Способ определения вида антибиотика
Иллюстрации
Реферат
О П kptсд Й И" E
ИЗОБРЕТЕНИЯ
:и1 5!4035
СОЮЗ CGBQECKHX
Социалистичесних
Республик
К азтОРСКОММ СВИДЕТЕЛЬСтВМ (61) Дополнительное к авт. свпд-ву (22) Заявлено 26.08.74 (21) 2056713/13 (51) 4!. Кл, - С 120 9 00
С 12К 1/00 с присоединением заявки №
Государственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (23) П р нор итет 15.05.72
Опубликовано 15.05.76. Бюллетень ¹ 18
Дата опубликования описания 11.06.76 (53) УДК 615.779.90 (088.8) (72) Автор изобретения
Е. П. Сиволодский (71) Заявитель (4) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА АНТИБИОТИКА
Изобретение относится к области медицинской микробиологии.
Известен способ определения вида антибиотика, по которому в качестве антибиотикоустойчивых тест-микроорганизмов используют хромосомные мутанты.
Однако такой способ трудоемок и длителен, кроме того, невозможно получить мутанты, устойчивые более чем к двум антибиотикам.
С целью упрощения способа и возможности 10 определения вида антибиотика в присутствии других антибиотиков по предлагаемому способу в качестве тест-культур используют рекомбинаты с эписомной устойчивостью к антибиотикам. 15
Для получения коллекции рекомбинантов тест-микроорганизма со всеми необходимыми сочетаниями генов антибиотикоустойчивости в
R-факторах 1 мл суточной бульонной культуры донора, например, энтеробактерий с 20
R-фактором и реципиента, например Escherichia co1i, вносят в колбу Эрленмейера с
10 мл бульона Хоттингера (рН 7,4 — 7,6) и инкубируют при 37 С в течение 1 — 2 час. Затем
0,1 мл коньюгационной смеси бактерий вно- 25 сят на поверхность селективной среды в чашке Петри, растирают шпателем и инкубируют при 37 С в течение 18 — 24 час. В качестве селективной среды используют среду Эндо, содержащую 70 мгк/мл налидиксовой кисло- 30 ты, к которой устойчив микроорганизм — реципиент и 50 — 100 ед/мл одного из антибиотиков, соответствующего генам антибиотикоустойчивости R-фактора. Колонии рекомбинатов пересевают секторами на среду Эндо, содержащую раздельно по 50 — 100 ед, мл антибиотиков, соответствующих данному R-фактору, с целью уточнения вида генов антибиотнкоустойчивости, полученного К-фактора и проверки чистоты культуры.
Далее пересевают культуру в мясо-пептонный бульон для последующего изучения уровня чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений и в полужпдкий (0,4о/о) мясо-пептонный агар под слоем стерильного вазелинового масла для хранения культуры.
Созданную коллекцию тест-культур можно использовать многократно.
Способ осуществляется следующим образом.
Исследуемый материал содержащий антибиотики, вносят в определенном количестве в расплавленный и охлажденный до 45 C питательный агар и разливают в стерильные чашки Петри (1 чашка на 8 — 16 штаммов).
После застывания поверхность питательной среды засевают штрихами по одной стандартной петле суточной бульонной культурой всех штаммов тест-культур и инкубнруют при 37 С в течение суток. По сочетаниям роста н от514015
Формула изобретения
Ба/ анл/иФи оп7инаа о ис-л /у мам суда ms ///
Ламери и/ест- // Jrbm Р
1 Z 345 6 7 8 0 70 1772 /З 7//15 70 77 18 702027 ZZ 2а2//25 2Б 27 2829о0 7J р а/гл/е //стина лист -//ал/т ло гена/» oumu ////muu// c///////w// ое///и /с - анпа cr т л с я к тл тс 7/r 7А лс лклА сА ск Ак тлстлА тл тсА 7с 7Ак сА лск я сяк/усАтлс тп gx с лс к
7ЛСАК лс к
T К
7ЛСК
АК
Л К лспо
Tлк
7лс
АК лс
° °
° °
Э ° а е
° Ф прон//е 7 -тетраииклинЛледомице-, С-стрел/лама//ьи -ампацплл//н,К- нанамр//ин
Составитель Г. Смирнова
Редактор Н. Аристова Техред 3. Тараненко Корректор Н. Аук
Заказ 1306/17 Изд. ¹ !330 Тираж 575 Подписное
ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская нао., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 сутствия роста тест-культур определяют с помощью таблицы виды антибиотиков в исследуемом материале. При этом для некоторых антибиотиков ввиду общности механизма устойчивости тест-культур к антибиотикам близкого химического строения определяют их групповую принадлежность, например тетрациклины, пенициллиназоустойчивые пенициллины, аминогликозиды (канамицин, неомицин, мономицин) . Чувствительность метода соот- 10 ветствует уровню видовой чувствительности к антибиотикам микроорганизма, использованного для создания коллекции тест-культур.
Пример. 20 мл мочи больного, подвергающегося натибиотикотерапии, вносят в колбу 15 с 80 мл охлажденного до 45 С питательного агара. Смесь разливают в 4 стерильные чашки Петри. После застывания и просушивания питательной среды ее поверхность засевают штрихами суточными бульонными культура- 20 ми 31 штамма рекомбинантов тест-микроорганизма Escherichia coli 51 по 8 культур на чашку. Через 24 часа инкубации при 37 C на поверхности среды вырастают штаммы тестмикроорганизмов № 10, 16, 22, 23, 25, 27, 30, 31.
B таблице приведены данные для определения вида антибиотика в исследуемом субстрате. По этой таблице находят, что рост указанных штаммов при угнетении роста остальных штаммов коллекции соответствует наличию в питательной среде левомицетина и стрептомицина.
Способ определения вида антибиотика по сочетанию роста и угнетения роста антибиотикоустойчивых тест-культур при их инкубации в присутствии исследуемого материала, отл ич а ющийся тем, что, с целью упрощения способа и обеспечения возможности определения вида антибиотика в присутствии других антибиотиков, в качестве тест-культур используют рекомбинанты с эписомной устойчивостью к антибиотикам.