Способ выделения и очистки фибринолитического препарата

Способ выделения и очистки фибринолитического препарата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Социалистических респуолии

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 14.08.74 (21) 2054341/28-13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.03.76. Бюллетень № 10

Дата опубликования описания 25.05.76 (51) М. Кл. С 12D 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР де делам изобретений и открытий (53) УДК 577.15.08 (088,8) (72) Авторы изобретения

Н. С. Егоров, М. Аль-Нури, Н. А. Баранова и В. Г. Крейер (71) Заявитель

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного

Знамени государственный университет им. М, В. Ломоносова (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ

ФИ БР И НОЛ ИТИЧ ЕСКОГО П РЕПАРАТА

Формула изобретения

Предлагаемое изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к ферментной.

Известен способ получения фибринолитического препарата, например, из культуральной жидкости гриба Asp. terricola, предусматривающий добавление в культуральную жидкость сульфата аммония, отделение полученного осадка, растворение его с последующим диализом раствора, пропускание его через ионообменную колонку и высушивание.

Недостатками известного способа являются

его трудоемкость, применение нестандартных ионообменников и получение препарата со сравнительно низкой активностью.

По предлагаемому способу для упрощения процесса выделения и очистки растворение осажденного сульфатом аммония осадка осуществляют в трис-Н-буфере, диализуют раствор против этого же буфера, а в качестве ионообменника используют ДЭАЭ-целлюлозу, уравновешенную тем же буфером. Целесообразно использовать трис-Н-буфер в концентрации 0,025 — 0,035М.

Предлагаемый способ выделения и очистки фи бринолитического препарата поясняется чримером.

Белки из 5 л культуральной жидко=тп с . тиномицета осаждают сернокислым аммо и:..;. при насыщении 0,9. Осадок белка от;: .. я о; центрифугированием и растворяют в 100 мл

О,ОЗМ трис-Н-буфера, рН 8,7. Удельная фибринолитическая активность белка 100 мкг тир/мг белка за 15 мин. Раствор белка диализуют против того же буфера в течение 24 час при 4 С. Отдиализованный раствор белка пропускают через ДЭАЭ-целлюлозу, уравновешенную О,ОЗМ трис-Н-буфером, рН 8,7. Пигменты и неактивные белки сорбируются на

10 ДЭАЭ-целлюлозе, а в элюате остается 250 мг белка (5% ) с удельной фибринолитической активностью 1500 мкг тир/мг. При сорбции белков на ДЭАЭ-целлюлозе, уравновешенной буфером с полярностью, ниже 0,025М или вы15 ше 0,035М, теряется фибрионолитический фермент и обнаруживается высокая казеинолитическая активность в элюате. Очищенный раствор препарата лиофильно высушивают и хранят при температуре не выше 4 С.

1. Способ выделения и очистки фибриноли26 тического препарата, например, из культуральной жидкости, предусматривающий добавление в культуральную жидкость сульфата аммония, отделение полученного осадка, растворение его с последующим диализом

30 раствора, пропусканием его через ионообмен506619

Составитель П. Бонариев

Техред Г. Андреева

Корректор М. Лейзерман

Редактор Л. Василькова

Заказ 1124)5 Изд. № 1186 Тираж 593 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ную колонку и высушивание, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрощения процесса выделения и очистки, растворение осадка осуществляют в трис-Н-буфере, диализуют раствор против того же буфера, а в качестве

4 ионообменника используют ДЭАЭ-целлюлозу, уравновешенную тем же буфером.

2, Способ по п. 1, отлич а ющийс я тем, что трис-Н-буфер используют в концентрации

5 0,025 — 0,035M.