Способ получения живой брюшнотифозной вакцины

Способ получения живой брюшнотифозной вакцины

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистически»

Республик

1 549470

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (51) М. Кл.- С 12 К 5/00 (61) Дополнительное к авт, саид-ву— (22) Заявлено 20.08.71 (21) 1696888/13 с присоединением заявки— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.03.77. Бюллетень № 9 (45) Дата опубликования описания 17.06.77

Государственный комитет

Совета Мнннстров СССР по дегам изобретений и открытий (53) УД К 615.371 (088.8) (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

В, Г. Лиходед, Б. Ю. Шустер и В. В. Сергеев

Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЖИВОЙ

БРЮШНОТИФОЗНОЙ ВАКЦИНЫ

Изобретение относится к медицине.

Известен способ получения живой брюш. нотифозной вакцины на основе мутанта

Salmonella typhi, зависимого по стрептомицину.

Однако вакцина, полученная известным способом, недостаточно эффективна и реактогенна.

С целью получения высокоиммуногенной и нереактогенной вакцины используют мутант

Salmonella typhi, обладающий дополнительно зависимостью по пурину.

Способ получения живой брюшнотифозной вакцины осуществляют следующим образом.

Используют мутанты бактерий Salmonella

typhi, зависимые по пурину (puI. В ) и стрептомицину (str-d). Мутанты по пурину получают пенициллиновым методом. Для получения стрептомицинзависимых мутантов исходный штамм высевают на 1,5%-ный мясо-пептонный агар Хоттингера, содержащий стрептомицин в концентрации 300 ед/мл. Выращенные колонии подращивают в мясо-пептонном бульоне Хоттингера в течение 3 ч, после чего высевают их на твердую агаровую среду с антибиотиком и без него. Колонии, выросшие только на среде с антибиотиком, являются стрептомицинзависимыми.

Вирулентные свойства мутантов и их ревертантов изучают на белых мышах путем внутрибрюшного введения культуры в физиологическом растворе. Тифозные бактерии вводят в полужидком агаре. LD>, вычисляют по методу Кербера в модификации Ашмарина

5 и Воробьева, При мутации к пурин- и стрептомицинзависимости сальмонеллы разных видов становятся а вирулентными: их показатель LD>< в миллионы раз больше, чем этот же показа10 тель у исходных штаммов.

При изучении вирулентных свойств рсвертантов stI -d мутантов сальмонелл устанавливается расщепление этого свойства. 80—

85% ðåâåðòàíòîâ остаются авирулентными, остальные же ревертанты в той или иной степени восстанавливают вирулентные свойства.

Ревертанты из пуринзавнсимого штамма

S. typhi М-71 pur.  — в 100% остаются вирулентными О Чтобы получить живую брюшнотифознук вакцину, безопасную в практическом использовании, применяют двойной мутант S. typhi, зависимый по пурину и стрептомицину. В качестве исходного штамма используют пурин25 зависимый мутант S. typhi М-71 pur. В из которого отселекционировали стрептомицинзависимый мутант.

Частота реверсии двойного мунтанта по пурину составляет 2 10, а по стрептомиЗО цину — 4. 10 . Одномоментной реверсии по

549470

Составитель С. Малютина

Текред В. Рыбакова

Р "". актор С. Титова

Корректор И. Симкина

Заказ 290/935 Изд. Мя 463 Тираж 589 Подгпсно=

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Тпп. Харьк. фил. пред. «Патент» двум признакам двойного мутанта при посеве его в количестве 1 10" микробных клеток на минимальный агар без стрептомицина не установлено.

Вирулентные свойства двойного мутанта и ревертантов по одному из признаков изучают на белых мышах.

Ревертанты, выделенные из двойного мутанта, по одному из признаков по пурину или стрептомицину остаются авирулентными со значением LD 6 10 — 1 10 микробных клеток.

Отсутствие одномоментной р евер сии по двум признакам, авирулентность ревертантов по одному из признаков обуславливает безопасность практического применения живой брюшнотифозной вакцины, приготовленной на основе мутанта, зависимого по пурину и стрептомицину.

Иммуногенные свойства вакцины, приготовленной на основе двойного мутанта

S. typhi М-71 pur. В str-d, проверяют на белых мышах по методу,Луипольда. Группы мышей, по 10 штук в каждой, иммунизируют энтерально различными дозами вакцины и разрешают вирулентной культурой в 0,4 /о-ном полужидком arape S. typhi Т 5501 в дозе

5 10 LD„.-O. В качестве контроля используют гретую вакцину, приготовленную из вирулентной культуры S. typhi Т 5501. Иммуногенные свойства живой брюшнотифозной вакцины, приготовленной на основе двойного мутанта, при энтеральном способе применения в 5 раз выше по сравнению с иммуногенными свойствами гретой вакцины.

Формула изобретения

Способ получения живой брюшнотифозной вакцины путем выращивания стрептомицинзависимого штамма Salmonella typhi в питательной среде с последующим отделением культуры и лиофилизацией, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью получения высокоиммуногенной и нереактогенной вакцины, используют мутант Salmonella typhi, обладающий дополнительно зависимостью по пурину.