Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата

Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Й АВХОРО(ОМУ 3ВИДПЕЙЬСПУ

{61) Дополнительное к авт. саид-ву (Я2) Заявлено 11.12.72 (Я) 1856458,(18 е присоединением заявки № (23) 3.1риоритет:.— (51) М Кл(Р 3" 12Oа/1О

Мударатаа((3(ь(Й 3(ан((тат

Оавата М(3((ктраа ьььР па даат иаафата((3(а

33 33r3((33(n»33 (43) ОпУбликоваио 25.07.76. Бюллетень №27 (53) УДК 576.15,3(8(3388.8) (45) Дата онубликования описания 23,12.76 ( (72) Автори изобретения

О. П. %1из»(овская, Л. 8. Федо(7ова, A. П. TIIITBpi»на 3(А. Tl, (СО(: (-»3(:. 33 Ботатп3 (есиий иисп(тут им, В. J1 Коь(а1(ова (54) СЙО3:ОБ ИОПУЧЕН13 МО11ОКС33 ВЕРХНВ1Л1((аЕ1 33

ФЕРМЕИТЙОГО HI»jE!1APÀ ÃÀ

Изобретение omocèòcÿ к производству ферментных препаратов.

Известен способ получения молокосвертывающеroQ ферментного препарата путем культивирования его hpOTTyiieHIoB на жидкой питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральнь(е соли с последу1ощим выделением фермента из культу. ральной жидкости.

Предлагаемый способ позволяет получить более активный фермент.

Для этого в качестве продуцента фермента исполь зуют базидиальные грибы вида(г(3(азАа. d ecoto T ass;

Из указа1п(ого вида целесообразно использовать штамм (3 и ь ь v c ot 8 е с а г, О т а т(s R.

В качестве источника углерода целесообразно использовать глюкозу; сахарозу, .мальтозу и целлобиозу.

В качестве источника азота можно использовать пептон, аспараг333(„К И(-(а, < 1 "4,)а (1 Оq мочсвину. В качестве минеральных солей следует использовать КН р0,ljg SO Н О,ЪTSO .7Н О, Ve SQ ° 7Н О,К Н((3, Б качестве стимуляторов роста можно использовать экстракт из солодовых ростков.

Штам(»1 — продуцепт баeil(I(lB!Ih!(OIО 3.p,(6ç Риаз(И(а ((Ясог О(oTI » 2 в(»ще»(сп и H(,-P7 70BÎTO тс»(3 3(!$. l t 3 еь д((СОЬэ(О((а (I (сь(170е XJ<а ccPB(BB;>(3) . 31B TcoE1»TT(P!Tс(1033 синтег(3 (секо(3 среде этот ш гамм образует колонии из белоснежного г л(((c(HiB Тифа(воз(-.у(1(((orO и субстратногО мицелия тОш<ие» r.»7 — 3,(3 г((см в диаметре, изогнутые, с 17ед(с(3.;1((перегородка»ии; сред ": 3 иф суостратногс мицслия встречаются (с(э"(И((в(с шаро 7 винные клетки Во 10 — 17 I»IT (в д((ам-:-.i pc-31 тече(13(с

1О всег0 (7азв((Т3(я г17(36 OCTBBic:T t!B BCKCTQII((»I(0!1 CIBIT»133 и не Образ1»ет ((и(сак11х oprBBO(1 ci(oj70ï0 Hc((313(.

MBTCCT(i i3JIT»(1e»I ОКТ((В((007 (. (..". ЛOi ОС. ;Е»»Т((наЮI(Ю" ( г - » - (а

IT о ферменте. 176размг»(ог О 1 —,:-. (.,1г»-1- и Оол»» (-;том

1б (73(сааий..(еао ог(1(тз, наст -и(ет и:и ловсрхиосETTo(, BT-ITTBITTT!BBTT(ITI ча 2(7 — » "» IP!it» роста TIHH г((vG(?I

1, лом — па 8 — 9 дспь роста при (7И среды в т(ределах

3,5-4,5.

Иа(160ль(па»ч акi HBHoсть фа(7 Tie((I t ПО,,- 3аетсл ла

»23jt .среде с гтальтозой и Г(пскозОЛ, В(7с(и((cTBopaBO(17:33(tie молока на этих средах cOOIBвBллст соответствси:.о, 25 и 30 сек, лри это-:.1 в качсстB»c HcIo ((ITETTB азота исОльзован пел(оп и аслараг((((.

П p H м е р. 1T1IQ(»i(— ироду((сит в(лращива(от ЛО Вер>aIocI33BIv сйособом в колбах Эр»ле((мс((ера и в

522230

Составитель В. Осипов

Техред Н. Андрейчук . Корректор Д. Мельниченко

Тираж 575 Подписное

Редактор А. Ьер

Заказ 4559/314

ЦНИИПИ Государсгвенного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушсквя наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 биологических матрасах. содержащих соответственно 100, 200 и 150 мл питательной среды состава,r/ë:

Глюкоза 10

Пелтон 3 кк рО 0,б

К,11Р ; 0,4

/ 1 504 Н,О 005

Х тт 5 0@. 7 и х@ 0,001 О4 наО, 0,0005

Среду готовят на водопроводной воде.

Исходный рН до стерилизации t среды 5,6. Стерили; зацию проводят при давлейии" 1,2 атм в течение 45 мин, Посевной мицелий выращивают на сусле — arape.

7ейнератур инкубации поддерживают в нределах

25 — 26 С.

По,достижении максимальной активности культуральную жидкость отделяют от мицелия, фильтрат охлаждают до 4оС, осаждение белков проводят охлажде>пым до — 15оС 96%-ным зтиловым спиртом в соотношении 1: 3.

Смесь выдевживают в течение суток при — 15оС, после чего декантируют недостаточную жидкость, Осадок от оставшейся:, жидкости отделяют центрифугированием нри 4500 — 5000 об/мин цри 0 С в течение 5 — 8 ьпщ. Для удаления остаточной влап и cnupIà стаканы с осадком помещают в морозильную камеру при — 5оС на 24-48 час, после чего. осадок зкстрагируют бидиетиллированной водой цри ОоС на центрифуге.

Водный экстракт высуимвают лиофильно, а нерастворимый осадок откидьнзают, После лиофильной сушки препарат имеет вид порошка кремового цвета,,хорошо растворимого в воде.

Активность препарата в среднем составляет

500000 ед.

Определяют ее по следующей методике. йЗ HN3 мй молока вносят 1 мл 15% — ного раствора (.сь Cg <, берут 10 мл в пробирку, нагревают до 35оС и вносят 1 мл напгвной культуральной жидкости. 8 момент внесения куяьтуральной жидкости включают секундомер и активность фермента определяется по времени образования плотного сгустка„

Таким же способом определяют активность препарата, при зтом к 10 мл молока добавляют 1 мл 0,1%— ного водного раствора препарата, Пересчет активности молокосвертывающего фермента в условные единицы проводят по методике

Д. Я. Типографа и Т. A. Петиной И .

За одну условную единицу активности принимают

10 количество фермента, необходимое для свертывания

100 мл молока 1 мл культуральной жидкости или 1 мл

0,1% — ного водного раствора препарата при 35оС и рй 6,0 за 40 мин.

Препарат сохраняет активность s замороженном

15 состоянии около года> при 4оС вЂ” более четырех месяцев, При нагревании до 50оС активность падает в 10 раз, 11редлагаемый штамм базнднального гриба Визвиссь асс(огпгть 2 может быть использован для получения молокосвертывающего препарата "Руссулин", который может заменить ферментный препарат аналогичного действия "Репнин" животного происхождения, Формула изобретения

1, Способ получения молокосвертывающего ферментного препарата путем культивирования его продуцентов на жидкт>й питательной среде, содержащей

"О источ1мки утлерода, азота и минеральные соли, с последующим вьщеленнем фермента из куЛьтуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью получении более активного фермента из продуцентов используют базидкальные грибы вида Я тз ь ь о и а

86 .cl Q c o с 0 Р а т1 ь .

2. Способ по и. 1, о т л и ч s ю шийся тем, что из вида RU%5UCQ с1всо о1 св н Б "Иснользуют штамм 2.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе.

1. Прикладная биохимия и микробиология, 1966, т.2 К04 с.417,