Способ количественного опреде-ления веществ,способных к фермен-тативному окислению в водномрастворе

Способ количественного опреде-ления веществ,способных к фермен-тативному окислению в водномрастворе

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(»I 5!0 168

ОП И САН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 16,06.72 (21) 1803552/23-4 (23) Приоритет — (32) 18.06.71 (51) М, Кл. б 01N 27/48

Государственный комитет (31) Р 2130340 2 (33) ФР1Совета Министров СССР ло делам изобретений и открытий (53) УДК 543 24 087 (088.8) (43) Опубликовано 05.04.76. Бюллетень № 13 (45) Дата опубликования описания 15.05.78 (72) Авторы изобретения Иностранцы

Александр Хаген, Вольфганг Грубер, Ханс-Ульрих Бергмайер и Дитер

Яворек (ФРГ) Иностранная фирма

«Берингер Маннхайм ГмбХ» (ФРГ) (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВЕЩЕСТВ, СПОСОБНЬ1Х К ФЕРМЕНТАТИВНОМУ ОКИСЛЕНИЮ В ВОДНОМ

РАСТВОРЕ

Изобретение относится к аналитической биохимии, а именно к способу количественного определения веществ, способных к ферментативному окислению в водных растворах.

Известен способ количественного определения веществ, способных к ферментативному окислению в водном растворе, путем потенциометрического измерения расхода кислорода, потребляемого на окисление определяемого вещества в буферном растворе в присутствии соответствующего фермента, с применением кислородного электрода с последующим определением концентрации по калибровочному графику.

Однако известный способ длителен.

С целью ускорения анализа предлагается вводить определяемое вещество в поток насыщенного кислородом буферного раствора, который пропускают последовательно с постоянной скоростью через слой фермента, закрепленного на носителе, и датчик потребления кислорода.

Пример l. Определение D-глюкозы.

В поток насыщенного кислородом буферного раствора, представляющего собой 0,2 М водного раствора фосфата калия, содержащий

18,0 ммоль йодида калия, 7,5 ммоль пентамолибдата аммония и 0,8 моль хлорида натрия, вводят пробу D-глюкозы (100 — 500 мг определяемого вещества в 100 мл пробы) и со скоростью 7,5 см/с последовательно пропускают через колонку (d 1 см, h 1 см) с глюкоксидазой, закрепленной на носителе, и датчик потребления кислорода. По показаниям датчика и калибровочному графику определяют концентрацию D-глюкозы в пробе. Для построе1р ния калибровочного графика используют стандартные растворы D-глюкозы.

Удельная активность глюкоксидазы 200 ед./г. В качестве датчика потребления кислорода используют прибор для измерения кис15 лорода с кислородным электродом (Oxi 610Е) производства фирмы «WTW Weilheim/Obb» с регистрирующим потенциометром Яе 511 фирмы «Servogor».

Время анализа менее 30 сек.

20 Пример 2. Определение мочевой кислоты.

В поток насыщенного кислородом буферпого раствора, представляющего собой 0,2 М водного раствора бората натрия, в котором растворено 600 ед./мл фермента, вводят пробу мочевой кислоты (5 — 60 мг мочевой кислоты в 100 мл пробы) и со скоростью 3,5 см/с последовательно пропускают через колонку