Способ получения ингибитора сахаразы

Способ получения ингибитора сахаразы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИС

АНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 505377

К AATHHIV (61) Дополнительное к патенту (22} Заявлено 23.02.73, (21) 1885528/28 — 13 (23) Приоритет — (32) 01.03.72 (31} Р 22 09 8346 (33) ФРГ (51) М. Кл. С 12 О 9/00

Гасударственный камхтат

Савета Мкиавтрав СССР ао делам изобрвтанкй и открытий (43) Опубликовано 28.02.74. Бюллетень № 8 (53) УДК

615 779 94(088 8) (45} Дата опубликования описания20.07.77

Иностранцы

Вернер Фроммер, Вальтер Пульс и Дельф Шмидт (ФРГ) Иностранная фирма

"Байер АГ" (ФРГ), (72) Авторы изобретения (71) Заявитель. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИНГИБИТОРА САХАРАЗЫ

1 Изобретение относится. к области медицйньт, в, частности к способу получения ингибитора саха. разы, которая мохмт быть испольэовала как терапевтическое средство при лечении некоторых заболеваний, например ожирения, гиперлипемии (атериосклероз), диабета, нредцабета, кариеса.

Известен способ получения ижибиторов rmoкоэидаз (в том числе и ингибитора сахаразы) из фильтрата культуральной жидкости Actinop fa

naca SE 50.

Однако получение ингибитора сахараэы по такому способу затрудняется значительным коливством ингибитора амилазы в культуральной жидкости.

Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта.

Это достигается тем, что выращивание осуществлятот на бескрахмальной среде, дополнительно содержащей мальтозу. Питательная среда беэ крахмала подавляет ингибитор амилазы.

По предлагаемому способу питательная среда имеет следующий состав (%): глюкоза 35, гидролизат каэеина 0,5, экстракт дрожжей 1,3, К> НРО4 0,3, . СаС03 0,3. Перед стерилизацией посредством КОН устанавливают рН 7,8. Выход ингибитора сахаразы

:повышают добавлением к питательной среде мальтозы.

Культйвирование прекращают незадолго до достижения или по достижении. оптимального содержания ингибитора сахараэы.

Ингибитор сахаразы получают из ферментиро ванных литательных бульонов концентрацией до .1/10 — 1/20 исходного объема. с последующей лиофилизацией или осамдением коицентрирован1е;ного раствора с 4-10 объемньтьвт частями оргаяческого растворителя, например ацетона, или адсорбцией из нейтральной питательной суды ингибирующего действия на 0,5-4 o, предпочтитель;но 1 — 2 o активированного угля и последующей

15 десорбцией с водными спиртамн или ацетоном при кислых значениях рН (2-3).

Затем десорбат упаривают в вакууме до 1/50!

l/200 исходного объема (питательной среды) и .осаждают органическим растворителем, например ацетоном. Для получении более чистых препаратов проводят предварительную адсорбцию загрязняющих питательную среду коричневых красителей на активнрованном угле в количестве 1 — 2% при

25 кислом значении рН.

505377

11,2

8,8

363

11,3

0,5

12,7

614

479

383

13,6

688

1,0

12,5

12,7

725

15,7

337

1,3

678

1,8

14,4

16,6

15,5

16,8

287

2,2

Для использования в медицинских целях препарат.- может быть изготовлен в форме таблеток, драже, капсул, растворов, суспенэий, гранулятов, эевательных резинок, зубных паст. Он может применяться и как добавка для пищевьж am âêóñî. вых продуктов. Дозировка 100 — 10 000 SiE, принимают один или несколько раэ. до или во время еды.

Пример 1. Литровую колбу Эрленмейера наполняюь 120 мл жидкой питательной среды, содержащей (%):

Глюкоза 3,5

Гндролизат казвина 0,5 Экстракт дрожжей 1,3:

СаСОз 0,3

Кз НР04 0,3.

Пример 3. Литровую колбу Эрленмейера наполняют 120 мл питательной среды, содержащей (%):

Гщоко за, . 3,0

Мальтоза 1;О

Гндролизат каэеина 0,5

Дрожжевой экстракт . 1,3

СаСОз . 0,3

КзНР04 . ОЗ

Значение рН 7,2 перед стерилизацией посредством Na СОа устанавливают в течение 30 мин. ,Стерижгэуют при 121 С с 4 мп трехдневной предварительной культуры штамма SE 50 в питательной среде, состоящей иэ 3% глицерина, 3% соевой муки, 0„2% СаСОз, полученной инкубированием в вибрационной машине при температуре до 28 С. Получают культуральный бульон, содержащий после четырехдневной иикубации при 24 С 22SiE/мл и

500 Ai Е/мл.

П р и м е.р 4, 1 л ферментированной аналогично примеру 3 темно-коричневой питательной среды (21 000 Si E/ë) посредством полуконцентрированЗначение рН-7,8 устанавливают перед стерилизацией при помощи КОН. Стерилизацию проводят

ЗО мин при 121 С с 4 мл трехдневной предварительной-культуры штамма SE 50 в литательной среде:

5 - содержащей 3%- пщерина, 3% соевЪй муки, 8,2%

СаСОз и полученной инкубированием в вибрационной машине нри 28оС, Получают культуральньй бульон, содержащий после трехдневной инкубации при 24 С 9,1 SiE/мл и 240 AiE/ìë и после четы10 рехдневной инкубации — 10,4 Si E/ìë и 675 Ai Е/мл.

Пример 2. К питательной среде по примеру 1 добавляют мальтозу. в различных концентрациях, прививают и инкубируют согласно примеру1 и у получают SiE/мп и AiE/ìë, в количествах, приведенньи.в таблице.: ной азотной кислоты доводят до рН 2,5, добавляют

4о- 10г активированного угля, 10г фильтровального ,. Э вспомогательного вещества "клярцель" и размешивают 10 мин. Отсасывают на путче, снабженном .слоем клярцеля 1 — 2см высоты, и нейтрализуют фильтрат аммиаком. Фильтровальный осадок

45 удаляют. К нейтральному фильтрату добавляют

1,5% активированного угля и размешивают в течение 10 мин, затем снова отсасывают íà путче.

Фильтрат содержит еще -10% активной сахаразы и его выбрасывают. Если хотят испольэовать также и зту остаточную активность, то адсорбируют еще раз с 0,5% активированного угля и остатки угля соединяют. Сохраняющий активность сахараэы . остаток угля промывают небольшим количеством воды и затем размешивают 3 раза по 10 мин с

55 50 мл 50 .ного ацетона со значением рН 2,5 (HCf) для десорбции активности. Каждый раэ отсасывают на путче и соединяют эти три адсорбата. В ротационном испарителе упаривают на 10 мл и, размешивая, добавляют вязкий концентрат с тем же объемом

60 (10мл) метанола. Выпавший осадок центрифуги-

505377

Составитель С. Малютина

Техред М, Левицкая

Редактор Н. Спиридонова

Корректор С. Шекмар

Тираж 574 Подписное

llHHHIIH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открьггнй

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д, 4/5

Заказ 955/504

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 руют. Прозрачный желто-коричневый 50 o-ный метанольный раствор вкалывают, размешивая, в .250 мл абсолютного ацетона. Выпавший осадок отстаивают, после декантирования темно — желтой верхней фазы поглощают абсолютным ацетоном и промывают. Отсасывают на нутче и еще каждый раз промывают абсолютным ацетоном и эфиром. Затем сушат в вакууме при комнатной температуре.

Выход 850 мл с 12 500 SiE/ã (51% в пересчете на единицы в культуральном бульоне), Формула изобретения

1. Способ получения ингибитора саха йзы путем выращивания культуры Actinoplanaceen, SE 50 на среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, с последующим выделением целевого продукта т о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что с целью повышения выхода целевого продукта, выращивание осуществляют на бескрахмальной среде.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что среда дополнительно содержит мальтозу.