Способ получения -1,6-глюкозидазы

Способ получения -1,6-глюкозидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСА НИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (>t) 545267

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 19.10.72 (21) 1319130/1838523/13 (23) Приоритет 01.04.69 (32) 01.04.68 (51) М. Кл. С 12Р 13/10

ГосУдаРственный комитет (31) 21364/68 (33) Япония

Совета Министров СССР чо делам изобретени Опубликовано 30.01.77. Бюллетень М 4 (53) УДК 577.15.07 (088.8) и открытий

Дата опубликования описания 09.03.77 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Канаме Сугимото, Мамору Хирао, Кацуо Масуда и Сузо Сакаи (Япония) (71) Заявитель

Иностранная фирма

«Хаясибара Компани» (Япония) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ а-1,6-ГЛЮКОЗИДАЗЫ

Изобретение относится к области ферментативного гидролиза крахмала, гликогена, декстрана и подобных веществ, а именно к способам получения а-1,6-глюкозидазы, характеризующейся относительно высокой активностью, проявляющейся при температуре незначительно превышающей 45 С.

Известен способ получения и-l,б-глюкозидазы путем культивирования ее продуцентов, а именно Pseudomonas amyloderamosa SB-15 иа питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные сол (1).

С целью расширения ассортимента продуцентов а-l,б-глюкозпдазы сог:Iacno предлагаемому способу в качестве последних используют штамм Nocardia corallina IFO3338.

Этот штамм обладает способностью продуцировать и-l,б-глюкозидазу больше во внешней среде, окружающей клетку, чем в самих клетках. Штамм выделен из почвы, идентификацию его осуществляли по справочнику

Bcrgey s Manual of Determinative Bacteriolog (седьмое издание).

Штамм Nocardia corallina 1ГО 3338 характеризуется следующими морфологическими и культуральными признаками.

Разветвляющиеся палочки в основном загнуты, 1,0 — 1,5: 3,0 — 10,0 мкм. После сравнительно длительного процесса выращивания (T. е. старые культуры) клетки имеют форму б более коротких палочек и кокков.

Клетки неподвижные, некислотоустойчивые, грам-положительные. На желатине колонии круглые, выпуклые, гладкие, розовые, блестящие. Край колоний нитевидный.

10 После выращивания в столбике желатииы клетки имеют форму шляпки гвоздя, древовидные. Разжижения не наблюдается.

На агаре колонии круглые, выпуклые, имеют закругленный выступ, гладкие, розовые, 15 блестящие илп матовые, край более светлый, нитевидный или с древовидными выступами.

В ранних стадиях развития колонии состоят из разветвляющихся нитевидных палочек.

По мере роста колоний клетки разрываются

20 внутри на короткие палочки, а cnap) жи остаются нитевидными.

На скошенном агаре колонии питчатые, выпуклые, гладкие, розовые, блестящие илп матовые. Рост древовидный или с выступами.

25 На лакмусовом молоке реакция щелочная; красноватая пелликула. На картофельном агаре с глицерином колонии нитчатые, сухие, мор545267

Составитель М. Андреева

Редактор Н. Хубларова Техред Е. Петрова Корректор Л. Орлова

Заказ 108,20 Изд. М 144 Тираж 589 ПОдписнОе

Ц1.1ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 щинистые, от желтовато-коричневого до кораллового цвета.

На яичной среде по Дорсету колонии нитчатые, сухие, морщинистые, оранжевого цвета.

На среде по Лиффлеру рост колоний аналогичен росту на яичной среде по Дорсеру, но розовый.

Сахарозу, мальтозу н лактозу не сбраживает.

Оптимальная температура между 22 и 25 С.

Оптимальное значение рН между 6,8 и 8,0.

Пример 1. Получение а-l,б-глюкозидазы при помощи штамма Nocardia сога111па IFO

3338.

Штамм Nocardia corallir1a IFO 3338 вносят в 100 мл культуральной среды, содержащей (/о): пептон 1,0; дрожжевой экстракт 0,5;

КзНРО4 0,1; NaCI 0,1; MgSO4 7Н20 0,05;

FeSO4 7НзО 0,001; разжиженный крахмал

1,4. Процесс осуществляют 4 дня при 30 С и перемешивании.

Внеклеточная энзиматическая активность штамма 24,6, внутриклеточная 1,6, общая

2G,2; рН среды 7,6.

Пример 2. В 1 л культуральной среды, аналогичной по составу среде в примере 1, вносят штамм Nocardia corallina IFO 3338 и осуществляют процесс культивирования 3 дня при 30 С, перемешивании и рН 7,4.

Внеклеточная энзиматическая активность штамма 34, внутрнклеточная 16, общая 50.

Сливают надосадочную жидкость, насыщают ее сульфатом аммония до получения 0,8 насыщенного раствора. Выпавитий осадок отделяют центрифугированием, растворяют в воде, перастворившнеся примеси удаляют, раствор насыщают сульфатом аммония (до получения 0,8 насыщенного раствора), высаливают и диализуют.

Получают раствор энзима. Оптимум рН раствора 6 — 7, оптимальная температура 42—

46 С. При повышении температуры до 50 С активность энзпма падает. Энзим не гидроли15 зует декстрин.

Формула изобретения

Способ получения и-l,б-глюкозидазы путем культивирования ее продуцентов на питатель 0 ной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли, отличающийся тем, что, с целью расширения ассортимента продуцептов, в качестве продуцента используют штамм Nocardia сога111па IFO 3338.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Патент СССР Гй 290542, кл. С 12d 13/10, 1971.