Способ получения растворимого коклюшного иммуноадъюванта

Способ получения растворимого коклюшного иммуноадъюванта

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик (11) 552744 (51) М. Кл.

А 61 К 35/66

fssyspnsssss)} нв@нтвт

Ввввта Мнннвтрвв CCCP аа }}вана вввбратванй в втнрытнй (53) УДК 615. 37 3. 3 (088.8) (72) Авторы

ИЗОбрЕтЕНИЯ A. Н . Мац, A Л . Табачник, Н . П . Перепечки на и B. Г . Лиходед

pl) ЗаяВИтЕЛЬ Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (5 v) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАСТВОРИМОГО КОКЛЮИНОГО

ИММУНОА,ЦЬВАНТА

ОП И

ИЗОБ

К АВТОРСК (61) Дополнител (22) Заявлено 25 с присоединение (23) Приоритет (43) Опубликова (45) Дата опубл

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к способам получения иммуноадъювантов, и может быть использовано при изготовлении гипериммунных сывороток и адъювантных вакцинных препаратов.

Известен способ получения растворимого коклюшного иммуноадъюванта, заключающийся в том, что дезинтегрированные бактерии зкстрагируют водносолевым раствором, экстракт осветляют центрифугированием, осаждают при

35Ъ-ном насыщении сульфатом аммония, отделяют осадок центрифугированием и диалиэуют против исходного буфера.

Однако полученный таким образом препарат наряду с иммуноадъювантными свойствами сохраняет и отрицательные свойства корпускулярной вакцины— токсичность, гистамин-сенсибилиэирующую и реагин-стимулирующую активности.

Цель изобретения — снизить токсичность, гистамин-сенсибилизирующую и реагин-стимулирующую активности.

Это достигается тем, что Фракционирование осуществляют сульфатом стрептомицина или дигидрострептОмицина, полученный осадок растворяют в высокомолекулярном натрий-фосфатном буфере, выделяют вещества с молеку2 лярным весом выше 5 10" и прогревают их при 55-65 С в течение 20-30 мин.

Способ осуществляют следующим образом.

5 Стандартную коклюшную моновакцину без консерванта трижды отмывают пу" тем повторного центрифугирования при

6000 д в течение 15 мин с последующим ресуспендированием в двадцати}О кратном объеме 0,002 М натрий-Фосфатного буфера (рН 7,2). Отмытые клетки механически деэинтегрируют на гидравлическом прессе при нагрузке более

2000 кг/cM, проводя три цикла раза

}5 рушения. Разрушенные клетки экстрагируют 0 002 N натрий"фосфатным буфером (рН 7, 2) иэ расчета 10 мл буфера на 1 r влажной биомассы. Экстракт центрифугируют при 20000/I в те20 чение 45 мин с охлаждением, осадок отбрасывают. К надосадочной. жидкости добавляют сульфат стрептомицина или дигидрострептомицина до конечной концентрации 5000 мкг/мп, выдержива25 ют при 4 С в течение 18 ч, центрифугируют, осадок промывают 0,33 М натрий-фосфатным буФером (рН 7,2) на мембране Владипор (размер пор

8-9 мм) под давлением азота 2 атм.

80 После прохождения через мембрану бу552744

Формула изобретения

Составитель С.Малютина

Редактор M. Дмитриева Техред М. Левицкая, Корректор П. Макаревич

Заказ 4262/5 Тираж 677 Подписное

ЦКИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113g35 Москва, Ж-35 Раушская наб.z д 4 5

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

У fl фера в надмембранную фракцию подают дистиллированную воду, после чего надмембранную фракцию концентрируют, прогревают при 55-65 С в течение 2030 мин и лиофилизируют.

Относительная адъювантная,активность препарата, полученного предлагаемым способом, в 5 раз выше корпускулярной коклюшной вакцины. Для достижения равного иммуноадъювантного эффекта предлагаемого препарата доза может быть снижена s 5 раэ. Токсичность,.гистаМин-сенсибилизирующая и реагин-стимулирукщая активности снижены в 10-.50 раз.

Способ получения растворимого коклюшного иммуноадъюванта путем деэин5 теграции коклюшных бактерий с последующим фракционированием, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью снижения токсичности, гистамин-сенсибилизирующей и реагин-стимулирующей активности, фракционирование осуществляют сульфатом стрептомицина или дигидрострептомицина, полученный осадок растворяют в высокомолекулярном натрийфосфатном буфере, выделяют вещества с молекулярным весом выше 5 10 и прогревают их при 55-65 С в течение 2030 мин.