Штамм продуцент противогрибкового антибиотика тернатина

Штамм продуцент противогрибкового антибиотика тернатина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С,А „Н И. Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (6} дополнительное к авт. свил-ву (ф2) Заявлено 290373(2}) 1897684/30 15 с присоединением заявки.34(23) Приоритет (5}) М. Кл.

С 12 К 1/06

С 12 2 9/00

I осударствеииый иомнтет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576,8;615.

° 77.9.9(088,8) Опубликовано 2501.79, Бюллетень Ю 3

Дата опубликования описания 250179

T,È.Kóðàõòà8îâà, Г.С.Иуромцев, И.И.Яцкова, B.È.Êîðåíåâà и В.Д.Ткачев (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт фитопатологии

Pl) Заявитель (54) MTAMN Дте}}}тпос8ойит te natuv Gacc.(еуп .Cefdotvichum т.ерпа1цтп Зоват о1еи) -пРодуцент пРОтиВОГРиБкОВОГО

АНТИБИОТИКА TBPHATHHA

Изобретение относиТсФ к защите растений и представляет собой штамм-продуцент антигрибковых антибиотиков.

О}е}ут1остад}цтп Ъертнхтитп описан как микрофильный гриб, но не было известно, что у вида имеются формы, продуцирующие биологические активные вещества.

Предлагаемый штамм получен в результате рассева штамма-предшественника на ряд плотных сред с последующим отбором и изучением характера роста и антибиотической активности.

Идентифицирован по определителю SaccaMo буЫ. Pung Iv: 187 (1886Я и РаЪеп- 15

bO &t КРуР1. РМ. РтстЕ ЧХ11: 390 (1907Д.

Содержится в коллекции ВНИИ фитопатологии под в 14, Иорфолого-культуральные признаки.

На агаризованной среде Чапека с 1% кукурузнбго экстракта образует колонии белые войлочные, размеры колоний в разные сроки роста достигают в диаметре: на третьи-четвертые сутки 9-.

12 мм, на пятые 30-45 мм, на восьмые Ф

80-85 мм, гифы прямые шириной до

8 ммк, конидиеносцы мутовчато-разветвленные септированные, бесцветные, в: массе белые, конидии с одной перегородкой, располагаются двумя-четырьмя маленькими цепочками на фиалидах, с гладкой оболочкой, овальные, груше-, видные или продолговато-цилиндрические, диаметр (12-17)х(7-12) ммк, бесцветные, в массе восковые с кремоватым оттенком. При инкубации при 26 С начало роста мицелня отмечено на вторые сутки, появление спор на четвертые-пятые сутки, массовое спороношение на седьмые-восьмые сутки, прекращение роста гриба наблюдается по мере освоения субстрата (в стандартных чашках Петри на десятые-тринадцатые сутки). На агаризованной среде с соевой мукой, кукурузным экстрактом, глюкозой колонии круглые, хлопьевидные,. пушистые, слегка кремоватого оттенка, обусловленного обильным спороношеннем, в центре зоны пушистого складочного мицелия вершина выпуклая, край ровный, пигмент в субстрат не выделяют, диаметр колонии на восьмые сутки роста

75-80 мм. На среде с сахарозой, NANO> и кукурузным экстрактом воздушный мицелий паутинистый, сероватый, спороношение умеренное, дигмент в субстрате не выделяет. На среде с маннитом и аспарагином воздушный мицелий очень плотный войлочный, ко ричневатого оттенка, образует зксу508151 дат, в субстрат выделяет коричневатый пигмент.

Яа сусло-агаре воздушный мицелий войлочный, спороношение обильное, пО краю колонии выделяют ярко-оранжевый пигмент.

Температурный оптимум роста штамма

22-28 С, рй среды 5,5.

Виохймические признаки. Отношение к азоту: наблюдается хороший рост в присутствии кукурузного и дрожжевого экстрактов, пентона, соевой муки, ас парагина, гидролизата казеина« недостаточный рост в присутствии минеральных источников азота ЙН4СВ, )(Н О, . (М 04, я аМОЭ, КМО, тношение к углероду: утилизирувт глюкозу, еахаРозу, маннит, крахмал, глицерин, растительное масло.

Предлагаемый штамм продуцирует антибиотик тернатии, обладающий

Фунгицидным действием против многих видов грибов. и дрожжей 4п урво . Антибиотик не действует иа граммположительные и граммотрицательные бакте.рии и актиномицеты.

Состав питательных сред и условия культивирования, при которых получают антибиотик.с наивысшей актив ностью, а) Среда для получения вегетативного посевного материала,%:

Глюкоза. . 5

Соевая мука 1.,5

КН,РОМ 0 2

К<Е б, 0,02

«4gSo4 0,02

Кукуруэн Ф экстракт 1,0

Раствор микроэлементов 0,1 рН до стерилизации 6,0

Режим стерилизации 0,75 атм, 30 мин б) Ферментационная среда, %:

Пептон 1. 5

Глюкоза - 3,9 рН до стерилизации 6 0

Режим стерилизации 0,75 атм,30 мин в) Условия,.культивирования.1

Вегетативный посевной материал выращивают на приведенной выше среде глубинным способом в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл. Объем среды в колбе 100 мл. Колбы засевают культурой гриба (1 пробирка .на 1 колбу), производят посев агарово-мицелиальными кусочками. Продолжительность выращивания вегетативного посевного материала 72 "ч при 27 1 С и скорости вращения качалки 220-240 об/мин. Жидкий посевной материал в момент передачи в ферментационную среду образован многочисленными разросшимися мик роколониями, имеющими вид уплотненных гранул различных размеров или компакт» ной деточки гиф.

Культивировайие в приведенной вние ферментационной.среде производится также на качалке в укаэанных выше условиях продолжительность Ферментации 96-120 ч, Вегетативный посевной материал вносят в Ферментационные колбьт в количестве 5-7% к объему загруженной среды.

«О Антибиотическую активность в процессе Ферментации контролируют мето-. дом диффузии s агар с использованием

s качестве тест-организма уредоспор«(«cc(n1e фгаю(пей.. В указаннык усло(5 виях Ферментации содержание антибиотика в культуральном Фильтрате составляет 100 мг/л, пример культивироваиияд1.1евпа4у«в, предлагаемый штамм Э,ьбепа1(нпвыращивали на плотной питательной среде при 26 С в течение 20 суток. о

Состав среды,%

Сахароза 5 яН4М ОЭ 0 5

Кукурузный экстракт 1,0

К Н,РО4 0 2

«ЧВО4 Ot02

Раствор микроэлементов 0,1

Агар-агар 2,5 рН до стерилизации 5,5, Режим стерилизации 0,5 атм,30мин.

Для получения вегетативного посевного материала культуру в виде агарово-мицелиальных кусочков вносили в колбы Эрленмейера емкостью 750 мл со

100 мл среды следующего состава,%:

Глюкоза 5.

Соевая мука 1 5

КН РО4 0,2

К Е04 0,02

ИДЯ 04 0,02

Кукурузный экстракт li0

Раствор микроэлементов 0,1 рН до стерилизации 6,0

Режим стерилизации 0,75 атм,30 мнн.

46 В одну колбу вносили культуру из. одной пробирки. Вегетационный посевной материал выращивали в течение 72 ч при 27+1 С на качалке со скоростью вращения 220-240 об/мин. По истечении

50 укаэанного срока посевной материал имел вид уплотненных гранул разного размера.

Полученный посевной материал использован для засева Ферментационных колб ащ (емкость 750 мл, объем :среды в колбе

100 мл).

В каждую колбу вносили по 5 мл посевного материала (т.е. 5% от объема среды в Ферментационной колбе). Продолжительность Ферментации 96 ч при

Ю 27+1 С

Антибиотическую активность культу-. рального фильтра в конце ферментации определяли методом дифФузии в агар с

65 использованием в качестве тест-орга508151

Формула изобретения

Составитель С.Кудрявцева

Техред С.Мигай Корректор М.Демчик

Редактор Е..Месропова

Заказ 7863/1 Тираж з27 Подписное

ЦИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæroðoä,óë.Ïðîåêòíàÿ, 4

5 низма уредоспор Рgvamines . Иэ 120 ферментационних колб получили 9 л культурального фильтрата с содержанием антибиотика 90 мг/л.

Антибиотик выделяют известным спо- собом. штамм 0ц3цеосбадiие ternatue Saec.

4в ю.СаИоВисЬОе ематим Ъопоюдец)продуцент противогрибкового,аи- 10 тибиотика тернатина. Выделен во

ВНИК фитопатологии и выделен.по определителю басса, до f&uNУопф. Zv: 187 (1886)3 и-. иаЬепЪоЮФ (К црФ, Рф.Ф йхе» .,УХ? Х: 390 (1907)11, Хранится в кол- t5 лекции Внии фитопатологии под В 14 .

Морфолого-культуральные признаки.

На агариэованной среде Чапека с

l% кукурузного экстракта образует колонии белие войлочные, размеры коло-, 0 ний s разные сроки роста достигают в диаметре: на третьи-четвертые сутки

9-12 мм, на пятые 30-45 вел, на восьмые.

80-85 ююу гифы прямые шириной до 8 ммк, конидиеносцы мутовчато-разветвленные, септированные, бесцветные в массе белые, конидии с одной перегородкой, :располагаются двумя-четырьмя маленьки„ми цепочками на фиалидах,с .гладкой оболочкой, овальные, грушевидные или продолговато-цилиндрические, диаметр

l2- 17х7 — 12 ммк, бесцветные, s мас-. се восковые с кремоватым оттенком. .При инкубации при 26 С начало роста иицелия отмечено на;вторйе сутки, появление спор на четвертые-пятые сутки, " массовое спороношение на седьмыевосьмые сутки, прекращение роста гриба в стандартных чашках Петри на десятыетринадцатые сутки.

На агариэованной среде с соевой мукой, кукурузным экстрактом, глюкозой колонии круглые, хлопьевидные, пушистые слегка кремоватого оттенка, обусловленного обильным спороношением, в центре зона пушистого складчатого мнцелия, вершина выпуклая, край ровный, пигмент в субстрат не выделяют, диаметр колонии на восьмые сутки роста

75-80 мм, На среде с сахарозой, ЙН М(и кукурузным экстрактом воздушный мицелий паутинистый, сероватый, спороношенне умеренное, пигмент в субстрат не выделяет.

На среде с маннитом и аспарагином воздушный мицелий очень плотный, войлочный, коричневатого оттенка образует эксудат, в субстрат выделяет коричневатый пигмент.

На сусло-агаре воздушный мицелий войлочный, спороношение обильное, по краю колонии выделяет ярко-оранжевый пигмент.

Температурнцй оптимум роста штамма 22-28 С.

Биохимические признаки. Отношение к азоту: наблюдается хороший рост в присутствии кукурузного н дрожжево» го экстрактов, пентона, соевой муки, аспарагина, гидролизата каэеинау недостаточный рост s присутствии минеральных источников азота HHgCC, МН4МО, (1tH4 },Ь04, ga Я O, KHO, отношение к углероду: утилиэирует глюкозу, сахароэу, маннит, крахмал, глицерин, растительное масло.

Антагонистические свойства. Штамм обладает антагонистическими свойствами против целого ряда фитопатоген,ных грибов.

Средняя активность штамма в лабо раторных условиях 60-100 мгк/мл.