Способ разделения -токсина-фосфолипазы с типа а на изоферменты

Способ разделения -токсина-фосфолипазы с типа а на изоферменты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

i! Ii 552360

Союз Советских

Сокиалистическик

Республик (61) Дополнительное к авт. свпд-ву (22) Заявлено 08.04.75 (21) 2122061, 13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.03.77. Бюллетень № 12

Дата опубликования описания 24.06.77 (51) Ч Ктг С 12К 5!00(!

А 61К 35/74

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576.8.097.29 (088.8) (72) Авторы изобретения

Г. Ф. Шеманова, Е. В. Власова, К. A. Ахундова, Л. Н. Дмитриева и Е. Г, Саенко

Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (71) Заявитель

) (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ а-ТОКСИНА-ФОСФОЛИП

С CLOSTB101UM PER1 RiN61=AS ТИПА А 1)A ИЗОФЕРМЕ11 1! (зобретение относится к микробиологии, а именно к производству анатоксинов.

Известен способ получения анатоксина перфрингенс, согласно которому нативный токсин частично обезвреживают формальдеГИДОМ, Оеа)КД310Т апаТОКСИН ГЕКСаМЕТафОСфатом, окончательно обезвреживают и сорбируют на гидроокиси ал)омпния.

Однако анатокси 1, получаемый этим способом, обладает низкой иммуногенностью и сорбционной способностью, Разделение а-токсина-фосфолипазы С

Clostridium periringens типа A на изоферменты и использование их для получения анатоксинов повышает их иммуноге11ность и сорбционную способность, Целью изобретения является разделение атоксина-фосфолипазы С Clostridium регЫпgens типа А на изоферменты.

Зто достигается тем, что токсин хроматоi paip»pyior на ДЗАЗ-целлюлозе, уравнове-!

110k»!ok! в 0,0i Ы p3ci иоре борной k!11сло гы, содержащем 0,01 "i хлористого натрия, ст1-фосфолипазу оставляют в фильтрате, à аг — фосфолипазу элюируют 0,1 М раствором однозамещенного фос1рорнокислого натрия.

Способ осуществляют следующим образом. 1)осфо;1»1)азу oc3)!i+310т из нативпого TQKci па дооавленисм 2NH(до рН 4,2 — 4,5. Осадок отделгпот центрифугпрованпем, растворя)от водой,; диализуют. Диализат юстируют 0,3 111 раствором сорной кислоты, содер5 жащим ь,3 г1 1 3(до конечной концентрации со lей 0,01 i i. ДЗ. З-целлlолозу уравновешивают в 0,01 . 1 растзоре борной кислоты с

0,01 М AaCl, дооавляют юстированпый диализат <, Осфолипазы и выдерживают при перио10 Дпческом перемешиванни на холоде в тече.ние 40 мпн. ДЗАЗ-целлюлозу с сорбированными на ней балластными белками и аг-фосфолипазой отделяют фильтрацией через оюхнеровскую воронку, промывают тем же раст15 вором оорной кислоты с IbaC1 для отделения механически сорбированной а)-фосфолипазы.

Фильтрат и промывные растворы, содержащие и)-фосфолипазу,:соединяют и используют для детоксикации.

ДЗЛЭ-целснолозу с сороированной на ней с.г-фосфолипазой обрабатывают в течение

40 мин 3 х1)лоде 0,05 М раствором К11гРО .

ДЗЛЗ-ц ..;юлозу отлеляют на бюхнеровской

25 во;)онке и в фпльт1)31e onpe+e,15!koT активност1..

Ipocd)oли !3 hi. 11рц Огр!1цатслыIОЙ реакцн)1 ф11льтра Г в1>1брасьIвают. й1-фосфол1»13зу эл10 иру)от 0;1 Л раствором К1-1гРО в течеш1е

40 )II» а холОДе, отзс..яют фильтрацией че3 > рез 01охпсровскую воронку и концентрируют

552360

Составитель С. Малютина

Редактор М. Дмитриева

Техред А. Овчинникова Корректор О. Тюрина

Заказ 903,12 Изд. № 326 Тираж 589 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, УК-35, Раушская наб., д. 4 5

Типография, ир. Сапунова, 2 при рН 4,2 — 4,5 при содержании 22% NaCI.

Осадок отделяют центрифугированием на холоде и растворяют физиологическим раствором. Дальнейшую очистку осуществляют гельфильтрацией концентрата через колонку 90Х

Х2,5 см с Сефадексом G-100 при комнатной температуре. Активные по лецитовителлиновой реакции фракции объединяют и используют для детоксикации по методу Итто и сорбируют на гидроокиси алюминия из расчета 1—

3 мг сорбента на 100 ЕС анатоксина при нейтральной среде.

Лнатоксин перфрингенс, полученный по предлагаемому способу, имеет повышенную иммуногенность.

Формула изобретения

5 Способ разделения а-токсина-фосфолипазы

С Clostridium perfringer1s типа А на изоферменты, отл и ч а ю щи и с я тем, что токсин хроматографируют на ДЭЛЭ-целлюлозе, уравновешенной в 0,01 М растворе борной кисло10 ты, содержащем 0,01 М хлористого натрия, а1-фосфолипазу оставляют в фильтрате, à и>фосфолипазу элюируют О,1 М раствором однозамещенного фосфорнокислого натрия.