Микроколоночный радиохроматограф

Микроколоночный радиохроматограф

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскин

Социалистических

Республик (11) 525881 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.05.75 (21) 2142940/25 с присоединением заявки М (51) М. Кл.

° G01 И Э1/08

; & 01 Т 1/166 !

Государственный номнтет

Совета Миннотров СССР оо делам ивооретеннй и открытий (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.08.76иБюллетень М 31 (53) УДМ, 543. 5 44.08 ! (088.8) (45) Дата опубликования описания!22.11.76

P. Г.Виноградова, А. N. Воронцов, С. А.,Цзачев, E. Q. Карабаш, Ф, И. Романов, О. A. Рысьев и В. Г. Сясин . (72) Авторы изобретения

Изобретение касается исследований с использованием меченых атомов, B частности !

1особой области биохимического ультрамикро-йанализа", устройств для измерения актив-! ности в, элкате,микроколоночных хроматогра- 5 фов с преформированным градиентом, а именно измерений активности соединений, !, мече тых 3Н и 14о, наиболее часто применяемьй в биологии при условии, что измеряемый элюяг не перемешивается и фракции можно использовать для дальнейших исследований.

Известен микроколоночный хроматограф, содержащий микронаносы, градиентное устройство объемом до 1500 мкл, микроко- l5 лонку объемом,30-100 мкл, фотометричес. кий детектор-.и" микроколлектор фракций объе-! мом 2 — 6 мкп. В случае анализа радиоак,тизных соединений фракции элюата перевод т

;:,"в кюветы большого объема, содержащие сцин-20

1, иллчтор и измеряют активность в стати, . ческих условиях.

Известен также хроматограф с раздели,!тельной системой и проточным сцинтилля-! (ционным детектором, представляющим собой 25 о прозрачную трубку, заполненную гранулами,: оииитиллитора, и фотоумиоиитали .

Однако для него характерны низкая чув-i ствительность и плохое разрешение, особен но при работе с малым количеством вещества.

Известен и хроматограф, предназндченньй щи работы с радиоактивными веществами,; ! содержащий градиентное устройство, разделительную колонку, наполненную сорбентом, и детекторы, одним! из которых является

) радиометрический. бн представляет со-I ! ! бой блок сцинтиллнруюйей пластмассы с

f проточкой для протекания элюата. Проточ-! ка имеет спиральную форму для увеличения поверхности взаимодей".твия жидкости со ! сцинтиллятором.

Однако при помощи такого хроматогра-! фа невозможно измерять радиоактивность злюата в случае применения хроматогра!ри- ческих микроколонок, поскольку пропорцио т нальное уменьшение объема, проточного де тектора приводит к тому, что в его объеме, который для устранения размытия пика дол жен быть доведен до 1 мкл, в единицу вре 25881 мени находится количество радиоактивного

}всшеств 1 недостаточное для набора статистически достоверного числа распадов, особенно в случае измерения нйзких удель ных активностей.

Регистрация активности в отобранных фракциях путем смешивания вручную фракп.ий элюата с жидким сцннтиллятором приводит к потере разделенных веществ и чевозможности их дальнейшего использования }0 (проба 2 — 6 мкл растворяется в 10 мм жидкого сцинтиллятора), кроме того происходят необратимые реакпии.

Целью изобретения является обсспечение 5 возможности статистически достоверного измерения активности элюата и сохранение аьализируемого ве1цества для дальнейшей работы.

Это достигается тем, что объем спираль ® ного канала детектора равен объему градиентного устройства, причем этот спиральный канал имеет сечение не превышающее сечения микроколонки. Хроматограф снабжен управляющим вычислительным устройством.

На фиг. 1 показана схема предложенного хроматографа.

Предметное устройство представляет собой капилляр 1, заполненный раствором с

ЗО преформированным градиентом концентрации элюата, и капилляр 2, заполненный промывочным раствором. Капилляры соединены с микронасосом 3 и колонкой 4. На выходе микроколопки в хроматографс установлены !

Зб

}спектрофотометричсский детектор 5, 33роточпый спиральный капал 6 из с!3и»тилл33}3у3ощего материала, цсликом находящийся В»о ле зре»ия двух фотоумножителей 7, вкл3оче1шых в схему сов»адений 8, которая под40 ключена к управляющему устройству 9, соединенному со схемой со13паде»ий 8, регист}Затором 10, коллектором фракций 11 и мик}юнасосом 3.

Злюат из капилляра 1 микронасосом 3 45 подают нл микроколонку 4. Злюат, выходя1ций из колонки, подают на проточный спектрофотомстрический детектор 5, а затем в спираль»ый канал из сциптиллируюшего мате- риала 6, сечение которого рав11о сечению 50 капилляра 1. H 3};з3ста1»!е активности в процсссс пако»лсния элюата в капиллярной кювете измеряют с помо1цью двух фотоэлск- г}3оп33ых умножителей 7, включенных в схему ссвпядепий 8, результаты изл1ерений Я

«!.13лбпть113вют H;:311»oJ»iяют с помощью вычислитслы!ого уп} д}3ляю1цсго устройства 9 и фиксируют с помо1»ью регистратора 10.

} lc окоп» 1»ии процесс» хроматог}3аф31р3313ания, когд(3 в(13» эдк3лт 3 пбрап 13 с!»3})д п»!о|и капа Я) ле измерительной сцинтилляционной K) и ill к колонке 4 подключают капилляр 2> в канал которого помещены»ромываюшие растворы для очистки колонки и кюветы. Работу насоса 3 регулируют в процессе хроматографирова»ия с помощью вычислительного управляющего устройства 9 с целью получения более достоверных данных об уровне

1 активности в каждом пике. Принцип регулирования работы насоса в процессе хроматографирования показан на фиг. 2, где по оси абсцисс отложена скорость счета, а по оси ординат — время.

После того как интегратор зафиксирует изменение знака кривой, подается сигнал для прекращения работы насоса на определенный заранее заданный отрезок времени

}М для того, чтобы произвести надежное измере»ие у}ювня активности в каждом отдельном пике.

Данные, полученные в процессе хроматографировапия в период»ако»ления элюата в измерительной кювете, записанные на ленте самописца и отложенные в память вычислителя-интегратора„используют и дальнейшем для разлива элюата в коллектор фракций таким образом, чтобы в одной кювете оказался весь раствор, содержащий определенное радиоакти13»ое вещество (соответствующее отдельному нику на записи). Точки переги-! ба па записи (чсрный кружок на фиг. 2) находят с»омошью интегратора-вычислитеЭ ля путем осрсдпеппя цепных в окрестности точки. В момснт прохождения точки переги ба на записи уровня скорости счета подают сигнал на коллектор фракций, от которого производят смену сосудов. В итоге получают простое чередование активных и неактивных кювет, -.å. в одном сосуде содержитсВ раствор, вмещающий всю радиоактивную зону, а в следующем содержится пустой элюат, соответствующий промежутку между

HHKQMH, Выдавливание элюата из спирального

} канала 6 в коллектор фракций 11 произво3дят промывным раствором из капилляра 2.

Процесс дозирования элюата в коллектор также контролируют с помощью радиометрического счетчика, т.е. производят запись уровня скорости счета. В итоге получают картину обратную той, что была получена в процессе хроматографарования. Отличием . является только отсутствие временных задержек для набора статистики. Контрольная

1 апись необходима для установления факта отсутствия сорбции на стенках капилляров.

Формула изобретения

1. Микроколоночный рааиохроматограф, г, 525НВА

» ..и > пп.»>яй м»к>» >н ос>ь>, градиентн>>е уст1 <>й> тв», .>,øêðîê>»:îíê, ппполненпук> сорбен, 1(>м> сиектрофотометрический детекторр рА" диометрический детектор в-виде проточн<>го спирального канала, выполненного из с цинтилляционного материала и фотоэлектронных умножителей, включенных в схему . совпадений и коллектор фракций, регистратор, о т л и ч а ю ш и и с я тем, что, с

>целью обеспечения возможности статистичес- р ки достоверного измерения активности мяюата и сохранения анализи1>у< > кл о м>ии>гтпл для дальнейшей работы, объем спира>п п1 г о кана-< ла детектора равен объему градиентного уст

r ройства, причем еть спиральный канал имеет сечение, не провышакииее сечения микр4, колонки

2. Радиохроматограф ло и. 1, о тt

:л и ч а ю ш и и с я тем, что выход де ! тектора через вычислительное упра вляюшее

f устройство подключен к микрс насосам ->и коллектору фракций.

525881.!

Составитель Л. Жаркова !

Редактор Е. Кравцова Телред И. Ковач Корректор fg. Золотовская

C. 1

Заказ 5150/492 .- Тираж 1029 Подписное

UHHHHN Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий . 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д 4/5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4