Способ определения активности продуцентов пенициллинацилазы

Способ определения активности продуцентов пенициллинацилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ACAHHE

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (и) 5И 344! (6i) Дополнительное к авт. свид-ву

I (22) Заявлено 25.11.74 (21) 2078688 18 (51)

1 ! с присоединением заявки № !

М. Кл. r. 2К 1(00 -.- 01!! 38!16

Государотоеииый комитет

Соовто Миииатроо СССР оо домн кзо0ретоиио н открытий (23) Прис рнтет— (43) Опубликовано 25.04.76. Бюллетень № 15 (53) УДК 663,577.15 (0ee.8) (45) Дата опубликования описания 12 08,76 (72) Авторы изобретения

Н. Б. Романова, > . И. Голуб и А. ih!. Белькинд

Всесоюзный научно-исследовате iû кий инсгитут антибиотиков (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНО i È !! ОДУП!:.(-! ГОЕВ

1! I:ÍÈ! (ÈЛЛИНАШ4ЛАЗЬ!

Изобретение относится к медицинской промышленности, а именно к способам опре деления активности продуцентов пенициллин ацилазы, Известен способ определения активности продуцентов пенициллинацилазы путем гид:: ролиза пенициллинацилазовой бензилпеницытлина и обработки продуктов гидролиза пара.— диметиламинобензальд гидом для образования окрашенных соединений с последуюшим установлением интенсивности их окрашивания.

Однако известный метод весьма трудо= емок, требует пассирования бактерий в жидкой среде не менее двух раз. При определении активности iio этому методу прг.:ходится дважды прибегать к центрифугированию. Длч проведения одним человеком 10-20 анализов требуется не менее 6 час.

Цель изобретения — ускорение и упроще- >з ние процесса определения активности продуцентов пенициллинацилазы.

Для этого колонии клеток продуцентов пенициллинацилазы вырацп вают на твердой среде, а гидролиз осуществляют путем на кладывания диска, пропитанного бензилпени циллином, на колонии и выдерживания его„ после чего обработку продуктов гидролиэа и установление интенсивности окрашиванич осушествляют на ди=ке, Предлагаемый способ поясняется примером егo в bыiiпIо л нHеeнHiиiIяI, Пример. Около

50 бактерий i sспе.". с4 сг

АТСС9687 высеивают на чашку Петри с кукурузным агаром (кукурузный экстракт

2%, агар агар — 1,5%, рН 7.4), содержашим 0,1;oо фенилуксусной кислоты, которая является индуктэрол синтеза пеннциллинацилазы. Чашки инкубируют в. течение 48 час при тел пературе 28 . На выросшие коло о нии накладывают диск фильтровальчой бума ги, предварительно смоченной в 8,5%-ном растворе бензилпенициллина, в 0,1 М фосфатнолг буфере, рН 7,8 и высушенной в те чен "=- !О мин при 87 С.

Диски т;цательно прикатывают шпателем

K пове(хности средь;. OTKpbITbl8 чашки с ди сками выдерживают 15 ми:. при 37оС ПосC ер Q р е н нц! псо в а

Редактор Н.Козлова Техред A.KåìèUinèêñâàK0PÐt- -"V М.йейзерман ираж

Подписное

Ц11И111!11 !" осударствениого комитета Совета Министров СССР но делам изобретений ii открытий

Москва, 113035, Раушская наб., 4!

1реднрнитис «11атент», Москва, Г-59, Бережковская наб., 24

3 ле этого диски снимают и выдерживают:..

ЗО мин . при комнатной температуре. Затем вписки. смачивают в 5%-ном растворе парадиметиламинобензальдегида, ттриготовленном в 20% растворе уксусной кислоты в этано- 5 ле, и высушивают при комнатной температуре. На высушенных дисках в местах со прикосновения с колониями клеток, продуцируюших пенициллинацилазу, образуются зоны желто-зеленого цвета. По интенсивности 10 окрашивания, которую определяют визуально, судят об активности продуцента.

Использование предлагаемого способа позволяет одному человеку произвести в

15 течение 6 час полуколичественный анализ

1О.ООО субклонов, что существенно ускоряет отбор активйых штаммов.

Формула изобрете ния

Способ определения активности продуцен тов пенициллинацилазы путем гидролиза пенициллинацилазой бензилпенициллина и обработки продуктов гидролиза парадиметиламинобензальдегидом для образования окра» шенных соединений с последующим установлением интенсивности их окрашивания, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью ускорения и упрошения процесса, колонии клеток продуцентов пенициллинацилазы вырашивают на твердой среде, а гидролиз осушествляют путем накладывания диска, пропитан ного бензилпенициллином, на колонии и вы держивания его, после чего обработку продуктов гидролиза и установление интенсивно сти окрашивания осушествляют на диске.