Способ получения -аспарагиназы-2

Способ получения -аспарагиназы-2

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О Il И С А Н И Е и>-53907!

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскитс

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 27.11.74 (21) 2100531/13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 15.12.76, Бюллетень ¹ 46

Дата опубликования описания 28.12.76 (51) М, Кл."- С 12D 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений н открытий (53) УДК 57?.15.08 (088.8) (72) Авторы изобретения

С. С. Рылкин, T. Б. T Березов, Б. Д. Виноградов, В. С. Орлова и А. Г. Чигалейчик

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АСПАРАГИНАЗЪ1-2

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам получения фермента

1 -аспарагиназы-2, применяемого в медицине.

Известен способ получения 1 -аспарагиназы-2 путем культивирования ее продуцента на синтетической питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли н микроэлементы (1).

Этот способ является наиболее близким к описываемому по технической сущности и достигаемому результату. Однако при культивировании максимальная активность, проявляемая самым активным из испытанных штаммов

E. со!1 в начале стационарной фазы роста, составляет 0,95 мЕ/мг сухого веса.

Кроме того, периодические условия культивирования не позволяют регулировать процесс и поддерживать культуру длительное время в определенном физиологическом состоянии с высокой ферментатнвной активностью, что снижает интенсивность процесса.

Цель изобретения — интенсификация процесса н повышение активности фермента. Это достигается тем, что 1-аспарагиназу-2 получают путем культивирования ее продуцента на синтетической питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и микроэлемнты, прн этом культивирование продуцента, начиная с поздней экспоненциальной стадии роста, осуществляют при непрерывном протоке питательной среды со скоростью 0,2 — 0,25 час н конечной концентрации азота в питательной среде 0,006 — 0,025 г/л.

Прн этом в качестве продуцента 1 -аспарагпназы-2 используют штамм Pseudomonas Ьогеоpolis 526.

Способ осуществляют следующим образом.

Продуцент L-аспарагиназы-2, в качестве ко10 торого используют штамм Pseudomonas Ьогеоpolis 526, культивируют на синтетической питательной среде, содержащей источники углерода, азота, минеральные соли и микроэлементы.

15 Культивирование продуцента фермента прогодят в ферментерах 4, начиная с поздней экспоненц иальной сгадии роста, осуществляют при непрерывном протоке питательной среды со скоростью 0,20 — 0,25 час при 28 С, 20 конечной конценцрации азота в питательной среде 0,006 — 0,025 г/л, насыщении среды кислородом 60% и рН 6,5.

Пример. Штамм Pseudomonas Ьогepolis

526 выращивают на синтетической пита гель25 ной среде состава, г/л:

МaSO4 1

Ха НРО4 1,4

КН,РО, 0,6

MgSO ?Н20 0,7

30 Глицерин, мл 12 с!) ор «yла изобретения

Составители T. Серебренникова

Г едактор Г. Мозже (кона Техред M. Сеченов

1(оррек "ор И. Поздн(>ковскав

3-! .аз 2771/9 Изд. ¹ !854 Тираж 575 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобре>ен"ll! и открытиш

113035, Москва, )1(-35, Раушская наб., д. 4/5

Тиногра(1>ии, нр. Сануно(я, ?

Посевной материал вырашивают в кол оах емкостью 750 мл, содержа)цих 100 мл м!co1(ептонного бульона (МПБ), иа качалке в тсчеиие 24 ч. 11олучсииой биомассой засевают ферментер и культивируют н !1ерио,7и. с> !х условиях при 28"С и насыгцеипи кислородом

60о/о, рН среды 6,5. 11епрерывиос культl! H!Ii)0ванне иачипа)от ир!l достижении ))кого!:си.1!альной фазы роста, т. с, нримсрио )!срез 21 ч выра)цивания. Скорость iipOIO!la постепенно увеличивают, доводя ес в течение 36 и Ог

0,05 час — до 0)25 час — . При этом устаиавл.l вается конечная концентрация азота в среде

0,025 г/л.

Активность фермента определяют iiie i одом несслсрпзации.

Активность 1 -асиарагииазы-2 культуры

Pseudornonas ho! eopolis 526, иолу !ениой oniiC<7nlihiivi ????????????????, ??????????1375iet 8,25 )1??>

1. Способ нолучения 1 -аспарагиназы-2 путе.а .,,льт>ьви»ов ill!! I ее прод ценTB иа сиитети ic5 C:-;(>. i кит«тельiioi среде, содер)к«Шеи источш(ки у"лсрод"., азот«, innel)«ill Iiiie co.II! II микроэлс»eII I 1)1, о.т л и ч и ю шийся тем, что, с цс. !ь10 иlггеиси(1)икации процесса 11 иовышеиия активности фермента, культивирование ироду13: С1г! «, и«ч; и«я с ио:д>:ей экспоиенциальной

07 «д,:! рос «) ;>су!цссз ил яют при испрерь(в!!Ом протоке i!i татсльиой среды со скоростью 0,2—

0,25 1«с- конечной ко!ш итра,liii азота в (:итательпой среде 0,006 — 0,025 г/л.

15 2. С!!ОсOCl no n. 1, 0 T;I ll I « Io III и и (;) ка Iec l 1>с !!род), цсита 1 -«свар«1:и!а.:hi-2 !!Сноси)зуют и;тамм Рве!!Й>шо!1!1: 1)0! сор >) ls 526.

ЕиЕСтоЧНИ<К ИифОрМацИИ, !рниятЫй ВО Dl! I!:,. .:.nil(при экспертизе:

20 1. С. 11. 1а1!ковск1!Я 11 Ц). < Ill:!! (;e ус,l!;вий куль(и!3иро!3ания иа биосинтез L-«cïÿðà-!

7!и«311 1гll., и;:.ми Е.зс11сг ll:а coli:кур:.ал

«Прикладная оиохим ия и микробиология», 19/-i, 10:«Х) выа > Ск 3, Tl). 369.