Способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту ( )

Способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту ( )

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(ii) 506623

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Соввтокик

Социалистических

Респфчик (61) Дополнительное к авт, свид-ву (51) М. Кл.2 С 12К 1/04

А 01Н 5/00 (22) Заявлено 20.03.73 (21) 1896306/30-15 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 15.03.76. Бюллетень № 10

Дата опубликования описания 12 05.7б

Государственный комитет

Совета Министров СССР

flo делам изобратанкй и открытий (53) УДК 620.186:582..796 (088.8) (72) Авторы изобретения

B. П. Ланецкий и Л. П. Поспелова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИРОВАНИЯ УСТОЙЧИВОСТИ

СОРТООБРА311ОВ ХЛОПЧАТНИКА К ВИЛТУ

ЧБРТ1С11ииИ ВАН1.1А1. КЬВВ) Изобретение относится к микробиологическим исследованиям и к области селекции хлопчатника.

Известен способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту (Verticillium dahlial К1еЬ.), при котором готовят свежие срезы проростков и просматривают их в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа.

С целью ускорения процесса оценки сортообразцов хлопчатника к вилту по предлагаемому способу свежие срезы проростков заделывают в парафиновые блоки и флуорохромируют водным раствором акридинового оранжевого концентрацией 0,01 — 0,1% в течение

20 мии с последующей промывкой водой, а при микроскопировании производят подсчет микросклероциальных скоплений в сосудистоволокнистых пучках ксилемы проростков.

Способ позволяет диагностировать сортообразцы хлопчатника на устойчивость к вилту

КаК высокоустойчивые, так и низкоустойчивые.

Способ осуществляют следующим образом.

Проростки растений инфицируют чи: той культурой возбудителя B стебель. На едьмой — восьмой дни после заражения проростки срывают. Стебель разрезают на две части в месте заражения. На анализ берут часть стебля, находящуюся между местом заражения и листьями. На этой части стебля готовят препараты для выявления наличия микросклероция с помощью люминесцентного микрос. <опирования.

Предварительно готовится napaфиновая матрица (блок) в виде плитки путем заливки разогретого парафина в специальную форму.

На верхней части плитки специальным ножиком делают бороздки глубиной 5 мм и ширлной 3 — 5 мм в зависимости от толщины стеоля. Лучше работать одновременно с тремя парафиновыми блоками. Первый блок находится на просмотре, гторой на окраске, третий на промывке.

В одном блоке размещается пять бороздок для пяти растений. Разогретую у основания парафиновую плитку прикрепляют к поверхности деревянного блокодержателя, имеющего размеры предметного стекла. В бороздки пар афинового блока помещают нижнюю часть стебля до упора, срезают стебель лезвием и так до тех пор, пока весь стебель не будет разрезан на кусочки высотой 5 мм, расположенные поочередно друг возле друга в бороздке. В одну бороздку помещается стебель одного анализируемого растения, примерно, длиной 30 — 40 мм. После этого производят заливку бороздок разогретым парафином при помощи парафиновой палочки и микроэлекЗО тронагревателя. После затвердевания пара506623

Таблица 1

Среднее количество микросклероция

Среднее количество микросклероциальных скоплений иа один срез, шт.

Средняя высота распространения микросклероциев к листьям, мм

Сорт хлопчатника, устойчивость

Популяция возбудителя в ксилеме в сосудах

1,5

22

2,3

1,0

Ташкентская

Азербайджанская

Ташкентская

Азербайджанская

Ташкентская

Азербайджанская

Ташкентская

Азербайджанская

Ташкент 1 высокоустойчивый

23,5

21

1,8

2,4

2,5

1,68

Ташкент 3 высокоустойчивый

29,8

34

4,6

1,6

108-Ф восприимчивый

24

32,5

4,4

2,5

158-Ф восприимчивый фина блок устанавливают на столик санного микротома и несколькими срезами обновляют поверхность блока. Последний снимают с микротома, переворачивают рабочей поверхностью вниз и помещают в сосуд с водным раствором акридинового оранжевого 0,01О/О-ой концентрации. Время флуорохромирования

20 мин. Флуорохромированные препар аты промывают водопроводной водой 5 — 10 мин.

Затем парафиновый блок устанавливают на столик люминесцентного микроскопа, например МЛ-3. Препараты просматривают в падающих УФ-лучах с максимумом возбуждения флуоресценции в области 360 нм. Наблюдение ведут на поверхности свежесрезанной ткани стебля при увеличении в 50 — 80 раз.

Микросклероций возбудителя вилта не флуоресцирует и поэтому хорошо выделяется на фоне флуоресцирующей поверхности поперечного среза в виде черных точек и пятен.

На срезе каждого кусочка стебля подсчитывается количество микросклероциальных скоплений в сосудах сосудисто-волокнистых пучков ксилемы и в межклетниках ксилемы.

Учет проводится примерно на 6 — 10 срезах, что зависит от длины анализируемого участка стебля.

Высчитывается среднее количество микрос лероциальных скоплений на один срез. Показателем устойчивости сорта является среднее количество микросклероциальных скоплений на одном срезе. Чем меньше гриб образовал микросклероциев в сосудисто-проводящей системе растения, тем выше устойчивость сорта к определенной популяции гриба.

Предлагаемый способ значительно экономит время (17 — 18 дней вместо 50 — 70 дней) Как видно из таблицы, у высокоустойчивых сортов количество микро оклер оциальных скоплений значительно меньше, чем у восприимчивых. Указанная зависимость отмечается при оценке сортов и гибридов хлопчатника на устойчивость к возбудителю вилта. Оценка на устойчивость проводится на седьмой, восьмой дни после заражения проростков. На приготовление препаратов и их анализ затрачивается 30 — 40 мин.

Кроме того, значительно сокращаются рабочие площади на выращивание растений как за счет сокращения времени на завершение

10 опыта, так и за счет сокращения анализируемых растений.

Испытание способа проводили на вновь районированных высокоустойчивых сортах

15 хлопчатника «Ташкент-1» и «Ташкент-3», и на восприимчивых — 108-Ф и 153-Ф. Из-за отсутствия абсолютно устойчивого сорта для проверки способа использовали модельные растения других видов, на которых возбуди20 тель вилта не паразитировал, например растения огурца и фасоли. Опыты ставили на проростках растений, выращенных в теплице.

Заражение проводили инокулиумом в стебель. Растения заражали черными штаммами

25 V. dahlial Ташкентской (Янги-Юльский район) и Азербайджанской популяций, полученных из лаборатории микологии ВИЗР На анализ брали растения на восьмой день после заражения. В каждом варианте опыта было

30 взято по пять проростков. Опыты ставили в трехкратной повторности с разрывом во времени примерно через 10 — 15 дней. количество микросклероциальных скоплений в сосудистопроводящей системе проростков сортов хлоп35 чатника в зависимости от устойчивости сорта и агрессивности патогена представлены в та бл. 1. на двух популяциях гриба, отличающихся различным географическим происхождением.

40 В табл. 2 приведены другие виды растений, абсолютно устойчивые к данным популяциям гриба.

506623

Таблица 2

Среднее количество микросклероция

Сорт хлопчатника, устойчивость

Популяция возбудителя в сосудах в ксилеме

Фасоль

Огурец

На других видах растений, абсолютно устойчивых к названным популяциям гриба, каких-либо симптомов поражения сосудов не обнаружено. Следовательно, у будущих абсолютно устойчивых сортов хлопчатника, по-видимому, должно быть полное отсутствие микросклероция в сосудисто-проводящей системе.

Формула изобретения заделывают в парафиновые блоки, флуорохромируют водным раствором акридинового оранжевого концентрацией 0,01 — 0,1 в течение 20 мин с последующей промывкой водой и при микроскопировании производят подсчет микросклероциальных скоплений в сосудистоволокнистых пучках ксилемы проростков.

Составитель М. Дранишников

Корректор Е. Рожкова

Редактор Г. Мозжечкова Техред Г. Андреева

Заказ 999 9 Изд. М 1204 Тираж 549 Г!одппсное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4!5

Типография, пр. Сапунова, 2

Ташкентская

Азербайджанская

Ташкентская

Азербайджанская

Кроме этого, из таблицы видно, что та1пкентская популяция сильнее поражает сосудисто-проводящую систему растений, чем азербайджанская. Эти данные подтверждают возможность определения данным способом, как устойчивость сорта, так и агрессивность возбудителя вилта.

Способ диагностирования устойчивости сортообразцов хлопчатника к вилту (Verticillium dahlial К1еЬ.), включающий приготовление свежих срезов проростков и просмотр их в ультрафиолетовых лучах люминесцентного микроскопа, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса оценки сортообразцов хлопчатника, свежие срезы проростков

Средняя высота распространения микросклероциев к листьям, мм

Среднее количество микросклероциальных скоплений на один срез, шт.