отсутствуют (хроматографический и электрофоретический контроль); примесь

РО4" и CI -ионов не превышает 0,1 /о, Прим е р 2. К раствору 1,25 г дифенилфосфорной кислоты в 10 мл диоксана прибавляют

I,03 r морфолидофосфодихлорида и 0,7 мл 2,6лутидина. Через 15 мин добавляют 1,3 r и-толилборного эфира аденозина (получен из

1,04 г аденозина и 0,54 г п-толилборной кислоты аналогично эфиру фенилборной кислоты; при выделении в чистом виде выход составил

91 ) и оставляют при перемешивапии и 18—

20 С на 48 час (контроль окончания реакции хроматографический) . Обработка продукта реакции аналогична примеру 1. Выход адено10 зин-5 -монофосфата составляет 55%. Содержание основного вещества 98,5 .

Формула изобретения

Способ получения рибонуклеозид-5 -моно15 фосфатов фосфорилированием соответствующих рибонуклеозидов с предварительной защитой гидроксильных групп и последующим выделением целевого продукта известным способом, отличающийся тем, что, с целью

20 упрощения процесса, рибонуклеозиды обрабатывают арилборной кислотой в полярных растворителях, например диоксане, пиридине, или диметилформамиде, после чего полученные арилборные эфиры подвергают фосфорилиро25 ванию с последующим удалением защитной группы обработкой водой.