Штамм метилотрофных бактерий -продуцент формиатдегидрогеназы

Штамм метилотрофных бактерий -продуцент формиатдегидрогеназы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И-Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (>1) 543672 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 16.02.76 (21) 2325857/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.01 77. Бюллетень № 3 (45) Дата опубликования описания18.05.77 (51) М. Кл.еС12К 1/00

Гасударственный камитет

Сааета Министрае СССР па делам изааретений и открытий (53) УДК 577 15 663 1 (088.8) Н. С. Егоров, Е, Н. Кондратьева, И. В. Березин, О. С. Троян, Л. С. Платоненкова, Е. В. Захарова, А. И. Нетрусов, А. М. Егоров, Ю. В. Родионов и В. В. Карзанов (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им, М. В. Ломоносова (54) ШТАММ МЕТИЛОТРОФНЫХ БАКТЕРИЙ Bacterium species N 101—

ПРОДУЦЕНТ ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ

Изобретение относится к микробиологическому производству ферментных препаратов с использованием в качестве сырья метилового спирта и может быть применено в медицинской, микробиологической и пищевой промышленности. б

Известны штаммы Pseudomones rrethylotropha

u mycrocycIus poIumorphum-процуценты кор мового белка, растущие на минеральной среде с метанолом (11, Недостатком этих штаммов является низкий 10 уровень синтеза ферментов, не позволяющий использовать их как высокоэффективные продуценты этих биологически активных веществ, Также известен штамм Pseudomonas oxalaticus, который растет на среде с формиатом и продуцирует формиатдегидрогеназу (2 ) .

Недостатком штамма является необходимость выращивания его на сравнительно дорогом субстрате — формиате натрия, незначительное накопление био- рО массы и сравнительно низкая активность фермента.

Целью изобретения является штамм бактерий, растущий на питательной среде с метанолом и обладающий высокой удельной активностью и выходом формиатдегидрогеназы. 26

Предложенный штамм хранится в коллекции метилотрофов кафедры м;икробиологии Биологи. ческого факультета МГУ под номером 101. Штамм выделен из сточных вод, содержащих метанол.

Штамм бактерий Bacterium species N4 101 имеет следующие морфологическую и физиолргическую характеристики.

Колонии мелкие, белые, блестящие, гладкие, Средняя величина клеток двухсуточной культуры на среде с метанолом 1,0-1,5х0,5-0,7 мкм. Корот кие неподвижные палочки, спор нв имеют, пиг менты не образуют, строгие аэробы. Грамотрица. тельные, содержание ГЦ в ДНК 69,4 моль %. На картофеле и на сусло-агаре блестящий белый налет.

Желатину не разжижают. молоко нв пвптонизируют, нитраты не восстанавливают, глюкозу нв сбражив ают. Неки ело тоустойчив ы. Метиламины не усваивают.

Отношение к углеводам. Усваивает глюкозу, фруктозу, сахарозу, ксилозу, рибоэу, Не усваивает галактозу, рафиноэу, рамнозу, арабиноэу, Отношение к спиртам. Усваивает метиловый, этиловый, пропиловый, иэобутиловый спирты, гли.543672

Тираж 7

ЦНИИПИ Заказ 6125/S3

Подписное

Фн нан ППП " Патент ", г, Ужгород, ул, Проектная, 4 церин, маннит, сорбит. Не усваивает изопропиловый, бутиловый спирты, дульцит, инозит.

Отношение к органическим кислотам. Усваивает ацетат, бутират, пируват, лактат, аксалоацетат, Пример. Культуру метилотрофных бактерий

Bacterium species У 101 выращивают в полупроизводственных условиях в 100 л ферментерах на минеральной среде следующего состава (в г/л): КН2 Р042,0; (NH4) > SO4 — 2,0; NaCI — 0,5; MgSO< 7H> О0,025; Fe SO 0,01, вода дистиллированная. рН среды после стерилизации 7,2. Во время посева вносят 1 % метанола и 0,2мл 10%-ного раствора дрожжевого автолизата на 1 л среды. Посевной материал вносят в количестве 2-3%. Режим ферментации: температура

28 С, расход воздуха 1:1, избыточное давление 0,5 атм а стерилизация 120 С в течение 2час паракультуру выращивают 45-52 час, Выход биомассы 250-300 r сырых клеток с ферментера, т.е. 500-700мг сухих клеток на 1 л среды.

Очищенный на 95% препарат формиатдегидрогеназы из клеток штамма Bacterium species Р 101 выделяют следующим образом, Клетки собирают центрифутированием при

6000 об/мин в течение 30 мин, суспендируют в 0,1М фосфатном буфере при рН7,5; разрушают при 22 кГц в течение 15 мин и вновь центрифугируют при 200006 в течение 30 мин. Супернатант обрабатывают сульфатом аммония (40% QT насыщения). Осадок отбрасывают, а супернатант вновь обрабатывают сульфатом аммония (60% от насыщения). Через 36 час центрифугируют, осадок растворяют в 0,03М фосфатном буфере с рН 7,8 и диализуют против того же буфера. Полученный препарат наносят на колонку с

ДЭАЭ вЂ” целлюлозой, Колонку промывают 0,03М фосфатным буфером, рН 7,8 фермент злюируют

0,1М раствором NaCI, Получают препарат, который на 95% состоит из формиатдегидрогеназы. Выход фермента по активности составляет 30% при 20-кратной очистке. гликолат. Не усваивает пропионат, кетоглутарат, сукцинат, фумарат, малат, цитрат, тартат, бензонат.

В таблице приведены значения активности формиатдегидрогеназы у различных шгаммов.

Формула изобретения

Штамм метилотрофных бактерий Bacterium

species У 101 — продуцент формиатдегидрогеназы.

Хранится в коллекции кафедры микробиологии

МГУ.

25 Морфологические признаки. Колонии мелкие, белые, блестящие, гладкие. Величина клеток двухсуточной культуры на синтетической среде с метанолом 1,0-1,5х0,5-0,7 мкм. Неподвижные палочки, грамотрицательные, спор не образуют. зо Физиологические признаки, Строгий йэроб. Пигмент не образует, Желатину не разжижает, молоко не пептонизирует. Нитраты не восстанавливает, глюкозу не сбраживает. Растет на сусло-агаре. Не растет на бульоне и на мясо-пептонном агаре. Некислотоустойчив. Не использует метиламины.

Отношение к углеводам. Усваивает глюкозу, фруктозу, сахарозу, ксилозу, рибозу.

Отношение к спиртам. Усваивает метиловый, 4О этиловьй, пропиловый, изобутиловый спирты, глицерин, маннит, сорбит.

Отношение к органическим кислотам. Усваивает ацетат, бутират, пируват, лактат, акселоацетат, гликолат.

45 Источники информацин, принятые во внимание при экспертизе:

1. Патент Великобритании У 1370892, кл, С 6 F, от 16,10.1974, 2. 7оИпьои, JoneS- МогМпмг a Qu,ayte, (964, Use pur4f Меам ЬасСег саР Уorrnate

dehvdrogenoIse ггог Ьйе rn crocstirnort on

of Уогл йИ, В осИ)п et В орйце, Actor.

М Bg,peg > y5 (прототип),