Способ количественного определения производных рибонуклеозидов

Способ количественного определения производных рибонуклеозидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е „„5187оа

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

»

Всес„-киД..„.р,., етая тснт "--::.

»-зхнпчс сщ„е бЯю т. О т у .и" .и»е

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено14,03.74 (21) 2003688/04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано25,06.76.Бюллетень № 23 (45) Дата опубликования описания, 06.07.76 (51) М, Кл.

G 01 Я 21/24

G 01 H 31/08

Государственный комитет

Соаета Мнннстроа СССР оо делам изобретений н открытий (53) УДК 543.544:543. .426 (088.8) (72) Авторы изобретения В. П. Демушкин, Ю. Г. Пляшкек ч и Э..И, Будовский (71) Заявитель

Институт биоорганической химии им. М. М. Шемякина (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ПРОИЗВОДНЫХ РИБОНУКЛЕОЗИДОВ

Изобретение относится к способам анализа в химическом и микробиологическом про-1 изводстве рибонуклеоэидов и 5 -рибонуклеозидов, клинического анализа и диагностики

i заболеваний, связанных с нарушением мета болизма нуклеиновых кислот и их производ;ных, и нуклеотидного анализа в научных ис, следованиях.

Известен способ определения рибонуклес

:зидов, основанный на поглощении лучей в ультрафиолетовой области. Для укаэанного

:способа характерны длительность определе1 ния и сложность аппаратурного оборудования.

С целью упрощения способа, предлагает ся пробу вещества окислять иодной кисло:той и полученный продукт обрабатывать гидразидом Я -дансилглицина с последующим хроматографическим разделением флуоресцирующих продуктов.

Способ анализа заключается в том, что к водному раствору, содержащему перйодатокисленные: производные рибонуклеозидов аобввииии натрийвиетатныв буфер и воии»о спиртовой раствор, содержащий гидразид

5 -дансилглицина. Смесь выдерживали в . 1--»- . о течение 24 час. при 20 С. Дальнейшее раз,деление флуоресцирующих производных нуклеозидов и их детектирование проводили б стандартными методами.

Пример 1. Аналяз флуоресцирующих производных рибонуклеоэидов.

К 10,01 водного раствора, содержащего

2 10 моль перйодатокисленного аденозина, гуанизина, уридина, цитиднна или нх смеси, добавляют 5 уп L 0,3 ра натрийацетатного буфера (pH 5, О) и 0,5 мл водноспиртового раствора, содержащего 8.10 моль гидразида Ы -дансилглицина. Реак15 ционную смесь выдерживают в течение ,Ä24 час при 20 С.

Анализ флуоресцирующих производных

1 рибонуклеозидов проводят методом тонко ,слойной хроматографии на пластинке с поли® амидным слоем, алюент — четыреххлорис тый углерод: уксусная кислота: ацетон (4:

:; 1:4).

Получают следующие значения В

Гидразяд 3 -дансилглицина 0,93

Пример 2. Анализ флуоресцируюших производных рибонуклеозидов.

К 1 0 М водного раствора, содержащего

1,5. 10 моль перйодатокисленного аденозина, аденоэин-5-монофосфата> аденозиндифосфата и аденозицтрифосфата или их смеси, добавляют 5Q< 0,3 М натрийацетатного буфера (р11 5,0) и 0>5Р1 водно-спиртового раствора, содержащего 8. 10 - моль ги-9 дразцда М -дансилглицина. Реакционную о смесь выдерживают при 20 С в течение

24 час.

Флуоресцируюшее производное аденозина 0,85 уридина 0,77 цитидина 0,38 гуаниэица 0,26

11утем ступейчатого разбавления реакционной смеси с посл едуюшим ее хроматогра-, фическим анализом установили, что при визуальном- детектировании йспапьзуя ручной, ультрафиолетовый осветитель на 365 ммк из отечественного набора КТХ-01-3, мож-30 -Н но работать с 10 — 10 моль исследуемого вещества, Ю

2 .1

Анализ флуоресцируюших производных рибонуклеозидов проводят методом хромато-. .графии на пластинке с целлюлозой (Г1ЭИ),,элюент 1М млористый литий, предваритель-! но удаляя избыток гидраэида Я -дансилглицина промывкой метиловым спиртом, Получают следующие значения R

Гидраэид, N -дансилглицина 0,96

Флуоресцируюшее производное аденозина 0,77 аденозин-5-монофосфата 0,58 аденозиндифосфата 0,27 аде н ози нтр ифосфата 0,.09

Детектирование пяте t проводили визуаль

1 но, используя ультрафиолетовый осветитель на 365 ммк, рмула и з о б р е т е н и я

Способ количественного определения производных рибонуклеозидов, о т л и ч а юш и и с я тем, что, с целью упрощения способа, пробу вещества окисляют иодной кислотой, полученный продукт обрабатывают гидразидом и -дансилглицина с последующим хромать раф ческим разделением флуоресцируюших продуктов.

Составитель В. Гладков

Редактор О. Кузнецова Техред C. Габовда Корректор И. Мельниченко, Заказ 2678/285 Тираж 1029 Подписное

Ш-1ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал Illlll "11атент", г. Ужгород, ул. 11роектная, 4