Способ идентификации моносомных растений

Способ идентификации моносомных растений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С-А.H È Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 520079

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт, свид-ву

/ (22) Заявлено 07.01.75(21) 2094:350/15 (51) М. Кл.г

А01Н 1/04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опублнковано05„07.76.Бюллетень № 25 (4б) Дата опубликования описания С1.09.76

Гасударственный комитет

Соната Министров СССР по делам изооретеннй н открытий (53) УДК 631.523. (088.8) о (72) Авторы изобретения

А. А, Созинов„А, Ф. Стельмах, Ф. А. Попереля и А. И. Рыбалка (71) Заявитель

Всесоюзный ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени селекционно-генетический институт (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ МОНОСОМНЫХ PACTEHHA

Изобретение относится к генетическим исследованиям в селекции растений.

Известны цитологические способы идентификации моносомных растении, например путем подсчета хромосом в соматических клетках корешков, изучения конъюгации хромосом в мейозе и определения микро ядер на стадии тетрад микроспорогенеза.

Недостатками известных способов является их трудоемкость, трудность выявле« ния факта "смены унивалента" и установления принадлежности гибридного материала к данной моносомной линии.

Предлагается способ идентификации моносомных растений, например пшеницы, при котором моносомное состояние отдельных хромосом определяют при сопоставлении электрофоретических спектров спиртовыхх экстрактов белков части эндосперма первых поколений материнских линий моносомных серий, отцовских форм и их гибридов.

Для идентификации моносомных растений по Р< -зернам, полученным от скрешивания цитологически идентифицированного моносомного по хромосоме 1Д или 1В рас тения сорта Чайниз Спринг с сортом Одесская 26 (белки, контролируемые хромосомой 1LI. или 1В у этих сортов, резко отличаются между собой по количеству и характеру распределения электрофоретически различных компонентов в спектре) зерновку гибрида делят на две части, зародышевую часть прорашивают, а спиртовый экст» р ракт белка оставшейся части эндосперма исследуют электрофоретически, По присут ствию в спектре характерных полос-маркеров хромосомы 1LI, или 1В отцовского сорта и отсутствию соответствуюших компо- .

15 нентов материнского сорта определяют, что данное растение моносомное. Электрофоретические спектры с присутствием маркерных белков обеих гомологичных хромосом родителей принадлежат эндоспермам гп с полным набором хромосом, При наличии смены унивалента" по моносомным линиям 1Ll нли 1В спектры моносомика и дисомика Р будут идентичрф ными. Таким образом, тест на моносом520079 лиза сложнее.

Лля Р моносомы iQ х Одесская 26

Для Р моносомы 1В Чайниз Спринг х

Одесская 16

Проанализировано 60 зерен Г с предварительной цитологической иденгификацией.

Из них цитологически и элекгрофорегически найдено 9 из 40 моносомиков соответственно.

Проанализировано 20 зерен F< с предварительной цитологической иденгификацией.

Из них цигологически и электрофореги- чески найдено 5 и 15 моносомиков соответственно.

П р и м е ч а н и е: в среднем процент идентификации моносомиков F цитологическим путем-6-70%, предлагаемым способом-100%.

2. Способ поп. 1, от ли ч аюшийся тем, что сопоставляют электрсьфоретические спектры спиртовых экстрактов белков эндосперма первых поколений гибридов заранее известных линий и исходных материнских линий моносомной серии, например 1l1, 1В, 6А. ное состояние является одновременно и тестом на "смену унивалента .

Для цитологической идентификации мсм: носомных материнских растений используют микроскоп МБИ-6, а для электрофо- 5 реза спиртовых экстрактов белков - крах« мальный гель в алюминийлактатном буфе- о ре. для электрофореза непосредственно брали второй экстракт белка, поскольку первый содержит вещества . липосахаридной. природы, загрязняюшие гель, о

Первую экстоакцию проводят при 1-2 С в холодильнике, чтобы свести потери белка к минимуму и достичь необходимой степени очистки белков от липидов.

Электрофореэ проводят на колонках с

14%-ным крахмальным гелем при ðÍ-3,1 в алюминийлактатном буфере, сила тока на колонку-1,25 ма, продолжительность электрофореза,— 4 час.

Fly фиг. 1 и фиг. 2 приведены электрофореграммы спиртоизвлекаемой фракции бел коь эндосперма сортов Одесская 26 и Одесская-16; моносомных по хромосоме 1L1 и

Формула изобретения

1. Способ идентификации моносомных рас- . тений, например пшеницы, по их спектрам, отличающийся тем, что, с целью ускорения и удешевления процесса и одновременного выявления, факта смены унива.лента", моносомное состояние отделы ых хромосом опгкделяют при сопоставлении электрэфоретических спектров спиртовых экстрактов белков части эндосперма материнских линий

18 линий сорта Чайниз Спринг и их монь.сомных и дисомных гибридов Р

Моносомный гибрид Fi (см. фиг. 1) отличается от дисомного присутствием лкшь верхних четырех полос спектра, характер ных для отцовского сорта Одесская 2с, 1Д хромосома которого находится в F в моносомном состояний, У дисомика присутствуют компоненты обоих родителей, Моносомик P (см. фиг. 2) по 1В хромосоме отличается от дисомика присутствием маркерных полос 8 и 9 1В хромосомы, характерных для сорта Одесская 16, и отсутствием полос 8, 9 и 10 сорта Чайниэ

1 Спринг. йисомик имеет все компоненты ро-. дителей.

Зля идентификации 100 моносомных растений F практически со 100%-иой точностью необходимо 2 дня. Идентификация такого же количества растения цитологическим путем выполняется в течение не менее эа 8-10 дней при значительно меньшей точности и полноте выделения моносомиков, Технически выполнение цитологического анамоносомных серий, отцовских форм и их гибридов.

7520079

1 2 !

5 (2 !

2 2

5 em>>»» и

ФЮЮ хв

5. б»=-: — >

7 2mmmm5 в

72

11 —,э

5 б .

7 с===» б ИИВ

9 =

f0 с= л

7 а- л (ос: . -э

1(=>

f c=

Q czzzz: (г и и ф@щ®

8С .=5

7! с:==:::."»

72 (в®ф®

7!—

fS 4Щ ®

75 -":Э

Is c2mmm>

16 ЕБР

f 7 62ажл2э

1В ИВОВ

\Ж>>7>>ЯВИ>

12 ЙЙЙЙ

Ю 1ИЕЕЗЮ

15 222zz2zuzn

1б (222KB

g Йййй

Q eaammm

74 =>=>

75 В

7б >===:»

v 6H22$

19 аИИВ 19 ЕИВ

25 25eZmmm

77

И ЯБББВ

25»

2! фЯфф г(EHKB

22 ==»

27>

Я сг2: ж

f8 ййй2йй

22 :-> g! II f |бб!!!б!!б!!В

22

ЖЩ 4ЯР ййййй

ЯЯ Щ

2(63КНЕЕ9

22 mmm>m>

25 25

26 С:5

27 С

2! с — — — 25m >

Фиг. 1

Фиг. 2

БНИИПИ Заказ 3702/328

Тираж 72. 3

Подлисное

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Прос.ктная, 4

f. 0весска я 1á, сорт-опьвлитenь.

2. Чайниз (",лринг, моносомная пиния лв хромосоме 1Д, Л. Г„спектр оелкоо зндоспер(1а с полным набором хромосом родителей (Рисомик).

4. ff присутствует только маркеры отцовской (Д хромосомы (первые четыре рракций сверху, моносвмик).

Примечание. Мвнасвмные линии t;Opma между собой по характеру

f. Одесская (б, сорт-опылигпель.

2. чай низ (,принг, мвносомная линия пв хромосоме «1 о, 3. ) f, спектр оелкоо зндвсперма с полным наоврвм, хромосом родителей (ди сомик).

4. Г, присутствуют только маркеры отцИской 1 д хромосомы (7 и В компоненты с5ерху, монвсомик).

Чайкиз спринг om дисвмикоб и спектра глиадино6 не отличаются.