Штамм плесневого гриба и-476-76-а-продуцент -амилазы

Штамм плесневого гриба и-476-76-а-продуцент -амилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

{») 5Î6618

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

{61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 11.03.74 (21) 2003543/28 — 13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 15.03.76. Бюллетень № 10 (4б) Дата опубликования описания 20.07,77 (51) М. Кл

С 12 О 13/10

С 12 К 3/00

Государственный номнтет

Совета Министров СССР

ll0 делам изобретений н открытий (53) УДК

577.15.08. (088.8) А, А.Шилова, К. А. Калунянц и А. М. Танатар (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) Заявитель (54) ШТАММ ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА ASPERGillUS 0RYZAF

И вЂ” 476 — 76-А — ЙРОДУЦЕНТ а — АМИЛАЗЪ|

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение в ферментной, спиртовой, хлебопекарной промышленности.

Известны различные штаммы плесневых грибов

Asperg illus oryzae И вЂ” 476, Aspergiilus oryzae 5

740A„Aspergi l lus oryzae 4/8 и другие, характеризующиеся способностью продуцировать а — амилазу и активную протеиназу. Эти штаммы обладают обильным конидиеобразованием, что приводит к загрязнению окружающего воздуха. Все они чувст- 10 вителйтьт к температуре 37 — 40 С.

Наиболее близким к заявляемому штамму является Aspergi llus oiyzae И вЂ” 476. его активность а — амилазы составляет 280 — 350ед/г, цикл разви: тия 48 — 50 ч. 15

Для увеличения его термостойкости в качестве мутагенного фактора для воздействия на конидии гриба использовали прием воздействия высокой тем. перату рой, Предлагаемый штамм плесневого гриба Asper.- оо

9illus oryzae И вЂ” 476 — 76 — А был получен в результате действия температуры 100 — 120 С при давлении 1 атм в автоклаве на конищ и гриба Aspergil lus

oryzae И вЂ” 476 — 76 в колбах в слое среды 1,5 — 2 см в .течение 40 — 60 мин. 25

Затем обработанные конидии переносили на свежую стерильную питательную среду (суслоагар, пшеничные отруби) и проращивали при 30 С в течение 15 — 20 суг. Культивировали штамм в поверхностных условиях на пшеничных отрубях при 30 С (оптимальная температура роста).

Активность а — амилазы составляет 450 — 500 ед/г (по колорнметрическому методу ОСТ 59 — 3 — 71)

Морфологические и культуральные признаки штамма.

Конидиальные головки большие радиальные, конидии раздельные, Конидиеносцы длиной 2 мкм и более, шириной 10 — 20 мкм, Пузыревидные вздутия имеют шаровидную или слегка удлиненную форму 16 — 29х15,2 — 29,2 мкм.

Стеригмы однорядные, удлиненные, цилиндрические. Конидии шаровидные с гладкой оболочкой, их диаметр от 3 — 4 до 8 — 12 мкм.

Конидиальные головки, шаровидные или слегка удлиненные размером 20 — 50 х 25 — 65 мкм.

Гифы бесцветные. В поперечинке они имеют 4,4 — 8,2 мкм.

На минеральной твердой среде Чапека с 6% крахмала н 10% солодовых ростков образует быстрорастущие колонии; на третьи сутки роста коло506618 путем экстракции водопроводной водой при 30 С и осаждения органическими растворителями, напри.1 О мер этиловым спиртом крепостью 76 — 78

ЗО

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 нии достигают в диаметре 4,5 см, на 5 — б сут 6,57,0 см.

Мицелий белый,. пушистый, слегка клочковатый. Обратная сторона колоний бесцветнаясжелтоватым оттенком, радиальноскладчатая 5

При созревании конидии дают бледно — эеленоватьй, слегка желтоватый тон, Мицелий и агар не окрашены, Органическая среда. Сусло — агар. Колонии круглые, пушистые, выпуклью с длинным воздуш- 10 ным мицелие м.

Мицелий бельщ, ушистый,слегка клочковатый.

Обратная сторона колоний гладкая. Конидии круглые с оболочкой светло — зеленоватого цвета. Конидиеобразование слабое. 15

Пшеничные отруби. К 30 — 36 ч культивирования без аэрации слой пшеничных отрубей высотоюю 1,5 — 2 см превращается в плотный корм, полностью проросший мицелием, конидии почти отсутствуют. 20

Штамм Aspergi I lus oryzee И вЂ” 476 — 76 — А сильно гидролизует крахмал, разжижает желатину и пептонизирует молоко. Потребляет нитратный, аммонийный азот и аминокислоты.

Оптимальная влажность среды 62 — 65% и опти- 25. мальное значение рН=6,0 — 6,5.

Предлагаемый штамм аконидиален, не загряз,. няет окружающей среды. и, следовательно, не описан как источник профессиональных заболеваний, Он растет и при 37 — 40 С, сохраняя свою фермен. тативную активность на 40 — 50% (в сравнении с контролем}.

Наряду с а — амилазой он продуцирует протеиназу, мальтазу, следы. липазы, фосфатазы, глюкоамилазы. Трансгликозилазу не продуцирует. 35

Пример использования штамма для получения а — амилазы.

Культуру Aspergil lus oryzae 476 — 76 — А выращивают на первом этапе в пробирке со скошенной средой сусло — агар следующего состава: пивное сусло крепостью — 8 Баллинга и 2% агар — arapa.

Среду стерилизуют при 0,5 атм в тече-. ние 30 мин. Выращивание производят в течеme 34 сут при 30 С, Данная культура является посевной. На втором этапе эту культуру выращивают в колбах.

В качестве питательной среды используют пшеничные отруби с влажностью 65%, слой 2 см. Среду стерилизуют при 1 атм в течение 1 ч. Посев в колбы со средой производят водной суспензией конидтй с 50 агаровой среды в количестве 0,5% к весу воздушно — сухих отрубей. Дли тел ьнооть культивирования Збч.

Активность готовой культуры составляет 400

500 ел/г (АС) по колориметрическому методу 55 (ОСТ 59-3 — 71).

Далее вьщеление ферментного препарата а — амилазы иэ поверхностной культуры производят

ЦНИИПИ Заказ 955/504

Формула изобретения

Штамм плесневого гриба Asperg illus oryzae

И вЂ” 476 — 76 — А — продуцент 0, — амилазы.

Штамм хранится в коллекции культур Всесоюзного научно — исследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов за И ЦМПМà — 73.

Морфология.

Конидиальные головки большие радиальные> конидии- раздельные, кенидиеиоа ьъразьаером 2 — 10" х 20 мкм. Пузыревиднью вздутия имеют шаровидную или слегка удлиненную форму размером 16 — 29 х 15,2 — 29,2 мкм.

Стеригмы однорядные, удлиненные и цил. дрические. Стеригмы чаще расположены на верхней части пузыря, конидии шаровидные с гладкой оболочкой, диаметр их от 3 — 4 до 8 — 12 мкм.

Конидиальные головки шаровидные или слегка удлиненные размером 20 — 50 х 25 — 65 мкм.

Гифы бесцветные, в поперечнике имеют 4,4—

8,2 мкм, иногда утолщены до 9 мкм.

Культуральные признаки.

На минеральной твердой:среде Чапека c6% крахмала и 10% солодовых ростков на третьи сутки роста колонии достигают в диаметре 4,5см, на пятые — шестые сутки 6,5 — 7,0 см.

Мицелий белый, пушистый, слегка клочковатый. Обратная сторона колоний бесцветная с желтоватым оттенком, радиально — складчатая. При созревании конидии приобретают бледно — зеленоватый, слегка желтоватый цвет.

Мицел и и агар не окрашиваются.

Органическая среда. Сусло — агар. Колонии круглые, пушистые, выпуклые с воздушным мицелием. Последний белый, слегка клочковатый.

Обратная сторона колоний гладкая. Конидии круглые с оболочкой светло — зеленого цвета, Конидиеобразование слабое.

Пшеничные отруби. К 30 — 36 ч,культивирования без аэрации слой пшеничных отрубей высотою 1,5 — 2 см превращается в плотный корж, полностью проросший мицелием, конидии почти отсутствуют.

Крахмал гидролизует.

Желатин разжижает.

Молоко пептониэирует.

Отношение к источнику углерода. Ассимилирует крахмал, декстрины, мальтозу, хуже — глюкозу, Отношение к источнику азота. Потребляет нитратный и аммонийный азот, а также аминокислоты.

Тираж 574 Подписное