Способ постановки цитолитических реакций

Способ постановки цитолитических реакций

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

о п и с- Х -Фги в

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 551360

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 06.05,74(21) 2022446/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.03.77.Бюллетень № 11 (45) Дата опубликования описания 22.04.77 (51) M. Кл.

С 12 К 1/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изооретений и открытий (53) УДК 615 373 (088.8) (72) Авторы изобретения

О. В. Давыдов, Т. В. Карпова, P. М-А, Вагабов и Г. С. Давыдова

Белорусский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОСТАНОВКИ ЦИТОЛИТИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ

Изобретение относится к области медицины и биологии и может быть использовано в лабораторной практике.

Известен способ постановки цитолитических реакций, для чего индикаторные клетки соединяют с исследуемой сывороткой (вирусом) fl).

Целью изобретения является повышение чувствительности реакции.

Это достигается тем, что индикаторные 10 клетки подвергают обработке триэтаноламином в конечной концентрации 1:4000 - 1:40000.

Способ осушествляют по двум вариантам, Первый вариант — постановка цитолитической реакции в присутствии триэтанолами- 15 на, второй вариант - постановка реакции с индикаторными клетками, предварительно о( работанными триэтаноламином и отмытыми от него.

Доза триэтаноламина и время экспозиции 20 должны быть такими, чтобы триэтаноламин сам по себе не вызвал цитолиза. Выполнение этого условия определяют первым контролем, в котором соблюдают условия опыта, но испытуемый лизируюший агент заменяют 25 физиологическим раствором. Вторым контролем служит взвесь клеток в физиологическом растворе (для исключения спонтанного цитолиза и для определения количества использованных клеток). При отсутствии цитолиза в обоих контролях проводят учет степени цито-. лиза в опыте. Титром реакции принимается наибольшее разведение испытуемого вешества, давшее избранную для учета степень цитолиза (25, 50, 100% разрушенных клеток).

Пример 1. Первый вариант. Индикация вирусного гемолиза в присутствии триэтаноламина.

В лунках панели к 0,2 мл возрастаюших разведений парагриппозного вируса 1 типа (Сендай) добавляют по 0,4 мл эритроцитов морской свинки (2 /-ная взвесь), 0,2 мл физиологического раствора, 0,2 мл триэтаноламина (1: 3000 на физиологическом растворе), Первый контроль: вместо вируса — 0,2 мл физиологического раствора; второй контроль: вместо вируса и триэтаноламина — 0,4 мл физиологического раствора. После 2 час ино кубации при 37 С в контролях гемолиз отсутствует, а в опыте 100% — ный гемолиз отме чается в титре 1: 1 2 8. В параллельной реакции без триэтаноламина гемолизины обнаруживаются в титре 1:4, т.е. это вещество в конечной концентрации 1:12000 повышает чувствительность реакции гемолиза с парагриппозным вирусом 1 типа не менее, чем в 32 раза.

Пример 2. Второй вариант. Индикац1ля вирусного гемолизина с использованием эритроцитов, обработанных триэтаноламином 10 и отмытых от него.

Реакцию ставят в объеме 1 млв пробирках. К 0,2 мл возрастаюших разведений парагриппозного вируса 2 типа (СА) добавляют по 0,4 мп физиологического раствора и 0,4 мл

2". ной взвеси эритроцитов морской свинки, предварительно обработанных триэтаноламином в разведении 1;6000 на физиологическом о растворе в течение 2 час при 37 С и отмытых от него. Контроль: 0,2 мп физиологичес- 0 кого раствора вместо вируса. После 20 час о инкуоации при 37 С в контроле гемолиз отсутствует, в опыте 25 /-ный гемопиз отмечается в титре 1;32. В параллельной реакции с нормальными эритроцитами титр гемо- 5 лизинов 1:4, т.е. обработка эритроцитов морской свинки триэтаноламином в конечной концентрации 1:6000 повышает чувствительность реакции гемолиза с парагриппозным вирусом

2 типа не менее, чем в 8 раз. 30

Пример 3. Второй вариант. Титрование гемопитической сыворотки с применением эритроцитов, предварительно обработанных триэтаноламином и отмытых от него.

Реакцию ставят в пробирках в объеме

2,5 мп: 0,5 мп гемопитической сыворотки в разведениях 1:400, 1:800, 1:1600, - - - 000, 1: 3000, 1: 4000; 0,5 мп 2%-ной взвеси эритроцитов барана, предварительно обработан ых триэтанопамнном в конечной концент-40 рацип 1:6000 с посг.едуюшим отмыванием

cT BFo; 0,5 i;i, I комплемента в разведении

1:10„1 мл буферногс физиологического раствора. Обработку эритроцитов проводят смешива; ием равных объемов их с 2% суспензии

/ и т ризтанопамина, 1; 3 000 ) . Контакт — 1 час о прп 3 i С. Отмывание производят центрифугнрованием с удалением насадка. Взвесь эритроцитов довод т до первоначальной концентрации буферным раствором.

Первый контроль: физиологический раствор вместо гемопитической сыворотки; второй контроль: физиологический раствор вместо комплемента. После 1 час инкубации при 37 С о в контролях гемопиз отсутствует, в опыте наблюдают полный гемопиз в титре 1:2000.

В параллельной реакции с нормальными эритроцитами гемолитический титр равен 1:800, т.е. предварительная обработка эритроцитов триэтанопамином с отмыванием повышает их 60 чувствительность к гемолизинам более, чем в 2 раза.

Пример 4. Второй вариант. Микрометод титрованпя гемолитической сыворотки с применением эритроцитов, предварительно обработанных триэтаноламином и отмытых от него.

Реакцию ставят в лунках панели в объеме

0,5 мл: 0,1 мл гемолитической сыворотки в испытуемых разведениях + 0,1 мл 0,5 %-ной взвеси эритроцитов барана, обработанных триэтиламином (см. пример 3) + 0,1 мл комплемента 1:40 + 0,2 мл буферного физиологического раствора.

Первый контроль: физиологический раствор вместо гемолитической сыворотки; второй контроль: физиологический раствор вместо комплемента. После 1 час инкубации при37 С о

100 /-ный гемолиз наблюдается в титре

1:8000, в параллельной реакции с нормальныMH эритроцитами титр гемолитической сыворотки равен 1:3000, т.е. обработка эритроцитов риэтаноламином с отмыванием повышает титры в 2,6 раза.

Пример 5. Второй вариант. Титрование комплемента в прис-утствии эритроцитов, обработанных."риэтанопамином и отмытых от него.

Реакцию ставят в пробирках по макрометоду в объеме 2,5 мл:0,5 мл комплемента в исследуемых разведениях; 0,5 мл 2%-ной взвеси обработанных бараньих эритроцитов (см. пример 3), конечная концентрация триэтаноламина 1:4000; 0,5 мп гемолитической сыворотки 1:400; 1 мл буферного физиологического раствора.

Первый контроль: физиологический раствор вместо комплемента; второй контроль: физиологический раствор вместо гемолитической сыворотки. После 1 час инкубации при 37 С о

100%-ный гемолиз наблюдается в титре 1:100, в параллельной реакции с нормальными эрит« роцитами - 1:20, т.е. обработка эритроцитов триэтиламином в концентрации 1:4000 повышает титры реакции в 5 раз.

Пример 6. Второй вариант. Титрование комплемента в присутствии эритроцитов, обработанных триэтаноламином и отмытых от него.

Реакцию ставят по макрометоду (см. пример 5i. Время обработки эритроцитов триэ1 таноламином 3 час 30 мин, конечная концеМтрация триэтаноламина — 1: 8000, 1: 1 6000, 1:20000, 1:40000. После 1 час инкубации при 37 С 100 /-ный гемолиз отмечают для обработанных вышеуказанными концентрация ми триэтаноламина эритроцитов в титрах

1:100, 1:100, 1:60, 1:60 соответственно.

В параллельной peazIIIIa с нормальными эритроцитами титра комплемента 1:20, т.е. обра

551360

Составитель С. Малютина

Редактор А. Бер Техред А. Демьянова Корректор Б. Югас

Заказ 88/15 Тираж 582 Подписное

БНИИПИ Государственного хомитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 ботка эритроцитов триэтаноламином в концентрации 1:8000 и 1:16000 повышает титры реакции в 5 раз; 1:20000 и 1:40000в 3 раза.

Формула изобретения

Способ постановки цитолитических реакций путем соединения индикаторных клеток с исследуемым материалом, отличающийся тем, что с целью повышения чувствите -ьности реакции, индихаторные клетки подверг=ют обработке триэтаноламином в конечной концентрации 1:4000 — 1:40000.

Источники информации, принятые во внимачие при экспертизе:

1. Лабораторное дело, ¹ 2, 1963 r с. 41 (прототип).