Способ получения пептидов

Способ получения пептидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(и) 511852

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

СоцналнСтннескнх

Ресттубпнк

К ПАТЕНТУ (6!) Дополнительный к патенту. (22) ЗаявлЕно 290672 (21) 1803547/23-4

Р ) Приоритет 1.07 7 (3) (51) М. Кл.. С 07 С 103/52

Гасударственный намитет

6аввтв в!нннстрав СССР аа ленам извбретвннй н атрытий (31) P 2132773 (33) ФРГ

P 22026137 (43) Опубликовано; 2504.76. Бюллетень № 15 (53) УДК 547. 964.4 °

07 (088.8) (45) Дата опубликования описания 151277

Иностранцы

Вольфганг Кениг, Рольф Гейгер и Ханс Виссманн (ФРГ) (72) Авторы изобретения

Иностранная фирма Хест AI" (ФРГ) (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ

)О е(у о ку

1 в ! и

V-IH-CI-I-С)„, -К-СН-C g II

Изобретение относится к улучшению способа синтеза пептидов иэ фениловых эфиров аминокислот или пептидов, которые находят применение в медицине.

Известны различные способы синтеза пептидов, исходя иэ фениловых эфиров аминокислот или пептидов, имеющие тот недостаток, что в ряде случаев велико время проведения реакции. Так, время проведения реакции -нитрофенилового эфира трет-бутилоксикарбонил- Leu — Phe с трет-бутиловым эфиром составляет 70 час. Известен также спо. соб ускорения конденсации с помощью имидазола. Однако при этом аминолиз активированных эфиров сопровождается рацемизацией. о — ор о

Предлагается неизвестная ранее модификация получения защищенных пептидов общей формулы

HY О HY OHY О HY 0 ! I u I I (! ! 0 I I !!

V- (й-СН"С) -й"СН-C -II - CH -С -(М - СН - C ) (1 )

fill el2 где тп —. число от 0 до 0!

me — число от 0 до и более

500; у — аминозашитная группа или пиооглютаминовый остаток; 30

Y — низший алк1т(10вща остаток, который может быть разветвленным и/илй защищенным при необходимости защищенным ОН,-МНЕ,-$Н-600!I,-с 1МНВ, -гуанидин, -арил, -имидазолил-индолил остатками1 причем группа(-III-Я) также может овна чать пирролидинил — остаток, путем взаимодействия защищенной аминокислоты или защищенного пептида формулы e m,,V u Y имеют укаэанные значения, е представляет собой ди-, три-, -тетра или -пента-. хлорфенил, -нитрофенил, или хлор-нитрофенил« остаток с защищенным при необходимости аминокислотами или пептидами общей формулы

Н Y О Н Y 6

II н-(е-сн-с (к-сн с) -% !Ill) где m.. Y и (-е!Н - Смт- ) остатки имеют указанные значения!

w означает гидроксильную груп.пу, о-алкил, о-аралкил, амииогруппч

511852 или эфиро- или амина-связанный полимерный носитель, замещенный алкилом, аралкилом или арилом.

Способ заключается в том, что взаимодействие проводят при добавлении соединений общей формулы

Х

К-ОК .

1 (iV) в которой Х означает группу С-О, С- или — 8 — и Х и N являются членами 5 — 6-членного гетероциклического кольца, аннелированного с бензольным ядром и/или содержащего 1 или 2 других.гетероатома; их рК составляет

3,7 — 4,2.

Продукты выделяют известными способами.

Установление значений рК может

20 производиться в 0,5 М растворе в смеси из 6 ч. диметилового эфира диэтиленгликоля и 4 ч. воды при 30 С. Если значение рК соединений формулы 1У в таких условиях выше (bf -гидроксипиперидин) или ниже (1-окси-6-нитро-бен25 эотриазол), то их положительное действие снижается. Обычно соедин ение общей формулы CV берут в количестве от 0,1 до примерно 1 экв., однако можно также использовать меньшие или большие количества.

Пригодны следующие соединения формулы (V: 1-гидроксибензотриазолы, например 1-гидрокси-5,6-диметилбенэотриазол, 1-гидрокси-5-метил бенэотриазол, 1-гидрокси-6-метил-бензотриазол, 1-гидрокси-5-метокси-бензотриазол, 1-гидрокси-4-метил-бензотриазол, 1-гидрокси-б-бром-бензотриазол, 1-гидрокси-б-хлор-бенэотриазол, 1- 40

-гидрокси-5-хлор-бензотриазол, циклические гидроксамовые кислоты, например пиридоны: 1-гидрокси-2-пиридон, 1-гидрокси-б-метил-2-пирицон, 1-гидрокси-4,6-диметил-2-пиридон, 1-гидрокси-3,4,6-триметил-2-пиридон, 1-гидрокси-3,5-дихлор-4,6-диметил-2-пиридон, N -гидрокси-сукцинимид или

1-гидрокси-2-окси-2,3-дигидроиндолы, как 1-гидрокси-б-хлор-2-окси-2,3-ди- щ гидро-индол, циклические гидроксамовые кислоты с азотом в качестве гетероатома в кольце, например 3-гидрокси-4-окси-3,4-дигидрохиназолин, З-гидрокси-2-метил-4-окси-3,4-дигид- я@ рохинаэолин, З-гидрокси-4-оксо-3,4-дигидро-1,2,3-бензотриазин, 3-гидрокси-4-окси-2-фенил-3,4- дигидрохинаксолин, циклические гидроксамовые кислоты с кислородом или серой в качестве гетероатома в кольце, например пригодные замешенные 4-гидрокси-4,4-дигидро-3-окси-1,4,2-бензо-оксазины и

4-гидрокси-3,4-дигидро-3-окси-1,4,2-бензотриаэины, или циклические тиогидроксамовые кислоты, например 3- 66

-гидрокси-4-метил-2,3-дигидро-триаэол2-тион.

В качестве заместителей соединений формулы LV могут быть использованы алкил- или алкокси-остатки с

1-3 С-атомами, хлор.

Аминокомпонент Ш может использоваться либо свободным, либо как соль минеральных кислот сильных или слабых органических кислот, например и --толуолсульфо-, трифторуксусной или уксусной кислоты. Если имеется солеобразование с сильными кислотами, то для освобождения аминогруппы должны добавляться третичные органические основания, как триэтиламин или )4 этилморфолин. Также возможно применение соединений обшей формулы ф в виде соли, например натриевой соли

1-гидроксибензотриазола. При этом одновременно освобождается аминогруппа (образование натрневой соли) и образуется несбходимое для катализа

1-гидроксисоединение формулы (ч

В качестве защитной группы могут быть использованы обычные в химии пептидов защитные группы. Предпочтительно применяют аралкилоксикарбонил, например бензилоксикарбонил- или треталкилоксикарбонил-, например трет-бутилоксикарбонил-остатки.

ОН-группа у серина, треонина или тирозина может остаться незащищенной.

Ио она также может защищаться с помощью пригодных групп, например бутил-или бенэилгрупп.

Для получения цистеин- и цистинпептидов должна защищаться SH -группа цистеина при помощи обычных в химии пептидов SH -защитных групп, или проводиться реакция симметричных или несимметричных цистеинпептидов, которые затем могут восстанавливаться до цистеинпептидов.

М означает в карбонильном компоненте общей формулы Й! полимерный носитель, который эфирно- или амидообразно связан с карбоксильной группой. B качестве пригодных полимеров можно использовать сшитый с 1-2Ъ ди винилбензола полистирол, сшитые.

Взаимодействие обычно приводят в растворителях, например диметилформамиде, диметилацетамиде, тетраметилмочевине, или 1 (в. -диметиламиде фосфорной кислоты, в данном случае при добавлении небольшого количества

511852 о воды. Реакционная температура 0-40 преимущественно комнатная.

Обработка обычно происходит просто, так как N -гидроксисоединения общей формулы lV, как 1-гидроксибензотриазол или З-гидрокси-4-окси-3,4-дигидрохинаэолин, могут извлекаться экстракцней при встряхивании в делительной воронке с карбонатом натрия или калия или с содовым раствором. Другие со- 10 единения, например 1-гидрокси-2, пиридон или З-гидрокси-4-метил-2,3-дигидро-триаэол-2-тион, растворяются в воде и могут легко удаляться. К -гидроксисоединения из тяжелорастворимых производных пептицидов могут экстрагироваться изопропанолом, спиртом, метанолом, тетрагидрофураном или горячей водой. Возникающие при взаимодействии фенолы имеют своиства растворения, аналогичные К -гидроксисоединениям и выделяются с ними.

При К -ацил-пептид- активных эфирах добавление К -гидроксисоединений общей формулы lV не вызывает повышения рацемизации. Как при нитрофенил-, так и при трихлорфенил-эфирах нельзя увидеть рацемизации ни с добавкой, ни без добавки К -гидроксисоединений. По другому ведет себя пептахлорфениловый эфир, который дает примерно до 80Ъ рацемизированного трипептида. Путем добавления 1-гидроксибензотриазола эта сильная степень рацемизации могла быть снижена на 26-54%. При добавлении 2-гидроксипиридин-натриевой соли можно увидеть обратный эффект: рацемизация еще более усиливалась.

Путем добавления К -гидроксисоединений общей формулы Й можно пре- 40 одолевать пространственное затруднение, которое может мешать взаимодействию с активированными эфирами, например при взаимодействии Нр -изолейцинактивных эфиров с Н- СуЬ!т>Т!- se>- 45

le>! - ОН . Взаимодействие NpS -lLe-ÎÒ с р с Н-Cg5(Tzt)-sew — ье>> - он в диметилформамиде не может проводиться до конца. Через 5 недель опыт прерывается, так как при помощи тон- 50 кослойной хроматографии наряду с конечным продуктом и исходным материалом обнаружены многие продукты разложения. Напротив, если добавлен, например, 1-гидроксибензотриазол, 3гидрокси-4-окси-3,4-дигидрохиназолин или 1-гидрокси-2-пиридон, реакция заканчивается уже через 15-20 час.

П р и м е ч а н и е. Вос-трет-бутилоксикарбонил-;

2 — бензилоксикарбонил;

Кр5- о-нитрофенилсульфенил;

05и - трет-бутиловый эфиР!

OMe — метиловый эфир;

ОВ» — бензиловый эфир! оир- р-нитрофениловый эФир; á5

0Tep—

ОР Р—

OSa 5l—

T —

Ви —

МЬЬ—

СНА

2, 4, 5-трихлорфениловый эфир; пентахлорфениловый эфир; гидроксисукцинимид-эфир; тритил; трет-бутил-;

4,4 -диметокси-бенагидрил;. циклогексиламин

Применение соединений формулы ф может делать их полезными также в методах пептидной конденсации в твердой фазе. Например, из К -защищенных аминокислот и поли-4-гидрокси-3-нитро-стирольной смолы можно получать соответствующие нерастворимые эфиры, которые затем реагируют с растворимыми аминосоединениями в соответствующие амиды или пептиды. Использованием N -гидроксисоединений может быть значительно сокращено время реакции. При измененном методе Маррифилда в твердой фазе, при котором часто используются К -защищенные активные эфиры аминокислот, например) нитрофениловый эфир, добавки повышают выход продукта и сокращают реакционное время.

В качестве структурных звеньев пептидов принимаются во внимание все аминокислоты в их i -или D -форме, встречающиеся в естественных пептидах.

Также возможно применение 1> -аминокислот, например Р -аланина, или других, только синтетически или полусинтетически доступных аминокислот, например d. — ìåòèë-аланина, о!. -метил-3,4-диокси- L -фенилаланина или Р --хлораланина. Применение К гидроксисоединений в названных сильнополярных растворителях приводит к гелеобразованию, которые из-за их хороших свойств растворения удобны при синтезе высших пептидов.

Пример 1. Определение пери,ода полураспада при синтезе 2 Va!- циклогекснламида из молярных количеств

Z = VaP -" ОКр и циклогексиламина при добавлении различных К -гидроксисоединений и зависимости периода полураспада от РК-значения N -гидроксисоединений.

A . Установление периода п олураспада.

Раствор 1 : 0,5 нмоля циклогексиламина, 0,5 нмоля р-нитрофенола и

1,0 нмоль К -гидроксисоединения на 1 мл диметилформамида.

Раствор и : 1,0 нмоль р-нитрофенола на 1 мл диметилформамида.

Раствор lll 1,0 нмоль К -гидроксисоедннения на 1 мл диметилформамида.

Сравнивают УФ-кривые (область 330300 м) растворов l, Й и Щ, чтобы обнаружить благоприятные длины волн для измерения р-нитрофенола. При этой длине волны измеряется экстинкция. К

511852

Таблица 1

Время, мин

Соединение

Без добавки

112,0

125,0 и -гидроксипиперидин

19,0

1,9

0,25

4,10

4,09

14,8

4,09

5,9

4,08

3,2

1-Гидрокси-2-пиридон

4,08

1,3

4,08

4,05

4,0

4 05

1,5

4 05

60 0

4,04

4,8

2,1

2,8

4,02 полученному значению раствора 1 прибавляются 503 экстинкции раствора.

1 ммоля 2 - VaР - Ой(о и l имая триэтиламина в каждом миллилитре рас" творителя при выбранной длине волн, Сумма этих обеих экстинкций представ.- ляет экстинкцию, при которой взаимо-; действовала половина Е; VaP - OHp c циклогексиламином.

УФ-спектры измеряли при 21 С на

30 аппарате Весктапп TK1A, Вещества растворены в диметилформамиде.

Б. Измерение периода полураспада.

Для кинетического измерения периода полураспада T l/2 измеряли раствор 1 нмоля Z- ЧаР— ONp, 1 нмоля циклсгексиламина и 1 нмоля )4 -гидроксисоединения в каждом миллилитре растворителя при определенной в при- ЯО мере A длине волны. Время, за которое достигается в пункте А установ1-Гидр окси-4-метил-6-и з опропил-2пиридон

З-Гидрокси-2-метил-4-окси-3,4дигидрохиназолин

3-Гидрокси-4-окси-3,4дигидрокси-хиназолин1-Гидрокси-3,4 6-триметил-2-пиридон

1-Гидрокси-4,6-диметил-2-пиридон

1-Гидрокси-4-метил-2-пиридон

З-Гидрокси-4-метил-2,3-дигидрокситиазол-2-тион

1-Гидрокси-3,5-дихлор-4,6-диметил «2-пиридон

1-Гидрокси-2-окси-2,3-дигидро-6 îð-индол уксусная кислота (для сравнения)

И -Гидроксисукцинимид

1-Гидрокси-5,6-диметил-бензотриаэол

l-1идрокси-5-метил-бензотриазол ление величины, соответствует периоду полураспада реакции.

В. Измерение рК- значения в 0,5 М растворе (диметиловый эфир диэтилен= гликоля/вода в соотношении 6 г 4)при

0,5 нмоля вещества растворяют в смеси из 6 мл диметилового эфира диэтиленгликоля, 2,5 мл 0,1 н.едкого натра и 1,5 мп воды нагревают в термостате до 30 . 0дностержневым стеклянным электродом потенциометрически измеряют рН. По приблизительной формуле Р1 — рК - Я @.(f:.-сС) для сС= 0,5 ,рК рй. Измеренное рН-.значение представляет собой рК-значение этого соепинения.

Г. Сравнение периодов полураспада при синтезе Z Vap циклогексиламида из молярных количеств 2-VaP-OMp и циклогексиламина с рК-значениями добавленных М -гидроксисоединений приведено в табл.

511852

Продолжение табл. 1

Время, мин

Соединение рК

2,0

4,00

3,6

4,00

3,0

4,00

3,5

4,00

4,00

18,0

8,9

3,91

3 90

10,6

13,9

3,89

3,72

39,0

3,7

35 0

3,51

Очень медленно

1-Гидрокси-6-метокси-бензотриазол

1-Гидрокси-5-метокси-бензотриазол

1-Гидрокси-4-метил-бензотриазол

1-Гидрокси-бензотриазол

З-Гидрокси-4-окси-3,4-дигидро-l 2,3-бензотриазол

1-Гидрокси-6-бром-бензотриазол

1-Гидрокси-6-хлор-бензотриазол

1-Гидрокси-5-хлор-бензотриазол

1-Гидрокси-6-трифторметил-бензотриазол

1-Гидрокси-5,6-дихлорбензотриазол

1-Гидрокси-6-нитро-бензотриазол

Пример 2. Получение исходных продуктов.

A. НВЧ H-Phe — ОМр

4,2 г Z — Phe - OMp суспендируют в 10 мл ледяной уксусной кислоты. Затем добавляют 10 мл насыщенной HBV ледяной уксусной кислоты и перемешивают один час при комнатной температуре. Затем высаживают гидробромид большим количеством эфира и после этого хорошо промывают эфиром. Выход продукта 3,5 г; т.пл. 216-218 С.

В. НВЧ Н-Phe — OP ср

5,47 г Z -Рве -OP обрабатывают ср аналогично примеру A. Выход продукта

4,1 г; т.пл. 205О(разложение).

В. НВЧ Н вЂ” Phe - От

cp

4,78 г Z -Рйе — OT обрабатывают ср аналогично примеру A. Выход продукта

4,2 г; т.пл. 220 (разложение). ®

Г. Вос Еем Р е ON р

2,49 r Boc- Ьея — ОН 1Н О растворяют в уксусном эфире. Уксусный эфир сушат сульфатом натрия, концентрируют и остаток сушат в глубоком вакууме. Остаток растворяют в 20 мл абсолютного тетрагидрофурана и раствор охлаждают до -10 . При перемешивании и охлаждении льдом прикапывают 1,2 мл

N -этилморфолина и затем раствор

1,27-г изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты в слегка охлажденном тетрагидрофуране. Перемешивают 10 мин при — 10, затем добавляют 3,35 г

НВр.Н вЂ” Phe - ONP И МЕДЛЕННО ПРИ- 65 капывают раствор 1,2 мл М -этилморфина в 5 мл тетрагидрофурана. Перемешивают еще 1 час при 0 и 1 час при комнатной температуре, отсасывают осадок, концентрируют фильтрат и остаток растирают с изопропанолом. Вы- . ход продукта 3,77 г; т.пл. 150 - 152

После перекристаллизации из изопропанола : выход 3,10 г; т.пл. 152-153 (с) =-32,2 (с = 1, в диметилацетамиде).

Д. Вос- реп — phe - ОР р .

Из 1,97 r Вос- Ьеп ° 1Н О, 0,93 мл

М-этилморфолина 1,0 г йзобутилового эфира хлормуравьиной кислоты аналогично примеру Г получают смешанный ангидрид, который взаимодействует с 3,55

HBV- H — Phe — OP и 0,93 мп К этил- ср морфолина. Выход продукта 3,35 г; т.пл. 145-147 . После перекристаллизации из изопропанола : выход 2,11 r> т.пл. 163-164 ; (

Е. Вос — Len - Phe — ОТср

Из 2,3 г Вос — 1еп -ОН 1Н О, l,l мл N -этилморфолина и 1,17 г изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты получают смешанный ангидрид, который превращают с 3,6 г HBY-Н-Phe-Щ и 1,1 мл N-этилморфолина. Выход продукта 3,7 г) т.пл. 143-145 . После перекристаллизации из изопропанола .выход 3,2 г т.пл. 150-151, (d) -48, 4 (с - 1, в диметилацетамиде), Способ получения Вос-4еа-Им VaR ОМ и Вос - ben - Phe - активных эфиров.

511852

Т а б л и ц а 2 ализатор

70 час

< 2

2-Гидрокси-пиридина натрчевая соль

ON p

3,7

1,0

4 час

5 мин

5 мин

1,0

< 2

0,1

< 2

70 час

2-Гидрокси-пиридина натриевая соль

OT ср

< 2

1 час

5 мин

1,0

< 2

70 час

1 час

5 мин

1,0

OP ср

1,0

10 мин

1 i 0

OT ср

10 мин

10 мин

1,0

1,0

1-Гидрокси-2-пиридин

К раствору 105 мл (0,5 ммолей)

НИ ° Н- Va8-08и в 2,5 мл 0,2 М

И вЂ” э тилморф олин /диме тилацет амид раствора добавляют катализирующую добавку (1-гидроксибензотриазол или 2-гидрокси-пиридина натриевую соль) и

0,5 ммоля соответствующего Вос- реп-pheактивного эфира (250 мл Âoñ-&n-Phe-ONP

313 мг Вос- (.еи — Рпе — OP 279 мг ср

Вос- Len -ОТ ). Оставляют стоять опср ределенное время, разбавляют 50 мл ук1-Гидрокси-бензотриазол

То же

1-Гидрокси-бен зотриазол

2-Гидроксипиридин

2-Гидроксибензотриазол

3- Гидрокси-4-окси- 3, 4дигидро-диназолин

3- Гидр окс и- 2-метил-4-окси-3,4-гидро-хиназолил

Пример 3. Синтезйрз-Йе-Cps (ЧЪ1) - Ger. ахеи — Он

A. Получение Nps - lee активного эфира.

Молярное количество Nps - изолейцина и трихлорфенола соответствующего N --гидроксисукцинимида подвергают взаимодействию в уксусном эфире при 0 с небольшим избытком дициклогексилкарбодиимида (ДЦК). Перемешивают 1 час при 0, затем 3 часа при сусного эфира, эфирный раствор экстрагируют в делительной воронке NaHCO>—

-KHSO4-, NaHCO3 — и NACl — РФствором, сушат сульфатом натрия и концентрируют. Остаток парционально гидролизуют, трифторацетилируют и газохромаграфируют.

Результаты газохроматографическо10 ro определения рацемизации приведены в табл. 2. комнатной температуре, отсасывают осадок и фильтрат концентрируют. Остаток перекристаллизовывают из иэопропанола.

Nps — (8е - ОТ; т пл. 95ср

Nps - (1е - 0; т.пл. 105-1089

Б. Mps- (8е - сцз (ТчЦ "Ьеч-(.еа- OH

2, 9 г ммолей ) H- Cps (T v4) - Sev- Ьеи

ОН Н О и 8 мг (5 ммолей) 1-гидрокси65 .5,б-диметил-бензотриазола растворяют

511852

-СЧЭ(7 Ц -Sey-Ьeq-ОК и4 МР$ - 1В - От р соответствующего Нрав - Ие - OSu u

Н-CgS(Tvtl-Sev — ben -ОК

К раствору 116,3 мг (0,2 ммоля) н — сиз!ТчЦ-Sev- реп оН. н О в 2 мл диметилформамида добавляют 0,2 ммоля

g -гидроксисоединения и 111 мг

0,22 /Ярз — (Ее — ОТ 89,2 мг (0,25 ммоля) NpS — ice — OSu . Через различные промежутки времени на пленочную силикагельную пластину наносят одну каплю реакционного раствора. Опускают в смесь метиленхлорид/метанол (8 : 2) и выделяют ангидрином. В табл,З приведены результаты этого исследования.

Таблица 3

Конец реакции (реакционное время) К вЂ” гидроксисоединение

Эфир

0SU

Прервана через 5 недель, т.к. не было установлено полного превращения

3-Гидрокси-4-окси-З,4-дигидро-хиназолин

То же

Примерно 15 час

То же

1-Гидроксибенз отриазол

З-Гидрокси-4-окси-3,4-дигидро-хиназолин

З-Гидрокси-2-метил-4-окси-3,4-дигидрохиназолин

Примерно 7 дней

3-Гидрокси-4-окси-2-фенил-З,4-дигидрохиназолин Т ср

1-Гидрокси-5,6-диметил-бензотриазол

1-Гидрокси-2-пиридон

1-Гидрокси-2,4-диметил-2-пиридон раз с РаствоРом КН$04, три раза с 2н.

Раствором соды и один раз с водой сушат с сульфатом натрия, концентрируют и остаток растворяют с петролейным эфиром. Выход продукта 2,08 г1 т.пл. 99-104 . После перекристаллиэа" ции из смеси уксусный эфир/петролейный эфир; выход 1,7 г (83В от теоре60 тического); т.пл. 112-114

В. С 0,1 экв. 1-гидроксибензотриазола и 2 — Phe — ОТср

К раствору 0,92 г (5,5 мыслей)

НЙ - H ЧаС вЂ” ОМе, 0,72 мп 9 -этил9f морфолина и 67.5 мг (0,5 ммоля) 1в 25 мл диметилформамида. K нему добавляют 2,32 г (5 ммолей)йрз-йе-ОТр. и оставляют стоять 1 час при комнатной температуре. Исходный трипептид не был обнарУжен с помощью-тонкослойной хрбматографии. Диметилформамид отгоняют в вакууме и остаток растворяют с раствором бикарбоната натрия.

Осадок растворяют в уксусном эфире и извлекают в делительной воронке с раствором КН504 и водой. Остаток растирают с эфиром. Продукт аморфный. Его выход 3,6 r (82% от теоретического);

Щ - 23 5 (с = 1, в диметилацетамиде) .

В. Исследование с помощью тонкослойной хроматографии синтеза NpS-ipe1-Гидрокси-4-метил-2-пиридон

Пример 4. СоставЕ-Phe-ЧоР-оме.

A. С 1 экв. 1-Гидроксибензотри. азола и Z - Phe - OPcp

К раствору 0,92 г (5,5 ммоля)

НСЕ - Н - у е — ОМе, 0,72 мг К— атилморфолина и 675 г (5 ммолей) 1гидроксибензотриаэола в 10 мл диметилформамида добавляют 2,75 г(5 ммолей) Z - Bee — ОР . Смесь перемешиср вают 5 мин, концентрируют в глубоком вакууме, распределяют остаток между уксусным эфиром и 2 н.раствором соды извлекают в делительной воронке один

То же

Примерно 20 час

То же

То же

Примерно 4 дня

511852

1Ь

-гидроксибензотриазола в 10 мг диметилформамида добавляют 2,4 г (5 ммолей)

Z — РИе — OT > Перемешивают

5 мин и работают до выхода продукта

1,66 г (81Ъ от теоретического);

5 т.пл. 112-114

В. С 1 экв . 1-гидроксибензотриазолнатриевой соли и Z-Phe — 0)(р К раствору 0,92 г (5,5 ммолей) HC(! — Н

Va(! — ОИе в 10 мл диметилформамида добавляют 865 г (5,5 ммолей) натриевой соли 1-гидроксибензотриазола и

2,1 r (5 ммоля) Z -Phe — ОКр . Перемешивают 5 мин и работают по примеру A до выхода продукта 1,65 r (80Ъ от теоретического); т.пл. 116 и р и м е р 5 . синтез z - van -чае-Оие

К раствору 0,92 г (5,5 ммолей) цСЕ-Н вЂ” Vae — ОМЕ в 10 мл диметилформамида добавляют 865 r (5,5 ммолей)

1-гидроксибензотриазол-натриевой соли и 1,87 г (5 ммолей) Z-VaP — Ойр . Смесь перемешивают 5 мин и работают по примеру 4А до выхода 1,66 г (91Ъ от теоретического); т.пл. 108-110 C. и р и м е р б. синтез z-Len-qEu(QBu) 28

-Asn(Mba)- туч(В ) -ОН (ряд иэ инсулин-A-цепей).

1. Z — Ьеп-@au(OBu )-Asn (мЫч) — Туч(Ва )C t — ОН

К раствору 1,53 г (2 ммоля) ЗО

H — фи(ОВй) -Asn(Mbh)- Tgv(hu ) - OH и 270 мг (2 ммоля) 1-гидроксибензотриазола в 5 мл диметилформамида добавляют 1, 5 г (2, 2 ммоля) Z - Leo — ОР позволяют 10 мин стоять и концентрй- :"@ руют в глубоком вакууме. Остаток растирают с 2 н.раствором соды. Раствор отстаивают, остаток растирают с водой, затем отсасывают. Фильтруемый материал распределяют между 2,5о-ным 40

KHSO4 -раствором и уксусным эфиром.

Эфирный раствор сушат и концентрируют. Остаток растирают со смесью эфир/петролейный эфир и отсасывают.

Выход продукта 1,8 г (89Ъ от теоре- 45 тического); т.пл. 174 †1

Это соединение по тонкослойной хроматографии является идентичным пробе, которая получена с Z-Leo -OSu

Время реакции 24 час; выход 84Ъ. 66

Разный результат получают при применении З-гидрокси-4-окси-3,4-дигидроксихиназолина, l-гидрокси-5,6диметил-бензотриазола или 1-гидроксипиридона вместо 1-гидроксибензотри- 55 азола.

П. Получение исходного вещества

Н g(.u(O8u )- Лзп(МЬИ) - Тич(Ви ) OH

А. 2-льм(мьи) — trav(But) - он

100 r (О, 138 ммоля)7-Asst(Mba)- Tgv(But) — 0H суспендируют в смеси из 770 мл ди< сана и 200 мл воды. При 37 медленно прикапывают 138 мл 1 н.раствора едкого натра (тимолфталина в качестве индикатора). По окончании реакции 65 подкисляют с 300 мп 2 н.раствора лимонной кислоты. Выпавший продукт отсасывают и промывают водой. Переосаждают из смеси метанол/вода. Выход продукта 88 r (90Ъ от теоретического); т.пл. 212-213;(a(.)z = + 7,6 (с = 1, в диметилформамиде) .

Б . Н - А5Ь(МЬИ) - Tg V (5u ) — OH

Через раствор 87,5 r (0,123 моля)

Z"-ASn fivlbh) -trav(Bu }- ОН в ледяной уксусной кислоте, к которому добавляют немногоРоВ(ОН) /Ba SO4катализатора водород пропускают до тех пор, пока не прекратится образование COZ . Концентрируют и растирают остаток основательно с насыщенным раствором ацетата натрия. Отсасывают, сушат над Р Ое и высаживают из смеси тетрагидрофуран петролейный эфир.

Выход продукта 63 5 г (90Ъ от теоретического); т.пл. 207-209 .(А1д+ 11,1 (с 1, в ледяной уксусной кислоте).

В.Z-дЬ (ОВ u ) — Assi(A4bh) — Тцч(В л ) - ОН

К раствору б 3 г (О, 109 моля)

H-ASn (Mbh)- Tgv(But) QH з 250 мл диметилформамида добавляют при комнатной температуре 47,4 г (0,109 моля) Z — qPv(OBu ) -O>4

1 и отстаивают в течение 20 час при комнатной температуре. Затем вещество высаживают водой, сушат над Р> ÎS и пересаживают из смеси уксусный эфир/ петролейный эфир. Выход продукта

75,5 r (77Ъ от теоретического); т.пл. 166-170 ; (с i = + 1,80 (с=.l, в диметилформамиде).

Г. H — gBv(OBu+) — Asn(hhbh) — Tgv(Bv ) ОН

74, 7 r (83,9 ммоля) Z- gfv(OBut)АЗп(МЫ 1) — Тц /(Яс()ОН растворяют в смеси из 400 мл ледяной уксусной кислоты и 400 мл метанола и по примеру Б каталитически гидрируют и перерабатывают. Для очистки вещество один раз кипятят с водой, отсасывают и сушат. С помощью кипения с уксусным эфиром вещество можно очистить лучше. Выход продукта 53,4 г (84Ъ от теоретического); т.пл. 221-223 (с ) 33,1 (с = 1, в ледяной уксусной кислоте).

Пример 7. Синтез я-фа-о(Lee-чае -0Hz (ряд из секретина) .

А. Z-Ьеа -Vae — MH . к раствору 13 г (66 ммолей) HBVH

«ЦЕ- МН, в 180 мл диметилформамида добавляют 8,91 г 1-гидроксибензотриазола, 8,6 мл М -этилморфолина и 30,8 r (60 ммолеи) 2-len-OPcp.

Смесь перемешивают 10 мин при комнатной температуре и затем концентрируют в глубоком вакууме. Остаток размешивают последовательно с 2 н.раствором соды, водой, 2,5Ъ-ным раствором

КНЬО4 и водой, отсасывают и сушат при

50 над Р> О . Выход продукта 21,3 r (98Ъ от теоретического).

511852

17

Такой же результат получают при применении З-гидрокси-окси-3,4-дигидрохиназолина, 1-гидрокси-5,б-диметилбензотриазола или 1-гидроксипиридона вместо 1-гидроксибензотриазола. 5

Б. НСЕ-Н-1.Е - Vae — НН,.

К суспензии 21 r (57,8 ммолей)

Z-Len- Чай - NH> в смеси из

200 мл диметилформамида и 200 мл метанола добавляются(ОН) Вс ВО4 катализатор, При перемешивании через реакционную смесь проводят водород, причем прикапыванием 1 н.метанольного раствора НСР выдерживают РН 5 с помощью автотитратора. После того, как больше не воспринимается НСе раствор, отсасывают катализатор и концентрируют фильтрат. Остаток растирают с эфиром, отсасывают и сушат при 50 . Выход продукта 15,4 г (100Ъ от теоретического); т.пл. 138-140 . 20

Продукт по тонкослойной хроматографии однообразный.

В. Z-fey — Leo — Yae — ИН, 15,4 г (57,8 ммолей)НСЕ-Н-1.еи-Vae-mg; растворяют с 7,52 мл g --этилморфо- 25 лина и 7,88 r 1-гидроксибензотриазола в 120 мл диметилформамида. К этому добавляют 22, 5 r Z — цыц — OT

cp смеси дают стоять 5 мин и концентрируют с глубоким вакуумом. Остаток растирают с 2 н.раствором соды, отсасывают и промывают водой. Сушат над

Pe0 и затем кипятят с уксусным эфиром. Для очистки мох:но переосаждать из смеси тетрагидрофуран/петролейный эфир. Выход продукта 21,8 г (90 о от теоретического); т.пл. 184-186 (сС ) — 12,8 (с = 1, в диметилацетамиде).

Г. HCe — H -gEy — .еи -Vae — NH

20,0 r (47, б ммолей ) Z-цыц- Lee- voe — йн, гидрируют в 200 мл смеси метанол/диметилформамид (1:1) и перерабатывают. Вещество несколько гигроскопично и для очистки его переосаждают на. смеси метанол/эфир. Сушат над Р2 05 и парафиновыми обрезками. Выход йродукта 13,5 r (88Ъ от теоретического); т.пл. 209-211 56

g.Z-Qev-fey; LQrl- Vae — NH>

К раствору 3, 23 г (10 ммолей ) нсе -í- gey- Len - чае — кн, .

1,3 мл N -этилморфолина и 1,35 г (10 ммолей) 1-гидроксибен3отриазола в 20 мл диметилформамида добавляют

4 r (10 ммолей) -qeu — ОНр и позволяют стоять 10 мин. Выпадает студень.

Разбавляют с эфиром, высадившееся вещество отсасывают, быстро сушат и перемешивают с 2 н.раствором соды.

Промывают водой, Раствором KHSO4 и водой, сушат над Р 05 и кипятят с уксусным эфиром. Охлаждают до комнатной температуры, отсасывают и промывают уксусным и петролейным эфирами. При 65

40 — 50 сушат над Р> О и обрезками парафина. Выход продукта 5 r (91Ъ от теоретического); т.пл. 242-244 (d.) - 25,2 (с=1, в ледяной уксусной кислоте).

Такой же результат получают при использовании З-гидрокси-4-окси-3,4дигидрохиназолина, 1-гидрокси-5,6диметил-бензотриазола или 1-гидроксипиридона вместо 1-гидроксибензотриазола.

Пример 8. Синтез Z-РиО-18е-дВумнд

Л. (Åe- с Ец - Мн

44, 4 r (О, 1 моля) 2-iee -Отср и 11 г (0,1 моля) HCe — Н -фц-ЬП(2 растворяют вместе с 1, б г (10 ммоля) 3-гидрокси-4-окси-3,4-дигидрохиназолина и 130 мл М -этилморфолина в 700

800 мл диметилформамида. Затем концентрируют в глубоком вакууме и остаток растирают с раствором бикарбоната натрия, отсасывают, промывают водой, сушат и для дальнейшей очистки растворяют в диметилформамиде и высаживают смесью эфир/петролейный эфир (1:1).

Выход продукта 28,5 r; т.пл. 202 ; (< ) — 8,1 (с = 1, диметилацетамид).

Вычислено, Ъ: С 59,80; Н 7,21;

М 13,08

С16Н2ЬМь04 мол. в 321,4) .

Найдейо, Ъ: С 59,6; H 7,2; 14 12,8

Б. Z У О вЂ” lee — @РАЙ вЂ” МН

К раствору 20 r (62,2 моля )

z- ме — gey — NH> и 60 мл метанол/диметилформамид (3:1) добавляют немного РЙ (OH)< Ba504 — катализатора. При перемешивании через эту реакционную смесь пропускают водород, причем прикапыванием 1 н.метанольного раствора НС с помощью автотитратора выдерживают РН 4,5. После того, как больше не воспринчмается HCP раствор, отсасывают катализатор, и фильтрат концентрируют. Остаток растворяют в 100 мл диметилфсрмамида. нему добавляют 23 г (62 ммоля)

7-pvQ — ОМр, 8,1 мл N -этилморфолинами, 1,5 г (9, 4 ммоля) 3-гидрокси-4-скси-3,4-дигидрохиназолина; Смесь перемешивают 15 мин и концентрируют в глубоком вакууме. Остаток поглощают уксусным эфиром и схлаждают. Выпадает осадок, который отсасывают и последсвательно растирают с раствором бикарбсната натрия, 2 н.НСГ и водой. Сушат и для дальнейшей очистки хсрошо растирают с уксусным эфиром, отсасывают и сушат. Вьход продукта 20,7 г (80Ъ от теоретического); т,пл. 182-184-; (aL) — 63,2 (с = 1, метанол).

Такой же результат получают при применении 1-гидрокси-4-метил-2-пиридона, 1-гидрокси-б-метокси-бензотриазола или 1-гидрокси-5-метил-бенэо511852

19

20 триазола вместо производного хиназолина.

П р и M е р 9. Синтез Z-Asp(OBu )-ие - ае-ОЕи-7р- Leu- iQe - As@- Thvfaut) OBd

1. Получение исходного вещества

CH COOH. H -Phe-VaE -gQu-Tvp-Leu-)ЕЕ-ASh-Thea)DQ4

А. 2-3Lsn - Thv(But) — OBu+.

42,85 г (161 ммолей) Z — Asm — CH, 43 г (161 ммолей) маслянного НСЕ-H-Thv(But)-0But полученного путем каталитического гидрирования Я- Thv(But)-OBut

1 при добавлении Meòàíoëüíorî НСЕ при рН 4,5 и 21,75 г (161 ммолей) 1-гидроксибензотриазола растворяют в 325 мл диметилформамида. Добавляют 21 мл

К -этилморфолина и при 0 охлажденный раствор 35,45 г дициклогексилкарбодиимида в 80 мл диметилформамида. Перемешивают 1 час при 0 и 1 час при комнатной температуре, отсасывают осадок и концентрируют Фильтрат в глубоком вакууме . Остаток распределяют между уксусным эфиром и раствором

htaHCG . Срганическую фазу экстрагируют в делительной воронке с 2,5Ъным раствором КН504, насыщаемым раст- 26 вором НаНСО> и водой, сушат сульфатом натрия и концентрируют. Растворяют с петролейным эфиром и отсасывают.

Выход 65,8 г, т.пл . 110-115 . Перекристаллизовывают из смеси уксусный. эфир/петролейный эфир. Выход продукта

52,4 (68% от теоретического); т.пл. 120-122 ; (с(.) — 7,6 (с 1, метанол).

Б.НСЕН-А5п - Thv(But) -05ut. и

К раствору 44, 7 г (93,2 ммоля)

z-Asn — ThY(But)-OBut в 300 мл метанола добавляют немного Рс{(ОН) Вс б04 катализатора. При перемешивании через эту реакционную смесь пропускают во- 40 дород, причем путем прикапывания 1 н. метанольной соляной кислоты с помощью автотитратора выдерживают рН 4,5.

После отфильтровывают от нерастворимых и на ночь устанавливают в холо- 46 дильник. На следующий день отсасывают выпавший осадок и промывают эфиром.

Выход продукта 33,65 r (95,6В, от теоретического)1 т.пл. 110-113 ; (oLj7 — 2,6 (с 1, метанол). о D

Вычислено, Ъ: С 50, 32; Н 8, 45;

М 11,01.

С, Й57М505СЮ (мол . a . 382 ) .

Найдено, Ъ: С 500у Н 9,0; И 10,9.

В. Z- { Ев -Лви - туч(Вас) — ОВы Й к раствору 21,8 r (82 ммоля)е-!ED-ОН, 66

31, 3 Г (82 ммоля) НСЕ-3lsh-Thv{But)QBut гидрокситриазола и 10, 7 мл К -этилморфолина в 150 мл диметилформамида добавляют при 0 охлажденный раствор

18,1 г дициклогексилкарбодиимида в

70 мл диметилформамида. Перемешивают

1 час при 0 и 1 час при комнатной температуре по примеру А. Конечный продукт растворяют в 150 мл уксусного эфира, отфильтровывают нераствори- 66 мые остатки и размешивают в 750 мл петролейного эфира. Выход продукта

42,37 r (87Ъ от теоретического); т. пл. 144-146; (а(j — 20, 5 (с=l, метанол) .

Вычислено, Ъ: С 60,82; H 8,14;

М9,46

Сьо Н45К4ов (мс л. в. 592, 75)

Найдено, Ъ: С 60,9; Н 8,4; К 9,2.

Г.НСЕ Н-4Ее -А5И вЂ” т{тч(Ви ) — Oaut

38,6 r (65,2 ммолей)2 -ЕВ -Жи- Thv (But — ОВи+) каталитически гидрируют по примеру Б в метаноле. Вещество растворимо в эфире и под высоким вакуумом дает аморфный продукт. Выход продукта 33,2 r (100Ъ от теоретического); oLD — 5,9 (с 1, метанол).

Вычислено, Ъ: С 53,37; Н 8,76;

М 11,31.

С72 Н45 С1М(0 (мол. в. 495,07)

Найдено, Ъ: С 53,0; Н 9,0; И 10,9.

Д. 2-Lett - j(e - Asm - Thv(But ) pBu

К раствору 16,4 г (61,8 ммоля)

z — ьел — OH, 30,6 г (61, 8 ммоля)

HCQH - ice-Аэи — Thv(But) - OH< t

8,34 г 1-гидроксибензотриазола и 8,1мл

И -этилморфолина в 150 мл диметилформамида добавляют при 0 холодный раствор 13,6 г дициклогексилкарбодиимида в 60 мл диметилформамида. Перемешивают 1 час при 0 и 1 час при комнатной температуре и перерабатывают по примеру A. Вещество растирают с петролейным эфиром и отсасывают. Выход 39,3 г; т ° пл.173-176 . Высаживают из смеси уксусный эфир/петролейный эфир. Выход продукта 37 5 г (86В от теоретического); т.пл . 173- 76 (дС) о — 34,3 (с = 1, метанол).

Э

Вычислено, Ъ: С 61,26; H 8,42;

И 9,92

С Н И505 (мол. в. 705,9)

Найдено, В: С 61,4; Н 8,7; N9,9.

Е. HCQ - Н вЂ” Lee-1ЕŠ— ASn - Thv(But)— ОВи

35,2 r (50 ммолей) z-реп- {ее - As им -() - 0ви гидрируют по примеру

Б каталитически в метаноле. Вещество кристаллизируется при растирании с эфиром. Выход продукта 28,6 г (94В от теоретического); т.пл. 192-193 (разложение); (oCJ = — 17,9 (с = 1, метанол).

Вычислено, В: C 55,26; H 8,96;

И 11,51.

С25 Н54 C lh(507 (MOJI IIе,608) °

Найдено, Ъ: С 55,3; Н 9,0; К 11. 4

Х(. Z Tvp- LeII — {le -Л5П- Thv(But)-Obu

К раствору 26,2 r (43,1 ммоля)

HcQ - н-реп- {ее - Авя- Thv (Ви )- ohu 14, б г (43,1 ммоля) Z-— ?чр — OH, 5,82 г 1-гидроксибензотриазола и 5,6 мл этилморфолина в 150 мл диметилформамида добавляют при 0 холодный раствор 9 5 г дициклогексилкарбодиимида в 60 мл диметилформамида. Перемеши511852

21

22 вают 1 час при Оо и 1 час при комнат ной температуре, отсасывают от осадка и фильтрат концентрируют. Остаток растирают с раствором NaHCO-, отсасывают и сушат. Перекристаллизовывают из изопропанола. Выход продукта

33,8 г (88Ъ от теоретического); т.пл. 228-229 ; (d ) = — 39,5 (с = 1, метанол).

Вычислено, Ъ: С 63,23; Н 7,79;

1410,99

С47 НЬ9Ь(7010 (мол. в 892 1)

Найденс, Ъ: С 63,0; Н 7,8; N 10,7.

3. Нсе н- 7vp-реп-)ee-Asti — Thv(su )-оВа

31,2 г (35 ммолей)2-Yv -i en- ice-ns ТЬ7фм )-Щ каталитически гидрируют в 200 мл смеси диметилформамид/метанол (1:1) по примеру Б. Остаток растирают с эфиром. Выход продукта

27,2 г (98Ъ от теоретического); т пл. 215О (разложение ); (с()%-28 0 (с = 1, метанол). 1)

Проба переосаждается из смеси метанол/эфир; т. пл. 217 о (разложение); (Ц = — 28,4 (с = 1, метанол) .

Вычислено, Ъ: С 58,97; Н 8, 12; 28

N 12,34

С>> Нь4 М, О С 6 (мол. в. 794,45)

Найдено, Ъ: С 57,2; Н 8,2; )(11,8.

И. Z — - Phe — Vae — ОН

10, 7 г Z- Phe — Vae - ОМе растворяют 30 в 200 мл смеси д оксан/вода (68:2) .

Титруют с 27 мл 1 н.раствора НаОН с тимофталеином. Нейтрализуют с 2 н.раствором HCR и раствор концен-рируют. Остаток распределяют между уксусным эфи- Д5 ром и 2 н. НС E. Уксусно-эфирную фазу промывают водой, сушат с сульфатом натрия и концентрируют. Остаток растирают с эфиром и отсасывают. Выход продукта 9,45 r (92Ъ от теоретичес- щр кого); т.пл. 148-149 . Переосаждают из смеси уксусный эфир/петролейный эфир выход 9,2 г; т.пл. 148-150е; (с(.) = — 8,8 (с = 1, метанол).

Вычислено, Ъ: С 66 32 Н 6 58 4

N 7,02.

О 5-. (м(Найдено, Ъ: С бб;б; Н 6,7; М 7 2

K. 2- Phe Vae — о8и - OBu+

К раствору 8,0 г (20 ммолей)

Phe- VaP — OH 4, 8 r НСЗН-qpu-ÎBè+

2, 7 г 1-гидрокситриазола и 2, б мл

N -этилморфолина в 40 мл диметилформамида добавляют при 0 холодный о раствор 4,2 г дициклогексилкарбодиО имида. Перемешивают 1 час при 0 и

1 час прн комнатной температуре, отсасывают от осадка и фильтрат концентрируют. Остаток растирают с раствором МаНСО, отсасывают и промывают, водой.

Выход продукта 11,65 г (100Ъ от теоретического) т.пл. 219-221 (разложение); 1, oL) = — 35,7 (с = 1, метанол). 65

Вычислено, Ъ: С 63,91; H 7,27;

И 9,60

С Н4> N40 (мол. в. 582,7)

Найдено, Ъ: С 64,2; Н 7,7; Й 9,7

Л. 7-Рие -VoB-j(.u ОН

11,1 г (19 ммолей)2-Р77е-Vae-g(u-03è

t растворяют в 30 мл трифторуксусной кислоты. Через 30 мин при комнатной температуре концентрируют и остаток растирают с эфиром и отсасывают . Продукт для дальнейшей очистки кипятят с уксусным эфиром, смешивают с петролейным эфиром, отсасывают и сушат.

Выход продукта 8,45 r (85Ъ от теоретического); т.пл. 225-227 ; (А )7, 10,7 (с = 1, диметилацетамид).