Способ замораживания клеточных культур

Способ замораживания клеточных культур

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (i» 54947!

1 Союз Советских

:Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 14.08.75 (21) 2166555/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 05.03.77. Бюллетень ¹ 9 (45) Дата опубликования описания 17.06.77 (51) М Кл С 2 К 9/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР .по делам изобретений н открытий (53) УДК Л578.085,23 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. А. Красников, 3. П. Наумец и Н. Н. Соса (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ

КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР

Изобретение относится к биологии и может быть использовано в медицинской и ветеринарной вирусологии.

Известен способ замораживания клеточных культур, выращенных в монослое на стеклянной основе, покрытых слоем защитной среды, а затем замороженных при — 45 С (11.

Однако известный способ не обеспечивает быстрого замораживания, а также возможно повреждение и гибель клеток.

Целью изобретения является повышение сохранности и жизнеспособности клеток.

Эта цель достигается тем, что монослой выращивают на алюминиевой фольге, удаляют защитную среду и прикладывают к металлической пластине, охлажденной жидким азотом.

Способ осуществляют следующим образом.

Для замораживания культуру клеток предварительно выращивают на алюминиевой фольге, которую выпускают для целей пищевой промышленности. Нарезают пластинки величиной 3,5 >< 1 см, подвергают промыванию. Затем монтируют в стеклянном флаконе подвижную основу из алюминиевой фольги. Суспензию клеток, снятую версеном со стеклянного матраса в концентрации 1,5. 10 кг/лл вносят во флакон, где находилась пластинка фольги, погруженной в жидкой фазе. Клетки оседают на поверхность пластинки, прикрепляясь к ней на 3 — 4 суток, образовывают сплошной монослой, изменяя рН среды от 7,2 до 6,8.

Для выявления роста клеток на фольге проводят окрашивание образцов дубликатов спиртовым раствором фуксина. Монослой клеток окрашивается в малиновый цвет на фоне не окрашенной серебристой поверхности фольги. Перед замораживанием кусочки фольги с выросшим монослоем погружают в защитную среду состава: среда 199 †8, сыворотка крупного рогатого скота 10 /О, глице. рин 10%. Через 15 л ия защитную среду удаляют, кусочки фольги берут пинцетом за отогнутый уголок и всей поверхностью прикладывают к теплопроводной металлической пластинке, постоянная низкая температур а которой поддерживается протекающим внутри нее жидким азотом. Замороженные культуры клеток хранят при температуре жидкого азота в сосудах Дьюара.

Восстановление культур клеток проводят путем их быстрого оттаивания, погружая г> защитную среду при температуре +37 С, Затем пластинки переносят в стеклянпыc флакончики, содержащие ростковую среду и выращивают в термостате. Рост клеток начинается через 24 часа и раньше, об этом свидетельствует изменение рН в кислую сторо54947I

Составитель С. Малютина

Текред И. Сметанина

Редактор В. Трофимов корректор И. Симкина

Заказ 290/935 Изд. М 463 Тираж 589 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фил. пред, «Патент» ну. Субкультивирование проводят через 24—

48 час. Питательную среду удаляют и во флакон вносят раствор версена. Выдерживают в термостате 10 мин до появления в прозрачном растворе версена белых конгломератов клеток. Раствором версена клетки смывают с поверхности фольги. Осадок клеток получают путем отстаивания и удаления версена.

Клетки суспендируют в питательной среде и субкультивируют в стеклянных матрасах.

Сохраняемость клеток после замораживания составляет 90 /о. Клетки обладают присущей им морфологией, интенсивностью роста, чувствительностью к вирусам.

Формула изобретения

Способ замораживания клеточных культур, заключающийся в выращивании клеток в виде монослоя, покрытия защитной средой и замораживания, отличающийся тем, что, с целью повышения сохранности и жиз5 неспособности клеток, монослой выращивают на алюминиевой фольге, удаляют защитную среду и прикладывают к металлической пластине, охлажденной жидким азотом.

10 Источник информации, принятый во внимание при экспертизе:

1. К. С. Куликова «Устойчивость перевиваемых линий клеток к действию низкой тем15 пературы» в книге «Вирусные инфекции v. противовирусные препараты», М., 19б1, 2.212,