Патент 538025

Способ идентификации возбудителя листериоза

 

Союз Советских

Социалистических

Реслублик (11) 538025 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено15.06.72 (21) 1936768/15 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 05.1 2.76.Бюллетень №45 (51) М. Кл."

С 12 К .1/04

А 61 В l0/00

Государстаенный иомитет

Совета Министров СССР по депоч изобретений и открытий (53) УДК 5! 6.8.078.

:578.851. 1 36 (088.8) (45) Дата опубликования сп.1са;.:пя 28.02.77 1 (72) Авторы изобретения

И.А. Бакулов и Н.A. Капырш;а

71) Заявитель

Всесоюзный научно — исследовательск1..й институт ветеринарной вирусологии и микробиолог; и (54) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЛИСТЕРИОЗА

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в лабораторной практике для идентификации возбудителя листериоза.

Известен способ идентифик ации воз бу дителя листериоза по комплексу бактериологических исследований (1). В качестве диаг— ностикума при идентификации 4.moeacvkogeaes в настоящее время используют агглютинирую- ig щие сыворотки, которые нередко дают перекрестные реакции с гетерологичными бактериями (стафилококками, энтерококками и некоторыми другими микроорганизмами), Кроме того, идентификацию проводят на основа- 15 нии культур аль но- морфологич еских биохимических тестов, постановкой биологической пробы на лабораторных животных и с помощью люминесцентно-серологических исследований. 20

Однако некоторые из приемов бактериологического комплекса громоздки, занимают много времени, не всегда достаточно специфичны, что затрудняет правильность постановки диагноза на листериоз. 25

Известен также слос-:á диагностики лис— терпоза с помощью бактериофагов по питической реакции в месте нанесения их на га.::он цепы. у емой ку.. ь:уры (Д 1.

Однако с помощью известного способа удается идентифицировать лишь 4-5% взятых для исследовачия щтаммов листерий.

С целью повышения эффективности иссле— дования и сокращения сроков проведения идентификации листерий, используют монофаги

1„2А, 1 3А и L 4А, которые поочередно наносят на газон испытуемой культуры.

Предлагаемый способ осу-ществляют следующим образом.

Набор листериозных бактериофагов включает три монофага 1 2А, 1 ЗА и 1 4А, которые получены из лизогенных культур

L.тпот осу1оо.епео после облучения их ультрафиолетовыми лучами, Бактериофаги имеют вид прозрачной желтой жидкости, представляющей собой взвесь фаговых частиц в бульоне Мартена. Число инфекционных фаговых частиц,то есть титр бактериофагов составляет 5 10 — 1 10 в, 9

5380

Индикаторной культурой для фагов 4 2А и Ь 3А является штамм 9 — 127, а для фага L 4А — штамм 9 — 72, Каждый из бактериофагов обладает свойственным лишь для него спектром литической активности. При исследовании культур бактериофаги используют в неразведенном виде.

Идентификации подвергают культуру,находящутося в экспоненциальной фазе роста (4-чаl9 совая бульонная культура), засеянную на поверхность 1,5% агара Мартена в бактериологических чашках. При этом на газон испытуемого штамма наносят по капле каждого из трех монофагов. Засеянные чашки по- б мешают в термостат (22-28оС). Учет реакции проводят через 16-18 час. При положительном результате в месте нанесения капли фага образуется прозрачная зона лизиса на фоне выраженного роста культуры > на остальной поверхности агара.

Зля подтверждения возможности использования набора бактериофагов для идентификации возбудителя листериоза исследовано

184 штамма гомологичных культур„Литическая реакция отмечена у 158 штаммов, что составляет 85,9%. Проведено также исследование диагностического набора бактериофагов на специфичность. Испытано 152 штамма гетерологичных культур, включающих стафилококки, рожистые палочки, дифтероиды, сальмонеллы, пастереллы и кишечные палочки. Ни в одном случае не наблюдалось литической реакции со штаммами указанных возбудителей, что свидетельствует о высокой

„М

4 специфичности набора бактериофагов для идентификации возбудителя листериоза, На проведение исследований по идентификации культур с помощью данного набора бактерисфагов, включая подготовительные работы (получение 16-1 8-часовой культуры, разчивка питательных сред), требуется не более 48 час.

Предлагаемый способ характеризуется простотой выполнения, сокращает сроки и материальные затраты, связанные с исследованиями по иден-;ификации возбудителя лис .. ориоза, Формула изобретения

Способ идентификации возбудителя листериоза с помощью бактерио",.агов по литичессой реакции в месте нанесения их на газон испытуемой культуры, о т и г ч а ю щ и йс я тем, что, с цэлью повыш чия эффективности и сокращения сроков ис..л.дования, используют монофаги 4 2A. . 3Л и L 4А, которые поочередно i:» осят на гзон испытуемой культуры.

Источники информации, прин.чтые во внимание при экспертизе:

1. "Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней", под ред.К.И. Матвеева, Медицина, 1Ь73 с,533536.

2. Статья Щегловой М,К. в кн. "Труды

Зооветинститута" г. Саратов, 196 -.., т,16, стр. 1 33-1 37.

Составитель Л. Мурая

Редактор Н. Скворцова Техред О. Луговая Корректорд Зорина — ю-нов

Тираж 555 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент". г. Ужгород, ул. Проектная, 4