Среда для дифференциации бактерей из семейства

Среда для дифференциации бактерей из семейства

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

:- М.:. 1

"т. н т+,. г

Ь<.< 3Iс: iл .Лii (») 553287

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистимеских

РЕСПУблик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 29.07.75 (21) 2160222/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет(43) Опубликовано05.04.77.Бюллетень №13

2 (51) М. Кл.

С 12 К 1/06

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 576 81

° 093.31

О "бтикОвания О- -. -- и -1 - 0 -, 7

lo мара дс.-.,й (72) Авторы изобретения

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых Веществ (71) Заявитель 54) СРЕ1У ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИЛЦИИ БАКТЕРИИ

ИЗ CENEACTBA РВЕиДо иаиааасеае и ИЬт оиасеае

) (е,, татин

9,0 -12,0

10,0-10,5

5,0 -30,0

0,03-0,04

Остальное.,1изин

Натрий хпористый

Бромтимоповый синий

Пистиппировачная вода

1,0 -- 1,25

10,0-11„0

rj

10,0-10,5

Изобретение относится к области микробиологии. Оно может применяться дпя определения таксономического положения некоторых важных для народного хозяйства и здравоохранения бактерий. 5

Известна среда для Определения у бактерий наличия декарбоксипазы лизина экстракционным методом (.

Однако на известной питательной среде невозможно одновременно, наряду с выяв- 10

IeHHeM экстракциоиным методом декарООксилазы лизина, регистрировать ферментацню маннитопа и гидролиз желатина.

Белью изобретения явпяетс= устранение этих недостатков. 15

Это достигается,. тем, что среда содержит пептон, дрожжевой экстракт, глюкозу, маннитол, желатин; ь -- лизин, натрий хпористый, бромтимоповый синий и дистилпироВанную Воду В спе дующих количествах (в г/и):

Пептон

Ирожжевой экстоa:;:;æ

Глюкоза

Маннитол 25

Для пр1гготовпения среды последовательно Отвешивают на технических весах все указанные Выше компоненты и растворяют их три по тонином помешивании в 1 л дист:,.ппярован;:ой Воды. Затем рН среды доВод. .": Дс 7,," v:: наливают ее в пробирки по

2 мп, Стерилизацию среды осуществляют о

GB I :I IH H I HHeI lIpH 1 2 1 С B течение

10 ;-,l÷.

Засев предлагаемой среды производят бактер1 ологической петлей используя культуру исс: е, уемых микробов, выращенных на Обшепринятых плотыых питателькых среда : I, 18-24--часовь-.е культуры). Засеянные о

Врос :"д>.и ипкубируют при 37 С в течение

24 -- ; —.с, 1- ез>, ьтаты Выращивания микробов в предлагаемой среде представлены в табл.1.

553287

Таблица 1

Признаки

Изменение в среде

Переход первоначально сине зеленой окраски в желтую (регистрируется визуально после окончания срока выращивания микробов) Ферментация маннитола

Отсутствие желатинизации(уплотнения среды после 2«3 час выдерживания ее при 0-4 С (выявляется визуально после окончания срока выращивания микробов) Гидролиз желатина

Фиолетовая окраска с нингидрином в слое хлороформа (выявляется визуально после экстракции) кадаверина любым известным способом.

Лекарбоксилирование

L -лизина

После окончания срока выращивания микробов, в пробирку со средой последовательно добавляют: 1,0 мл 40% раствора КОН (содержимое встряхивают в течение 1 мин), 2,0 мл хлороформа (содержимое встряхивают 1-2 мин ), 0,5 мл раствора нингидрина в концентрированном диметилсульфоксиде + 1,0 мл ледяной уксусной кислоты + хлороформ до 100,0 мл; раствор нингидрина вводят пипеткой после расслоения жидкостей в слой хлороформа.

Z3

11ля дифференциации бактерий с помощью ные результаты с данными, представленныпредлагаемой среды сопоставляют получен- ми в табл, 2

Таблица 2

"Ключ" к дифференциации бактерий с помощью предлагаемой среды

Признаки

Ферментация маннитола

Гидролиз желатина

Декарбоксилирование

) -лизина

Примечание: "+" — наличие признака; — отсутствие признака, Ниже приведены примеры определения с помощью предлагаемой среды родовой принадлежности бактерий, которые поясняют изобретение.

Пример 1. Определение родовой принадлежности штаммов 5809 и 6375, 55

Согласно паспортным данным, две культуры грамотрицательных бактерий - штамм 5809 и штамм 6375 - выделены от здоровых людей, оксидазопозитивные, обладают активной подвижностью.

Оба штамма посеяны в жидкую среду, содержащую (в граммах на 1 л дистиллированной воды): пептона — 1,0; дрожжевого экстракта - 10,0; глюкозы - 0,1; маннитола - 10,0; желатина - 9,0; поваренной соли - 5,0; лизина - 10,0; бромтимолового синего - 0,03. Посевы инкубируют 24 час о при 37 С. Зарегистрированные изменения среды, вызванные исследуемыми штаммами, представлены в табл. 3.

553287

Таблица 3

Зарегистрированные изменения среды, вызванные исследуемыми культурами

Желатинизация среды при температуре

+4 С

Слой хлороформа после добавления нингидрина

Ивет среды

Штамм бесцветный фиолетовый

5809 синий желтый нет

6375 нет

Таблица 4

Зарегистрированные изменения среды, вызванные исследуемыми культурами

Желатинизация сре- Слой хлороформа после ды при температуре добавления нингидрина

+40С

Штамм

Ивет среды

105 желтый синий бесцветный фиолетовый нет

181 есть

На основании ферментации маннитола (желтый цвет среды), гидролиза желатио на (среда не "застывает" при +4 С) и способности декарбоксилировать лизин (фиолетовая окраска хлороформа после добавления нингидрина) штамм 6375 идентифицирован как представитель рода V 3w о из семейства Vib ionaceae.

На основании неспособности ферментировать маннитол (синий цвет среды) и декарбоксилировать лизин (бесцветная окраска хлороформа после добавления нингидрида), а также наличия гидролиза желатина (отсутствие желатинизации среды при+4 С) штамм 5809 идентифицирован как представитель рода Pseu dornonae из семейства

Pseta3orno adacea е, Пример 2. Определение родовой принадлежности штаммов 181 и IO5.

Штамм 181 получен из Музея живых

На основании ферментации маннитола (желтый цвет среды), наличия гидролиза желатина (среда не "застывает "при +4оС) и неспособности декарбоксилировать лизин (бесцветная окраска хлороформа после добавления нингидрина) штамм IО5, индентифицирован как представитель рода

Лез отоиаб иэ семейства V bvioeaeeae. культур. По паспортным данным, штамм

181 подвижен, оксидазопозитивен, глюкозу ферментирует, но не окисляет, индол не образует.

Штамм 105 выделен иэ воды, подвижен оксидазопозитивен, глюкозу не окисляет, но ферментирует с образованием газа, дает положительную реакцию на индол.

Оба штамма посеяны на жидкую среду, имеющую следующий состав (вграммах на

1 литр дистиллированной воды): пептона1,25; дрожжевого экстракта - 11,0; глюкозы - 0,15; маннитола — 10,0; желатина - 12,0; поваренной соли — 5,0; лизина - 10,0; бромтимолового синего-0,04.

Посевы инкубировали 24 час при 37 С. о

Зарегистрированные изменения среды, вызванные исследуемыми культурами, представлены в табл. 4.

На основании неспособности ферментировать маннитол (синий цвет среды), гидро55 лизовать желатин (желатинизация среды о при +4 С) и наличия декарбоксилазы лизина (фиолетовая окраска хлороформа после добавления нингидрина) штамм 181 идентифицирован как представитель родаРЬее1о60 o

553287

Составитель С. Малютина

Редактор Г. Кузьмина Техред М. Левицкая Корректор A. Лакида

Заказ 180/37 Тираж 582 Подписное

БНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113О35, Москва, Ж-35, Раушская наб., p,. 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Предлагаемая среда обеспечивает быстрое определение таксономического положения (родовую принадлежность) некотс рых важных для народного хозяйства и здравоохранения бактерий — Рэеи,дощонс э, 5

Ч- ьЬто, Оома то па ь, Ает отпоров,Жея овойвь.

При использовании предлагаемой среды время, необходимое для дифференциации бактерий, сокращается вдвое.

Предлагаемая среда легко применима в 10 практике для дифференциации рекомбинатов в генетических исследованиях.

Формула изобретения 15

Среда для дифференциации бактерий из семейства Рэеи.до попа есхоеое и Ч Ъг опо сео е отличающаяся, тем, что, она содержит пептон, дрожжевой экст ракт, глюкозу, маннитол, желатин, (, -aaaaa, натрий хлористый, бромтимоловый синий и дистиллированную воду в следующих количествах (в г/л):

Пептон 1,0-1,25

Дрожжевой экстракт 10,0-11,0

Глюкоза О, 1-0,15

Маннитол 10,0-10,5

Желатин 9,0-12,0

}, пизин 10,0-10,5

Натрий хлористый 5,0-30,0

Бромтимоловый синий 0,03-0,04 дистиллированная вода Остальное.

Инсточники информации, принятые вовнимание при экспертизе:

1,2 Во о1е otogio,71,339, 1956 (прототип).