Краситель для ядра клетки живого организма

Краситель для ядра клетки живого организма

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (») 5533 19 (о1) Дополнительное к авт. саид-ву (22) Заявлено14.05,75 (21) 2134331/05 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 05,04,77 Бюллетень №13 (45) Дата опубликования описания 25.05.77 (51) М, Кл, 1т 06 Р 1/42//

//С 12 К 1/04

Государстввиный намнтет

Соае а Мииистрав СССР па далам изобретений и аткра|тий (53) УДЫ 668.813,1 (088.8) Г. Н, Бондарев, P. И, Куликов и И. А, Захаров (72) Авторы изобретении (71) Заявитель Ленинградский институт ядерной физики им. Б. П. Константинова (54) КРАСИТЕЛЬ ДЛЯ ЯДРА КЛЕТКИ ЖИВОГО ОРГАНИЗМА

СН2- 0Н вЂ” С1

Ы -СН-CH -СН2-Ы-

3-Н Н2 Н2 оСн, -2EC l

Изобретение относится к цитохимии, в частности к применению известного акридинового производства в качестве красителя для ядра клетки, В современной цитологии для окрашива- 5 ния ядра клетки используют акрихин.

Однако при использовании акрихина окрашенные препараты под воздействием ультрафиолетовых лучей, а также при хранении и работе с ними под люминесцентным мик- 10 роскопом быстро выцветают. Это объясОднако зто вещество токсично.

Цель изобретения — получение малоток» сичного и устойчивого к действию ультраняется тем, что связи аркидиного кольца и аминогрупп с хроматином ядра слабые.

Стойкость препарата, окрашенного с помощью акрихина, к действию ультрафиолетовых лучей — 3 минуты. 9то значительно усложняет работу исследователя. Кроме того. ðàcòâîð акрихина обладает заметной токсичностью, В современной цитологии для окрашивания ядра клетки используют акрихин— иприт обшей формулы фиолетового излучения вещества, обладающего KpBGHIILHMH свойствами по отношению к ядру клетки живого организма.

553319

100

Акрихин

100

Акрихин — иприт

ЭСЯ-170 -(Oh) 15

60

Пример, В качестве примера рассмотрим окрашивание клеток буккального эпителя для выявления 3 — хроматина у человека.

Клетки буккального эпителя из полости рта (мс- KHo использовать клетки любых ор- 4Q ганов) металлическим шпателем наносятся на покровное стекло и высушиваются, Материал Фиксируется в метиловом спирте в течение 2 мин, далее проводится через ряд растворов спиртов понижающейся кон- 45 центрации (96% 60%, 30%) по 30 сек в каждом, выдерживается 15 сек в воде и 15 мин в питратно — фосфатном буфере рН = 6,8 (0,1 М раствор лимонной кислоты и 0,2 Я раствор двузамешенного фос- 50 форнокислого натрия). Затем материал окрашивается в течение 5-10 мин в растворе красите,".я (5 мг растворяются в 0,5 мл воды + 2 г хлористого натрия + 100 мл цитратно-фосфатного буфера) споласкивается 55 в вс7е и отмывается 2-4 мин в буфере рН6,8. .осле этого препарат заключается в воду или в смесь воды с глицерином. Под люминесцентным микроскопом МЛ-2Б (объектив 90х125 МИЛ, фильтры ФС1 и ЖС17 +

2-Метокси- 6 хлор — 9 амино — N

-3 — ампно пропил — Я вЂ” этил 14 — (2I I

-гидр оксиэтил) — акридиндигидрохлорид, используемый ранее в качестве мутагена, пригоден для этой цели.

Применение ДЩ - 170 — (ОН) в качестве красителя позволяет работать с окрашенным препаратом в течение нескольких недель и повышает устойчивость последне.-го к действию ультрафиолетовых лучей, Токго обозначаемый 3C A — 1 70 — (ОН) обшей формулы сичностьдИ- 170 — (ОН) как красителя значительно ниже токсичности акрихин— иприта и акрихина.

Данные по токсичности веществ, применяемых для окрашивания препаратов и устойчивость их к действию ультрафиолетовых лучей сведены в табл: с:,у.

+ЖЗС18, лампа ДРШ 250, масло нефлюоресцирующее) наблюдаются клетки с неяркой флюоресценцией цитоплазмы, ядра флюоресцирующие желто-зеленым светом (ярче цитоплазмы) и ярко флюоресцирующие бело — зеленым светом участки Ф-хроматина н ядре клетки. Самый крупный ярко флюоресцирующий участок ядра клетки мужчин соответствует J -хроматину.

Рассмотренный метод применяется в различных областях здравоохранения: в педиатрии для диагностики аномалий половых хромосом новорожденных, в акушерстве для определения пола плода, в цитогенетике человека, в криминалистике для определения пола клеточного материала.

Данный пример поясняет, но не ограничивает изобретение, Предлагаемое в качестве люминисцентного красителя вещество DC -1 70- (ОН) может применяться практически для окрашивания любой клетки живого организма и растения. Специфичность его выявляется при окрашивании клеток, ядра которых обладают участками ярко флюоресцирующего хроматина: клеток человека, клеток гориллы и других обезьян, 553319

Составитель A. Молин

Техред М. Левицкая Корректор А. Лакид.<."едактор Е. Меньшова

Заказ 182/37 Тираж 572 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгорол, ул, Проектная, 4 клеток фасоли (Tioia Уо Ъа ), клеток дрозофилы и др.

Использование предлагаемого вещества

АССР -170-(OH) для окрашивания ядра клеч ки повышает устойчивость окрашенного пр парата к действию ультрафиолетовых лучей в 5 раз, а его токсичность снижается в

4 раза. формула изобретения

Ф

Применение 2 — метокси — 6 - хлор9 — амино — N - 3 - аминопропил— этил — К - (2-гидроксиэтил)— (1

-акридиндигидрохлорида общей формулы, СН вЂ” СН

ЯН-ОН -СН -CH -N

СН вЂ” СН -ОН

2 7, ОСН

-2HcO в качестве красителя для ядра клетки живого организма,