Способ получения ацетилхолинэстеразы

Способ получения ацетилхолинэстеразы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Со.оз Советских

Социалистических

Республик (ii) 5075<2

"та, @фью (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено03.05.72 (21) 1776553/28=13 с присоединением заявки (23) Приоритет (43) Опубликовано25.03.76.Бюллетень №11 (45) Дата опубликования описания 06.04.76 (51) .М. Кл.

С ОI G 7/02(Государственный комитет

Савата Министров СССР оо делам изооретеннй и открытий (53) УДК 615.4-?:> .159 (ObH.H) Т. Д. Абрамович, А. П. Бресткин, А. M. Борзу1п(на, М. А. Ле((б?о, Ю. Г. Жуковский, Л. П. Кузнецова, И. И. Райхер, Г. А. Старкова, Н. И. Тарасова и Л. М. Эпштейн (72) Авторы изобретения (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЦЕТИЛХОЛИНЭСТЕРАЗЬ1

Изобретение относится к биохимии, а именно к производству медикаментов из органических веществ животного происхождения.

Известен способ получения ацетилхолинэстеразы из эритроцитов крови человека, заключающийся в том, что эритроциты про мывают трехкратно в солевом растворе, гемолизируют шестью объемами воды, промывают три раза дистиллированной водой, отмытую строму суспендируют в восьми объемах КСЕ-тритон Х-100. Г1ри этом 90% фермента переходит в раствор. Белевой продукт осаждают сульфатом аммония, осадок, содержащий фермент, растворяют и очищают электрофорезом.

Белью изобретения является получение сухого водорастворимого препарата ацетилхолинэстеразы, Для этого эритроциты быка или человека отделякт от сыворотки крови, отмывают физиологическим раствором, гемолиэируют в натрий-фосфатном буфере (рН 6,77,5) в присутст?гии ЭДТА, строму отделяют центрифугированием, промывают трехкратно натрий-фосфатным буфером рН 5,5?6,0 на холоде, а затем дистиллированной водой. Смесь гомогенизирун?т, к г омо(еп» ту добавляют 0,5М т1аОН до рН 0,0 и

5 Iлиофилизируют. ,Лиофилизированную строму измель ни. i, 1 экстрагируют жировые примеси смесьн? б?у, танал-геосан-циклогексан, осадок фильт(??,— (ют, высушивают„добавляют раствор фосф 10 l та натрия, смесь гомогенизнруют и ос»I (док отделяют центрифугированием, а н»досадочную жидкость охлаждают, подкислян1т, 1М HCE до рН 6,0, выдерживают 2 час, при охлаждении и вновь центрифугнрук?т.

Белковуто фракцию, содержащую целевой ,продукт, выделяют дробным осаждением сульфатом аммония, обессоливают гельфильъ

;трацией с применением сефадекса Q-25, 20 стерильно фильтруют через пластины мпллипора" и стерильный раствор фермента разливают Во флаконы, лиофилизируют, з»тем флаконы герметично закупорив»н?т.

Удельная KBT»ëèòè÷åñêÿÿ активность пр

25 парата апет((л. олинэстеразь(1-2 Е/мт .

5075Í2

Ф о р м y n а =. 1 бретения

Составитель Г. Смирнова

Редактор Л. Бер Техредix. Демьянова Корректор Л. Тремболе

Заказ .1. 11 Тираж 576 Г1 одписное

Щ1ИИ1111 1 осударственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

13 3035, Москве, Ж-3:--, Реушская наб., д. 4/5

Филиал l ll li! "11етент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101

Выход пб активности РОЪ m активно..ти .чикфйлиз и бйтгйбМ ы.

Ф ф

Способ получения препарата фермента ацетилхолинэстеразы, например из стромы эритроцитов, включающий экстракцию фермента с последующим его выселивание. ., о т л и ч а ю щ и Й с я тем, что,с целью получения сухого водорастворимого препарата фермента, перед экстракцией фермента строму лиофилизируют и обрабатывают органическими растворителями, ферментный экстракт из стромы выдерживак т при рН 5,5-6,5 и раствор высоленного фермента лиофилизируют.