Способ выделения уридина
Иллюстрации
Реферат
<и! 5!5758
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Св!оз Советскии
Социалистических
Республик (61) Дополн ителыное к авт. саид-ву (22) Заявлено 04.12.74 (21) 2080042/04 с присоединением заявки !! (23) Приоритет
Опубликовано 30.05.76. Бюллетень М 20
Дата опубликования описания 22.06.76 (51) М. Кл.- С 07Н 19, 02
С 07Н 1/06
Государственный комитет
Совета оюинистров СОСР по лолам изобретений и открытий (53) УДК 547.963.32 (088.8) (72) Авторы изобретения У. Я. Микстайс и И. Я. Штернберга (71) Заявитель Латвийский филиал Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института химических реактивов и особо чистых веществ (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ УРИДИНА
Изобретение относится к области выделенуя нуклеозидов, а именно к усовершенствованному способу выделения уридина, который применяется в биологических и биохимических исследованиях.
Известны способы хроматографического и химического выделения уридина из уридинсодержащих растворов.
Хроматографически уридин выделяют на сефадексе, катионитах, активированных углях, полиакриламидном геле, на этилцеллюлозе.
Хроматографические способы выделения являются малопроизводительными и трудоемкими.
Известно выделение уридина из водных уридинсодержащих растворов осаждением в виде малорастворимых бариевосвинцовых солей.
Известен также способ взаимного разделения смеси нуклеозидов из водных растворов гидролизата рибонуклеиновой кислоты (РНК) в виде кальциевых солей. При этом уридин осаждается вместе с кальциевой солью цитидина из-за сходной растворимости кальциевых солей уридина и цитидина. Выделение чистого уридина этим способом невозможно.
Известен способ выделения уридина из водных уридинсодержащих растворов путем селективного осаждения с использованием хлористого цинка, щелочи и ионообменной смолы.
Несмотря на высоку!о эффективность осаждения (91,3 — 99,3 !О ) после обработки амберлитом для удаления ионов цинка выход уридина достигается только 85 /О.
Сложность проведения процесса по известному способу заключается в продолжительности процесса и трудоемкости разделения уридина от примесей цинка. Для выделения уридина по известному способу необходимо обра10 батывать (фильтровать, обрабатывать ионнообменной смолой, элюировать, упаривать) большие объемы разбавленных растворов (1000 л на 1 кг уридина). Продолжительность процесса связана также с приготовлением !
5 ионнообменной смолой и с последующей ее регенерацией. Осаждение уридина по известному способу достигается только большим избытком солеобразующего агента — хлористый цинк добавляют в большом избытке
20 (10: 1 в весовом пли 20: 1 в малярном соотношении). При рН 7 — 8 хлористый цинк гидролизуется с образованием труднорастворимой в воде гидроокиси цинка, которая из водных растворов осаждается вместе с уриди25 ном.
С целью увеличения выхода и упрощения процесса выделения по предлагаемому способу в качестве солеобразующего агента использ1 ют гидроокиси или алкоголяты ще,чоч30 ных металлов и процесс ведут в низших
515758
55
Составитель С. Чернова
Текред М. Семенов Корректор Т, Добровольская
Редактор Т. Никольская
Подписное
Тираж 575
Изд. ЛЪ 1368
Заказ 1356/14
Типография, пр. Сапунова, 2 спиртах, а для осаждения соответствующих солей добавляют менее полярные, чем спирты, органические растворители (например, диэтиловый эфир, ксилол, гептан, гексан) с последующей обработкой кислотами и перекристаллизацией известным способом.
Предлагаемый способ позволяет выделить хроматографически чистый уридин с хорошим выходом также гидролизатов РНК после выделения яденозина, гуанозина и цитидина.
В связи с тем, что гидроокиси и алкоголяты щелочных металлов обладают большей основностью по сравнению с металлами 11 и IV групп периодической системы, уридин легко образует соли со щелочными металлами, Для этого нет необходимости применять избыток осаждающего и солеоорязующего агентов.
Алкоголяты и гидроокиси щелочных металлов растворпмы в низших спиртах и не осаждаются совместно с уридином при добавлении ацетона, диэтилового эфира и других менее полярных органических растворителей.
Пример 1. В 10 мл метилового спирта, содержащего 1,0 r урпдина, растворяют 0.,5 r едкого натра, добавляют 50 мл диэтилового эфира. Натриевую соль уридина сразу после отделения растворяют в 5 мл дистиллированной воды, раствор подкисляют концентрированной серной кислотой до рН 3 — 5, добявля1от 50 мл ацетона и отфильтровывгпот сульфат натрия. Фильтрат упаривают до образования густой сиропообразной массы, для кристаллизации добавляют этиловый спирт. Г1олучают 0,97 г (97,%) хроматографпчсскI. истого уридина, т. пл. 163,5 — lбб .
Ry О,бб (Silufol ГЛ 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2) .
Содержание основ --,о вещества 98%.
Пример 2. В 10:,I (0,41 моль) раствора уридина в метнлово.,: спирте растворяют
0,01 моль метилатя ..птия,, добавляют 50 мл ацетона и отфильтролывяют литиевую соль уридина, которую сразу после отделения растворяют в 10 мл дистп IJIHpoBBHHOH воды. Далее обрабатывают по примеру 1.
Получа1ст 0,98 r (93% ) хроматографически чистого уридина, т. пл, 163,5 — 166 С.
RJ 0,67 (Silufol UV 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного aiI»IIIaка и воды 7: 1: 2).
Содержание основного вещества 98%.
Пример 3. 150 мл гидролизата РНК (после отделения гуанозина, аденозина и цитидина сернокислого), содержащего 7,3 r уридина, разбавляют 750 мл метилового спирта, добавляют 5 r активированного угля, перемешивают и фильтруют. K фильтрату добавляют насыщенный раствор гидроокиси натрия в ме5
45 тиловом спирте до рН 11 — 12, обрабатываю1 активированным углем и фильтруют. К раствору добавляют 2 л ацетона и отделяют натриевую соль уридина, которую сразу после отделения растворяют в 25 мл дистиллированной воды, подкисляют до рН 3 — 5, добавляют активированпый уголь и фильтруют.
Фильтрат упаривают. Далее процесс проводят по примеру 1.
Получают 6,45 г (90%) хроматографически чистого уридина; т. пл. 163 — 166,5 С.
RJ О,бб (Silufol UV 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2) .
Содержание основного вещества 99о/о.
П р и мер 4. В50 мл этилового спирта,,содержащего 1 г уридина, растворяют 0,48 r гидроокиси калия и добавляют 50 мл ксилола, отделяют калиевую соль уридина и далее обрабатывают по примеру 1.
Получают 0,89 г (89% ) химически чистого уридина; т. пл. 163,5 — lбб С.
R; 0,66 (Silufol UV 254, соотношение изопропилового спирта, концентрированного аммиака и воды 7: 1: 2) .
Содержание основного вещества 98,5 /о.
П р имер 5. К 55 мл 85%-ного пропилового спирта, содержащего 1 r уридина, добавляют насыщенный раствор пропилата натрия в пропиловом спирте до рН 11 — 12 и 50 мл гептана. Далее обрабатывают по примеру 1.
Получают 0,89 г (89%) химически чистого уридина; т, пл. 163,5 — 166 С.
RJ 0,67 (Silufol UV 254, соотношение изопропилового спирта, аммиака и воды 7: 1: 2).
Содержание основного продукта 98 /II.
П р и мер 6. К 50 мл этилового спирта, содержащего 1 r уридипа, добавляют насыщенный раствор этилата калия в этиловом спирте до рН 11,0 — 12,0 и добавляют 50 мл гексана. Отделяют калиевую соль уридина и далее обрабатыва1от по пример1 1.
Получают 0,90 г (90%) химически чистого урцдина; т. пл. 163,5 — 166 С, R; О,бб (Silufol UV 254, соотношение изопропилового спирта, аммиака и воды 7: 1: 2).
Содержя11ие основного вещества 99 /о.
Формула изобретения
Способ выделения уридина из уридинсодер>кащих растворов путем осаждения основными соединениями металлов в виде солей, отлии а ю шийся тем, что, с целью увеличения выхода и упрощения процесса, в качестве основпых соединений используют гидроокиси или алкоголяты щелочных металлов и процесс ведут ь пизшпх спиртах с добавлением менее полярных, чем спирты, растворителей.