Способ определения лизина в растительных образцах

Способ определения лизина в растительных образцах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

on искнме

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социал истимеских

Республик,Х (») 5294 16

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 25.03.75 (21) 2117415/15 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 25.09.76. Бюллетень № 35 (45) Дата опубликования описания 11.02.77 (51) М. Кл.

G 01 N 33/00

Гасударственный комитет

Соввтв Министров СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 633.131(088.8) (72) Авторы изобретения

В. П. Тучков и Г. 3. Файбушевич (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИЗИНА В РАСТИТЕЛЬНЫХ

ОБРАЗЦАХ

Изобретение относится к способам определения содержания аминокислот в растительном материале в области селекции растений и может быть использовано в сельском хозяйстве.

Известен способ определения содержания лизина в белках из семян растений, основанный на реакции выделенной эпсилонаминогруппы лизина белков с нингидриновым реактивом.

Однак о такой способ сложен в технологии выполнения (содержит свыше 10 операций), и требует расхода большого набора реактивов (8 различных реактивов). Кроме того, для его осуществления необходим целый комплекс оборудования (пробирки, мешалки, водяные бани, центрифуга, фотоколориметр) . .Целью изобретения является уменьшение стоимости анализа за счет упрощения технологии и сокращения затрат материалов.

Это достигается тем что содержание лизина

1 определяют на основе реакции эпсилон — аминогруппы лизина с азотистой кислотой. В результате этой реакции за определенное время выделяется газообразный азот в количестве, пропорциональном содержанию лизина. По объему этого азота вычисляют количество лизина.

Способ осуществляют следующим образом.

Навеску размолотого растительного образца обрабатывают 20% — ным раствором уксусной кислоты в этаноле и 30%- -ным раствором азотистокислого натрия в воде в весовом соотношении 1 — 2.

Суспензию продолжают перемешивать, а выделяющийся газ собирают и промывают насыщенным водным раствором двухромовокислого калия в объемном соотношении газа к раствору 1:10 для очистки молекулярного азота от примеси окиси азота. Измеряют объем очищенного азота, выделившегося за период 30 — 90 мин с момента введения раствора азотистокислого натрия и, умножив на коэффициент пропорциональности /6,6/, получают содер15 жанне лизина в образце.

Пример. 0,25 г размолотого зерна пшеницы смешивают с 3,0 мл 20%-ного раствора уксусной кислоты в этаноле, и в полученную суспензию вводят 1 мл 30% — ного раствора азотистокислого натрия в воде. Суспензию продолжают перемешивать в течение 90 мин, а выделяющийся при этом газ собирают и промывают насьпценным водным раствором двухромовокислого калия в соотношении не менее 10 мл раствора на 1 мл газа. Измеряют объем чистого азота, выделившегося соответствен529416 но за 30 и 90 мин с момента введения раствора азотистокислого натрия. Содержание лизина в образце рассчитывают по формуле: Х=6,6 (А,-А,) мг, где 6,6 - коэффициент пропорциональности в мг/мл;

А и А — объемы азота (в мл), полученные соответственно за 30 и 90 мин анализа.

Коэффициент пропорциональности получен экспериментально на основании анализа зерна

Пшеница

3,96

0,60

6,6

Пшеница

4,62

0,70

6,6

Пшеница

3,50

0,52

6,7

Люцерна (сено) 10,30

1,58

6,5

Полученный эмпирический коэффициент пропорциональности хорошо согласуется с расчетным (6,52) на основании уравнения реакции:

R — КН + HNOq R-ÎÍ+Í О+И )

Одна грамм-молекула лизина образует за счет эпсилон — аминогруппы при реакции с азотистой кислотой одну грамм — молекулу азота, т.е. каждые

146 г лизина образуют 22,4 л азота,. или на 1 мл выделенного азота приходится 6,52 мг лизина.

Составитель H. Муромцев

Те х р е д M. Левицкая рре ор C. Болдиж,р

Редактор Д. Пинчук

Ти Раж 1029 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д.4/5

Заказ 5346/112

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 (эпсилон — аминбгруппа лизина) . пшеницы и сена люцерны с различным содержанием лизина.

3а истинное содержание лизина в них принято

Ь количество, определенное на автоматическом аминокислотном анализаторе.

Результаты опыта приведены в таблице .

Формула изобретения

Способ определения лизина в растительных образцах, включающий обработку размолотого образца растворами реактивов, о тли ч а ю щ ий с я тем, что, с целью упрощения технологии и снижения стоимости анализа, образец обрабатывают

20% — ным раствором уксусной кислоты в этаноле и

30% ным водным раствором азотистокислого натрия в весовом соотношении 1:2, а выделяющийся газ промывают насьпценным 10% — ным водным раствором двухромовокислого калия в объемном соотношении 1:10, измеряют объем газообразного азота, выделившегося за период 30 — 90 мин с момента введения раствора азотистокислого натрия и проводят подсчеты по известным формулам,