Способ выделения чистых культур холерных вибрионов

Способ выделения чистых культур холерных вибрионов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ а it) 545676

Союз Советских

Социалистических

Реслублик

К АВ1ОГСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 06.12.72 (21) 1854202/13 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 05.02.77. Бюллетень № 5

Дата опубликования описания 02.03.77 (51) М. Кл з С 12К 1/06

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений ,. открытий (53) УДК 576.8.093.1 (088.8) (72) Авторы изобретения

Ю. И. Литинский и Ф. Х. Ибрагимов

Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИД ЧИСТЫХ КУЛЬТУР

ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

25

Изобретение относится к медицинской микробиологии, оно может быть использовано в лабораториях, занятых бактериологической диагностикой заболеваний, вызванных холерными вибрионами, выявлением холерных виб- 5 рионсносителей среди здорового населения, исследованием на зараженность холерой воды, пищевых продуктов п других объектов вн еш н ей ср еды.

При всяком бактериологическом исследова- 10 нии на наличие холерного вибриона основной задачей является выделение этого микроба в чис;ой культуре. Это вызвано тем, что во всех материалах, доставляемых в лаборатории для анализа, содержится многообразная посторонняя микробная флора, в смеси с которой возбудитсль холеры, если он там имеется, не может быть идентифицирован.

Известный способ выделения чистых культур холерных вибрионов из различных материалов заключается в том, что осуществляют посев исходного материала на поверхность элективной для холерных вибрионов плотной питательной среды и инкубирование микроорганизмов на этой среде (1).

Известный способ весьма длительный и трудоемкий в связи с необходимостью повторных пересевов из жидких сред в жидкие и на плотные среды.

С целью устранения указанных недостатков предлагается посев осуществлять на полужидкую среду локалпзованно относительно поверхности, на которой возможен рост холерного вибриона, или относительно об ьема среды, в котором возможен рост холерного висрнона.

Предложенный способ основан на высокой естественной подвижности холерных вибрионов. Возбудители холеры относятся к числу наиболее подвижных бактерий, в результате чего в соответствующих условиях они значительно опережают другие виды бактерий при размножении на поверхности и в толще полужидких агарово-желатиновых сред. Таким образом, на границе роста бактерий и еще не заселенной бактериями среды холерные вибрионы могут быть изолированы (высеяны) в чистой культуре.

Пример. B U-образную трубку диаметром 12 мм заливают полужидкую агарово-желатиновую среду следующего состава (в г):

Вода дистиллированная 100,0

Агар Дифко 0,2 — 0,3 Келатин 3,0

Пептон 1,0

Натрий хлористый 0,5

Кислота борная (1%-ный раствор) 2 мл

545671

Формула изобретения

Составитель В. Ключников

Тсхрсд В. Рыбакова

Редактор Л. Ушакова

1хоррскго > А. Галахова

За каз 233/2 Изд, х" 400 Тираж 89 l lодииснос

ЦНИИПИ Государствсивого ковпггета Совега Мииистров СССР по делаги изобретешгй и открытий

113035, Москва, ji(-35, 1 аушс а:I иаб., д. 4, 5

Ти ографии, Ilp 1 апупова, 2

Бромтимоловый синий (1%-ный раствор) 0,5 мл

Сахароза 1,0 (рН среды 8,5 — 8,7)

Среду заливают в стерильные трубки так, чтобы высота столбика среды в каждом колене пе превышала 35 — 40 мл. Оба колена трубки закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при 112 С в течение

20 мпн. Одновременно с этим в чашки Петри разливают по 17 — 20 мл среды, состав которой отличается от приведенного выше только тем, что агара Дифко берут 0,3 — 0,4 г, 1 /в-ного раствора борной кислоты 5 мл на 100 мл среды.

В обеих средах борная кислота может быть заменена таурохолатом натрия или дезоксихолатом натрия в концентрации 0,3 — 0,5 /о по весу. Любой материал от обследуемых лиц: испражнения, рвотные массы, промывные воды желудка, желчь и т. п., собранный в

1о/о-ную щелочную пептонную воду пли другой консервант и доставленный в лабораторшо, засевают пастеровской пипеткой в одно колено U-образной трубки и а центр чашки

Петри в количестве 0,05 — 0,1 мл, дают впитаться жидкости в среду и помещают в термостат прп 37 С. Просмотр трубок и чашек производят, начиная с 10 час пнкубации и позже — до 22 — 24 час. В этот период холерные вибрионы, размножаясь, продвигаются по питательной среде и при этом значительно опережают другие подвижные бактерии. За 12—

1б час роста в термостате все штампы холер- ных вибрионов успевают продвинуться в трубках на 50 — б0 мм, а на чашках образуют макроколопии диаметром 45 — 50 мм.

Прп этом на границе роста и в трубке Ii na чашке вибрионы находятся в чистой культуре.

Границу подвижного роста легко определяют по измененшо синего цвета среды па оранжево-желтый, так как холерные вибрионы в процессе кизнедеятельности ферментируют сахарозу и образующаяся при этом кислота изменяет цвет индикатора.

Чистую культуру вибриона для рассева, исI: ;IT

10 -.ðóáêó значительно увеличивает надежность способа.

Предварительный положительный результат при исследовании с использованием предлагаемого способа может быть получен уже

15 через 14 — 1б час, а окончательный результат — через 20 — 24 час после доставки материала в лабораторию.

Предлагаемый способ позволяет сократить в 2,5 — 3 раза трудовые и .;.атериальные затра20 ты Ilpii сохранении эффективности бактериологического исследования.

25 Способ выделения чистых культур холерных вибрионов из различных материалов, включающий посев исходного материала на элективпую для холерных вибрионов питательну1о среду и инкубирование микроорга39 нпзмов на этой среде, отличающийся тем, что, с целью сокращения сроковвыделеппя холерных вибрионов и упрощения способа, посев осуществляют на полужидкую среду локалпзованно относительно поверхности, на

35 которой возможен рост холерного вибриона, пли относительно объема среды, в котором возможен рост холерного вибриона.

Источники информации, принятые во внимание прп экспертизе:

40 1. E. И. Коробкова «Микробиология и эппдемпология холеры», М, Медгпз, 1959, с. 18! †1 (прототип).