Способ определения вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата

Способ определения вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

>ii1 548623

Союз Советских

Социалистических

Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 18.06.75 (21) 2145807/15 с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

Опубликовано 28.02.77. Бюллетень ¹ 8

Дата опубликования описания 28.03.77 (51) М. Кл. С 12К 1/00

Государственный комнте-, Совета Министров СССР о дела л изобретений и открытий (53) УДК 576.093(088.8) (72) Авторы изобретения

В. В. Гулий, Н. И. Северина и Т. В. Теплякова

Сибирский научно-исследовательский институт химизации сельского хозяйства (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИРУСНЫХ И БАКТЕРИАЛЬНЫХ

ПРЕПАРАТОВ НА ПОВЕРХНОСТИ СУБСТРАТА

Изобретение относится к способам определения остаточных количеств действующего начала отечественных корпускулярных биологических препаратов, применяемых для защиты растений, типа «Вирин-ЭКС», «Вирин-ЭНШ», «Вирин-ГКБ», энтеробактерия, дендробациллин, инсектин и другие.

Практическое применение в защите растений от вредителей вирусные и бактериальные препараты получили в последние 5 — 10 лет.

Однако способы контроля за остатками этих препаратов в настоящее время не отвечают предъявляемым требованиям.

Известны способы определения остаточных количеств виру.сных препаратов, основанные на постановке биопроб на восприимчивых личинках со смывами с растительных образцов или органических остатков и почвы, обработанных биопрепаратами, или же исследовании смывов с субстрата бактериологическим путем (1, 21, Однако известные способы не обеспечивают точности определения остаточных количеств биопрепаратов, так как в обоих случаях не достигается полного снятия с поверхности субстрата биопрепарата в силу явления адгезии и широко распространенных у насекомых латентных форм вирусных заболеваний, а в случае изучения бактериальных препаратов при использовании известных п обов невозможН0 контролировать состояние основного их компонента — кристаллического эндотоксина, так как на питательных средах прорастают лишь споры.

5 Известен также способ определения остаточных количеств биопрепаратов, включающий снятие отпечатков с исследуемой поверхности субстрата, обработанной бнопрепаратом путем нанесения на поверхность субстрата липкой

10 ленты, с последующим окрашиванием ее красителями и микроскопированпем (31.

Однако известный способ также не обеспечивает полного снятия компонентов препарата с исследуемой поверхности, Кроме того, изве15 стные липкие ленты обладают собственной интенсивной люминесценцией в сине-ультрафиолетовой части спектра, что исключает применение специфичных методов выявления действующего начала биопрепаратов.

20 Цель изобретения — повышение точности определения остаточных количеств бактериальных и вирусных препаратов на поверхности субстрата.

Это достигается тем, что снятие отпечатков

25 с поверхности субстрата, обработанной биопрепаратом, проводят путем нанесения на субстрат 2 — 3% -ного раствора органического стекла в ацетоне, снятую пленку с отпечатком помещают повторно в указанный раствор для

33 последующего окряшиванпя и мпкроскопиро548623

Составитель А. Алексенюк

Техред Л. Гладкова Корректор Т. Добровольская

Редактор M. Дмитриева

Заказ 533/14 Изд. № 235 Тираж 589 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4,5

Типография, пр, Сапунова, 2 вания. При этом снятые отпечатки подвергают окрашиванию иммунофлуоресцентными красителями для просмотра их в люминесцентном микроскопе.

При специфическом свечении четко очерчиваются контуры микроорганизма, а тело его остается темным.

Способ осуществляют следующим образом.

На листовую поверхность растительного или иного субстрата, ранее обработанную биопрепаратами, с помощью стеклянной палочки или пипетки наносят 2о -ный раствор органического стекла в ацетоне, который при комнатной температуре и ниже быстро застывает, превращаясь в эластичную пленку толщиной от

0,01 до 0,1 мм. Затем пленку с субстрата чистой стороной переносят на предметное стекло, покрытое тонким слоем 2о -ного раствора органического стекла в ацетоне, который застывает и фиксирует пленку с отпечатками.

Полученный с субстрата препарат окрашивают непрямым иммунофлуоресцентным методом и просматривают в люминесцентном микроскопе с объективом масляной иммерсии в падающем сине-фиолетовом свете.

Подсчет клеток на единицу снятого отпечатка с исследуемой поверхности субстрата проводится по формуле: м=- "

ЯО где М вЂ” количество включений в исследуемом образце, Л вЂ” среднее число включений в одном поле зрения, $ — площадь препарата, 5о —,площадь поля зрения микроскопа.

В связи с тем что пленка из органического стекла обеспечивает хорошее снятие микроорганизмов с исследуемой поверхности субстрата, а метод иммунофлуоресценции четко и спе5 цифично выявляет действующие компоненты препаратов, предлагаемый способ более чем в

2 раза улучшает качество контроля и в 4—

5 раз повышает производительность труда.

Формула изобретения

1. Способ определения вирусных и бактериальных препаратов на поверхности субстрата, включающий снятие отпечатков с исследуемой поверхности субстрата, обработанной биопре15 паратом, последующее окрашивание и микроскопирование, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, на поверхность субстрата после обработки ее биопрепаратом наносят 2 — 3 раствор органиче20 ского стекла в ацетоне, снятую пленку с отпечатком помещают повторно в указанный раствор для последующего окрашивания и микроскопирования.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, 25 что снятые отпечатки подвергают окрашиванию иммунофлуоресцентными красителями для просмотра их в люминесцентном микроскопе, Источники информации принятые во внима30 ние при экспертизе:

1. Вирусы насекомых, М, 1974, с. 127.

2. Африкян Э. К,. Энтомопатогенные бактерии и их значение, Ереван, 1973, с. 15 — 28.

3. Paton А. М,, Jones S. М. The observation

35 of microorganism on surfaces by incedent fluorescence microscopy. — «J. Аррl. Bacteriol.», 1973, т 3, № 3, с. 441 — 443.