Штамм в-1120-продуцент щелочной протеазы

Штамм в-1120-продуцент щелочной протеазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

v» 5l947l

Сова Советских

Сопиапистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 01.04.75 (21) 2120637/13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 30.06.76. Бюллетень Ке 24 (45) Дата опубликования описания 06.09.76 (51)M.Кл.е С 12 D 13/10

С 12 К 1/02

Государственный комитет

Совета Министров СССР по полам иаооретений и открытий (53) УДК 576.8 (088.8) (72) Авторы изобретения

Е. О. Добржанская и Л. И. Ерохина (71) Заявитель

Всесоюзный иаучно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов (54) ШТАММ BACILLUS SUBTILIS В-1120—

ПРОДУЦЕНТ ЩЕЛОЧНОЙ ПРОТЕАЗЫ

Изобретение относится к пищевой,промышленности, в частности к ферментному производству.

Известей штамм Вас. subtilis NRRZ 3411, продуцирующий щелочную протеазу в количестве 4000 мгlэкв тирозина в мин.

Известен штамм Вас. subtilis NRRZ В

3751 — продуцент щелочной протеазы с активностью 4050 ед/мл.

Однако для известных продуцентов щелочной протеазы характерен невысокий уровень биосинтеза фермента.

Цель изобретения — получить новый штамм, обладающий высоким уровнем биосинтеза щелочной протеазы.

Предлагаемый штамм Вас. subtilis В-1120 получен в результате генетико-селеиционных методов из исходного штамма Вас. subtilis

В-340.

Штамм Вас. subtilis В-1120 хранится в музее культур, промышленных микроорганизмов

ВНИИгенетики под номером ЦМПМ В-1120 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Грамположительная .палочка, подвижная со жгутиками, размером 2 — 2,5рХ0,6 — О,8р.

Образует споры размером 1 — 1,5pX0,6 — 0,9р.

Мясо-:пептонный агар. При илкубации в течение 48 час при 35 — 40 С образует колонии диаметром 2,5 — 3,0 мм круглой формы со слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета. Поверхность гладкая, матовая. Посев штрихом на мясо-пептонном агаре.

При инкубации в течение,24 час при 35 — 40 С рост хороший, край волнистый, поверхность гладкая, матовая, просвечивается на свет, цвет светло-желтый, консистенция маслянистая.

Посев уголком. Аэробная культур а. Рост на поверхности, по длине укола рост отсутствует.

Мясо-пе птонный бульон. При инкубаппп в течение 24 час при 35 — 40 С без встряхивания наблюдается помутнение среды, HB поверхности образует пленку; при встряхивании на качалке — сильное помутнение среды.

При стоянии образуется осадок.

Атаризованная среда Хоттингера. При инкубации .в течение 24 час при 35 — 40 С образует колонии диаметром 3 мм круглой формы со слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета. Поверхность гладкая, матовая.

Агаризованная си нтети чес кая среда Счицайзеяа. При и нкубации в течение 48 час п ри

35 — 4О С образует колонии диаметром 1,5—

2,0 мм круглой формы с волнистым краем, серого цвета. Поверхность морщинистая, матовая.

Жидкая, минимальная среда Спицайзена с 5 о глюкозы. При инкубации в течение

519471

0,5

0,5

7 балл. пивное сусло

Бульон Хоттингера

2, г/л:

80,0

8,0

4,0

12,0

1,5

0,5

0,1

7,2 — 7,3

Ферментационная среда

Крахмал осахаренный

Кукурузный, экстракт

Дрожжи пивные (NH4) НР04

КС1

Mg 804

Са С1 рН,среды

Для засева посевной среды используют суспензию спор, приготовленную из двухсуточной культуры штамма ВНИИгенетика-5, выращенного на среде 1. Посевной материал .выращивают в колбах Эрленмейера емкостью

250 мл на качалке (200 —.220 об/мин) в тече.вие суток при 37 С. Ферментационную среду .засевают 2 — 4 посевного материала. Процесс ферментации проводят в колбах Эрленмейера емкостью 250 мл с 30 мл ферментационной среды на качалке (200 — 220 об/мин) в течение 56 час при 37 С. Через указанное время активность щелочной протеазы в куль24 час при 35 — 40 С без встряхивания наблюдается слабое помутнение среды, рост на поверхности, при встряхивании на качалке— сильное помутнение среды. Через 48 час инкубации на качалке образует споры. На ломтиках картофеля. Рост обильный после инкубации в течение 24 час при 35—

40 С, цвет культуры серовато-белый. Пигмент при росте на картофеле не образует.

Биохимические свойства.

5Келатину р азжижает хорошо,,послойно.

Молоко пептонизирует и подщелачивает.

Клетчатку не разрушает и не усваивает.

Нитраты в нитриты не восстанавливает.

Кр а хм ал,гидр ол из ует.

Усваивает глюкозу и глицерин.

Не усваивает галактозу, арабинозу, фруктозу, лактозу, маннозу, ксилозу, мальтозу, сор бит.

Проявляет антагонистические свойства в отношении 41icrococcus f1 avus.

Штамм хранят в виде лиофильновысушенных культур, а также на агаризованной среде Хоттингера под вазелиновым маслом. рН действия щелочной протеазы 10 — 11, оптимальная температура 60 С. Количество щелочной протеазы в культуральной жидкости определяют методом Ансона — Мирского, в качестве субстрата иопользуют казепн, рН 10,5.

Пример. Для выращивания, посевного материала и процесса ферментации штамма

Вас. subtilis используют, питательные среды следующего состава:

Среда 1 для выращивания посевного материала, ч: туральной жидкости составляет 8.000—

10.000 ед/мл.

Формула изобретения

Штамм Bacillus subtilis В-1120 — продуцент щелочной протеазы, который хранится в музее, культур, промышленных микроорганизмов ВНИИгенетики под номером ЦМПМ

B-1120 и характеризуется следующими признаками.

Морфология. Грамположительная палочка размером 2 — 2,5р Х 0,6 — 0,8п„образует опоры размером 1 — 1,5р,Х0,6 — 0,9р.

Культуральные признаки.

Мясо-пепто нный агар. При инкубации в течение 48 час образует колонии диаметром

2,5 — 3 мм круглой формы со слегка.во.тнистым краем, желтовато-белого цвета, поверхность гладкая, матовая.

Рост при посеве штрихом хороший, край волнистый, поверхность гладкая, матовая, просвечивается на свет, цвет светло-желтый, консистенция маслянистая.

Агаризованная среда Хоттингера. При инкубации в течение 24 час образует колонии диаметром 3 мм круглой формы со слегка волнистым краем, желтовато-белого цвета, ;поверхность гладкая, матовая.

Агаризованная синтетическая минимальная среда. При,инкубации в течение 48 час образует колонии диаметром 1,5 — 2,0 мм круглой формы с волнистым краем, серого цвета. Поверхность морщинистая, матовая.

Жидкая синтетическая минимальная среда с добавлением 5 глюкозы. При инкубации в течение 48 час при встряхивании образует опоры.

При росте в мясо-пептонном бульоне, а

4п также в жидкой синтетической среде с глюкозой через 24 час инкубации без встряхивания образует пленку на поверхности, при аэрации — сильное помутнение.

На,картофеле рост обильный, цвет куль45 туры серовато-белый. Пигмент не образует.

Оптимальный рост при 35 — 40 С.

Биохимические свойства. Келатину разжижает хорошо, послойно.

Молоко пвптонизирует и .подщелачивает.

Клетчатку не усваивает.

Нитраты в нитриты не восстанавливает.

Кр а хм ал гидр ол и зует.

Усваивает глюкозу, глицерин, не усваивает галактозу, арабинозу, фруктозу, лактозу, маннозу, ксилозу, мальтозу, сорбит, Обладает антагонистическими свойствами з отношении Micrococcus flavus.

Источники информации, принятые во внимание нри экспертизе: вп 1. Патент Англии К 1287212, по кл. С 3 Н

1972 г., (прототип).

2. J. Biiotechnology and Bioengineering 12, 1 970, .р 213.