Диагностическая питательная среда для выявления энтеробактерий

Диагностическая питательная среда для выявления энтеробактерий

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

<>549469

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свпд-ву— (22) Заявлено 06.10.75 (21) 2178242/13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.03.77. Бюллетень Уе 9 (45) Дата опубликования описания 17.06.77 (51) М К > С 12 К 1/06

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УД К 576.8,093.31 (088.8) (72) Автор изобретения

Г. Д. Серов (71) 3aявитель

Владивостокский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (54) ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА

ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ

Питательный агар

Сахароза

Лактоза

Глюкоза

Мочевина

Гнпосульфит натрия

Уксуснокислый свинец

3,0 — 3,5

1,5 в 1,6

0,3 — 0,4

0,08 — 0,09

0.025 — 0,3

0,02 — 0,03

0,03 — 0,04

Изобретение относится к микробиологии, а точнее к диагностической питательной среде для дифференциации микробов и может быть применено в медицине.

Известна двухслойная политронная среда для энтеробактерий (1).

Известна также дифференциальная среда для идентификации энтеробактерий, содержащая питательный агар, лактозу, сахарозу, глюкозу, мочевину, соль Мора, гипосульфит натрия, индикатор, воду (2).

Однако при помощи известных сред можно дифференцировать только энтеробактерии.

Целью изобретения является дифференциация энтеробактерий от иерсиний, вибрионов, лнстерий.

Эта цель достигается тем, что среда дополнительно содержит цистин, крахмал растворимый, в качестве минеральной соли она содержит уксуснокислый свинец при следующем количественном соотношении компонентов (в г/мл);

Цистин 0,002 — 0,003

Крахмал растворимый 0,05 — 0,06

Индикатор феноловый красный 0,0016 — 0,0025

Вода дистиллированная 100 мл.

Приготавливают среду следующим образом. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 1,5 г сахарозы, 0,3 г лактозы, 0,08

l0 глюкозы, 0,02 г гппосульфита натрия, 0,25 г мочевины, 0,03 г уксуснокислого свинца„

0,003 г цистина, 0,05 г растворимого крахмала. добавляют 2,5 мл 0,1о/О водного раствора индикатора фенолового красного и 3,2 г су

l5 хого питательного агара, рН 7,2 — 7,4.

После размешивания среду кипятят 2-—

3 мин и разливают по 6 — 1 .ял. в стерильные пробирки. Стерилизуют два дня текучим и;.ром в течение 20 мин нли при температ ре

20 О

110 С в течение 20 мин, затем среду. скаш1— вают с образованием столбика и скошенной поверхности. Цвет среды абрикосовый.

Посев делают сначала со скошенной поверхности, а затем, скользя по ней, делают

25 посев уколом, под ватном арлевую пробку вставляют полоску фильтровальной бумагн, пропитанную реактивом для определения нндола. Посевы микробов ннкубируют в тече ние 18 — 24 час прп температуре 37 С, 3» исключением иерсиний чумы, для которых оп549469 тималъной температурой является 29 — 30 С.

После инкубации микробов учитывают цвет скошенной поверхности и столбика, наличие газа и образование индола. Определение фермента диастазы, расщепляющего растворимый крахмал, проводят с теми микробами, для которых этот тест имеет диагностическое значение, например, вибрионы.

Предлагаемая диагностическая среда способна дифференцировать большее количество разных родов микробов.

Пример 1. С чашек со средой Плоскирева отвиты колонии микробов для дальнейшего изучения на предлагаемую среду и среду Олькеницкого. Микробы, подозреваемые как шигеллы, изменили столбик обеих сред в желтый цвет, скошенную поверхность— в красный. На «Универсальном столбике» проба с индолом была отрицательной, поэто му для установления видовой принадлежно стп к шигеллам данную культуру необходимо было агглютинировать только с дизентерийными сыворотками, полученными против микробов, не образующих индол со среды

Олькеницкого, изучаемая культура должна была быть подвергнута в реакции агглютинации со всеми дизентерийными сыворотками.

В случае, если на обеих средах окраска столбиков изменялась в желтый цвет с наличием газа, а скошенные поверхности — в красный, то наличие положительной пробы на индол нэ

«Универсальном скошенном столбике» давало возможность исключать принадлежпость культуры к газообразующему варианту шигелл Ньюкестель, в то время, как данная куль— тура со среды Олькеницкого должна была быть проагглютинировгна с сывороткой против шигелл Ньюкестель.

Пример 2. Со среды Зндо, при посевс испражнений больного острым кишечным заболеванием, были отвиты на среду Олькеницкого и «Универсальный скошенный столбик» подозрительные на иерсинии энтероколитика колонии микробов, На среде Олькеницкого цвет скошенной поверхности и столбика изменился в малиновый. Культура изучаемого микроба должна была дифференцироватьсч иерсиниями псевдотуберкулеза, энтероколи гика и протеем. Эта же культура на «Универсальном скошенном столбике» имела характерные признаки для иерсинии энтсроколитика: скошенная поверхность и столбик желтые, а по ходу прокола среды черно-бурая полоса и положительная проба на индол.

Пример 3. Со среды висмут-сульфитпого агара были сняты колонии, подозрительные на сальмонеллы. На «Универсальном ско шенном столбике» и на среде Олькеницкого они изменили столбик в желтый цвет, в верх ней его части — в черный, без газа, скошен - ая поверхность была малиновой. Реакция агглютинации культур была положительной с брюшнотифозной сывороткой. Дальнейшее исследование позволило идентифицировать культуру как сальмонеллы брюшного тифа.

Формула изобретения

Диагностическая питательная среда для выявления энтеробактерий, содержащая пи тательный агар, сахарозу, лактозу. глюкозу, мочевину, гипосульфит натрия, минеральную соль, индикатор феноловый красный, воду дистиллированную, отличающаяся тем, что, с целью дифференциации энтеробактерий от иерсиний, вибрионов, листерий, она дополкительно содержит цистин, крахмал растворимый, в качестве минеральной соли она содержит уксуснокислый свинец при следующе:. количественном соотношении компонентов (в:/лл):

55

Питательный агар

Сахароза

Лактоза

Глюкоза

Мочевина

3,0 — 3,5

l,5 — 1,6

0,3 — 0.4

0,08 — 0,09

0,025 — 0,3

При исследовании испражнений больных дизентерией при помощи «Универсального скошенного столбика» и среды Олькеницкого было выделено 245 культур, подозрительных на шигеллы. 218 из них были отнесены к ши геллам, 27 — эшерихиям и алкалесценс. Од пако наличие на «Универсальном скошенном столбике» положительной пробы на индол сократило время исследования и дало возможность сэкономить агглютинирующие сыворотки.

При помощи обеих сред было выделено

135 штаммов псевдотуберкулезного микроба и 97 штаммов иерсиний энтероколитика. Все культуры иерсиний энтероколитика на «Универсальном скошенном столбике» имели четкие отличия от иерсиний псевдотуберкулеза. в то время, как на среде Олькеницкого никаких характерных отличий не наблюдалось.

От больных изолировано 14 штаммов сальмонелла энтеритидис Гертнера, которые на обеих средах изменяли столбик в черный цвет с газообразованием, а скошенную поверхность — в красный. При проверке изменения цвета среды на 4 музейных штаммах мышиного тифа, двух — паратифа «В», нэ обеих средах изменения в цвете были такими, как при росте энтеритидис Гертнера.

Изменения в цвете «Универсального скошенного столбика» при росте на нем иерсиний чумы были одинаковыми у двух взятых в опыт музейных штаммов.

Изучение роста холерного вибриона (пять штаммов) и листерий (два штамма) была

З5 проведено также на музейных культурах.

Предлагаемая диагностическая среда является универсальной, так как позволяет ди(1эференцировать несколько видов микроорганизмов, относящихся к различным родам.

40 что облегчает и ускоряет дифференциацию микробов за счет увеличения выявляемых признаков в одной пробирке и исключает необходимость применения нескольких сред.

549469

О. 0016 — 0,0025

100 ил.

Составитель С. Малютина

Техред И. Сметанина

Корректор И. Симкииа

Редактор В. Трофимов

Заказ 290/935 Изд. № 463 5 ь9 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушскав наб., д, 4/5

Тип, Харьк. фил. пред. «Патент»

Гипосульфит натрия

Уксуснокислый свинец

Цистин

Крахмал растворимый

Индикатор феноловый красный

Вода дистиллированная

0,02 — 0,03

0,03 — 0,04

0,002 — 0,003

0,05 — 0,06

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. О. В. Бароян «Холера Эль-тор», М., 1971 r., стр. 165.

2. «Известия Иркутского гос. противочумного института Сибири и Дальнего Востока», т. Хй, 1956 r., стр. 46 — 48.