Способ фаготипирования холерных вибрионов

Способ фаготипирования холерных вибрионов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Соеа Соеетсккк

Соцналкстккеюпеа

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СЗМДВТВЯЬСТтаУ (щ ЬЗОЕОО (61) Дополнительное. к авт. свнд.ву— (22} Заявлеио25.06.75 (21) 2153531/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.09.77.бюллетень 34 35 (4б) Дата опубликования описании 25.10 77

2 (51) М, Кл.

С 12 К 7/00

Гввударственню» квинтет

Свавта Мнннвтрвв СССР нв делам нзвбратвннй и вткритнй (53) УДК 576.8.077.

5(088.8) М. С. Прожевкииа, и Ю. А. Арутюнов (721 Авторы еезобретеаеаи

Ростовский-иа-QDHy государственный научно-исследовательский противочумный институт (71) Заиевиеаь (54) СПОСОБ ФАГОТИПИРОВАНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

Иэобретеатие относится к области меди:иимской макробиопогии.

Известен способ типирования холерных вибрируя(ив закпючаеошийся в том что ис» следуемый м® àaà дифференцируют по биотинам 1 . Однако известный способ не обеснечвеает воэможности типирования бопее широкого круга обьектов.

С целью обеспечения возможности типировамтя более широкого круга . обьектов инкубаиню проводят в присутствии фагов

Й,П.IV группы Мукерджи и вибриофаг 3900, 455 и 7227.

Иэ используемых шести фагов три пер- р вых взяты из коппекции Мукерджи, а три остапьных впервые выделены и хранятск в коллекции Противочумного института под теми же номерами. Фаги 3900, 455 и 7227 выдепены из испражнений вибрионоситепей 20 в 1970. После пассажа на клоковой нелизогенной культуре 7;g)go 75 и через организм морской свинки в сочетании с дейстзием УФ-пучей и сепекцией. прозрачных негативных копоний получены стабильные 25

2 вирулентные клоны этих фагов, которые и. включены в типируюший набор.

Все фаги нового набора разных серотипов, что обеспечивает стабильность диапазона их действия, Типируюший фаг {I группа Мукерджи) относится z Т серотипу хоперных фагов по отечественной классификации; фаг 2 (Пгруппа Мукерджи) относится ко П серотипу фаг 3 {IY группа Мукерджи) - к ХУ; фаг 4 (3900) - к УП; фаг 5 (455) - к

IX; фаг 6 {7227) - к УШ. Все фаги обпа дают специфическим диапазоном действия на холерные вибрионы.

Предлагаемым способом типировапось

99,65% исследуемых штаммов обоих биоти» пов.

Фаготипирование проводят без цредваритеаьной идентификации исследуемого штамма до биотипа. Идентификацию фаготипа осуществляют по единой схеме, вместо двух раздельных цо Мукерджи (см.табпицу).

Для фагов 1-3 штаммом-хозяином является V,ñÜîÈãàà 145, дпя фагов 4-6.V,енот 75.

550850

Идентификация фаготипов по Дрожевкиной-Арутюнову

Штаммы хранятся в филиале ГИСК им.

Л А, Тарасевича.

Фаготилирование осушествляется следучсьщим образом.

Иэ 3 «часовой бульонной культуры

5 пируемого штамма холерного вибриона готовят газон двухслойным методом. Чашки подсушивают, после чего на поверхность второго слоя накосят шесть типируюших фвгов. Каждый фвг используют с единой концентрацией фаговых корпускул в 1 мл1-5 ° 10 . При типировании фвги наносят б либо штампом по методу В. Г. Середина с сотрудниками (1071) - при большом чис1Ь ле штаммов, либо петлей диаметром 3-4 ммпри единичных исследованиях. После нанесения фага чашки с посевами переворачивают и инкубируют в термостате при 37 С.

Пример 1. Исследуемый материалчетыре штамма холерных вибрионов ¹6417, 6451, 6470 и 6401 — засевают на чашке

Петри известным способом и инкубируют с перечисленными выше шестью типируюшими фагами при 37 С в течение 12 ч. B посевах штаммов 6417, 6470 и 6401 зона лизиса проявляется при контакте с 4,5 и

6 фагами. В п >севе штамма 6451 зона лизиса проявляется при контакте с 4 и 6 фагвми. В остальных случаях лизис не был обнаружен. На основании полученных данных исследу мые вибрионы штаммов 6417, Учет результатов производят через

12-18 ч. Степень лизиса определяют по четырехбалльиой системе:

++++ нв месте нанесения фага четкая эона лизиса без вторичного роста;

+++ на месте нанесения фага четкая эона лизиса с единичными колониями вторичного роста;

++ на месте нанесения фага видна зона лиэиса с вторичным ростом;

+ едва, заметный след лизиса на месте нанесения фага; отсутствие лизиса.

Продолжительной считается реакция оцениваемая не ниже, чем на ++ Идентификацию фаготипа осуществляют по приведенной выше таблице.

6470 и 6401 отнесеуа к ф@готипу 2, а штамма 6451 к аготипу 1 (см, таблицу

50 фаготипироввния Дрожевкиной-Арутюнова), Предложенный способ фаготипирования улавливает более тонкие штаммовые различия, что позволяет выявить большее число фаготипов.

Выявление большого числа фаготипов среди циркулирующих вибрионов позволяет более полно испольэовать способ фаготипирования при эпидемиологическом анализе для выявления источника инфекции.

550В50

Составитель С, Малютина

Техред Н. Анлрейчук Корректор A. Кравченко

Редактор Е, Хорина

Заказ 3801/46 %раж 541 Подп исное

LIHHHI IH Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„д, 4/S

Филиал ППП Патечт, г. Ужгород, уп. Проектная, 4

Формула иэобретения

Способ фаготипироваиия холерных вибрионов путем инкубации исследуемого материала с индикаторными фагами и оценки б результатов по сочетанию наличия и отсут ствия литических реакций,,о т л и ч а юш и и с я тем, что, с целью обеспечения воэможности типирования более широкого круга объектов, инкубацию проводят в присутствии фагов I, П, IY группы Мукерджи и вибриофаг 3900,455 и 7227.

Источники информации, принятые во вниманив при экспертиэе;

1.Expevientia 3, 1968, с. 299-300.