Штамм n710 - , используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков

Штамм n710 - , используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

3 (О П И С А Н И Е „„ббб а3

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 23.09.75 (21) 2178543/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 25.04.77, Бюллетень № 15 (45) Дата опубликования описания 31.05.77 (51) М. Кл, С 12 К 1/02

А 23 С 9/12

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам изооретений и открытий (ьз) дк

663.13 (088.8) (72) Авторы изобретения А. В. Гудков, А. Н. Сельсков, Ю. К. Фомичев и В. М. Докукин

Белорусский государственный университет им. В. И. Ленина и Всесоюзный научно-исследовательский институт маслодельной и сыродельной промышленности (71) Заявители (54) ШТАММ STREPTQCQCCUS (ACTiS ¹ 7104 — $, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ

ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ БАКТЕРИОФАГОВ МОЛОЧНО-КИСЛЫХ СТРЕПТОКОККОВ

Изобре гение относится к производству молочнокислых продуктов и представляет собой новый штамм молочнокислых стрептококков, используемый для выявления бактериофагов.

Одним из средств повышения эффективности производства кисломолочных продуктов является применение мер борьбы с бактериофагами молочнокислых стрептококков, эффективность которых в значительной степени зависит от того, насколько сВос>. ременно и полно выявляется инфицирование производства бактериофагами. Определение бактериофагов возможно лишь при наличии штаммов молочнокислых стрептококков, обладающих чувст. вительностью к бактериофагам, распространенным па предприятиях молочной промышленности.

Культуры молочнокислых стрептококков, применяемые для определения бактериофагов, должны обладать чувствительностью к возможно большему количеству фагов.

Известны различные штаммы из рода Strepto

coccus, используемые для выявления бактериофагов определенных видов (1) .

Однако они имеют невысокую чувствительность к бактериофагам молочнокислых стрептококкови неустойчивы к стрептомицину.

Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего большей чувствительностью к бактериофагам молочнокислых стрептококков и устойчивого к стрептомицину.

Штамм Streptococcus lactis N 710 «5 получен путем выращивания в стрептомицинсодержащей среде дикого штамма Streptococcus I act is 710, выделенного из самоквасной сметаны с последующим облучением ультрафиолетовыми лучами и

1О отбором стрептомицинрезистентных мутантов.

Штамм Streptococcus 1actis 14 7104 — S отличается от известных штаммов молочнокислых стрептококков по набору лизирующих фагов (фаготипу),стрептомицинрезистентности и характеру

1б негативных колоний, которые образуют бактериофаги при совместном с ним культивировании.

Штамм Streptococcus lactis N 7104 — S хранится в коллекции Всесоюзного научно-исследовательского института маслодельной и сыродельной

gp промышленности.

Морфологические признаки. Величина клеток суточной культуры на агаре из гидролизованного молока 0,9-1 мкм. Форма клеток слегка эллипсоидная. Цепочки клеток короткие — из трех, четырех клеток.

555133

Физиологические признаки. Органическая среда. В бульоне из гидролизованного молока в стадии интенсивного роста образует равномерную густую взвесь. Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим осадком в виде комочков.

При взбалтывании осадок легко взмучивается.

При пересеве 18 - часовой бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1 об % наблюдается lag — фаза 30 — 40 мин.

Максимальная концентрация клеток 6 — 8.10 клеток /мл достигается за 7 час инкубирования при

30 С.

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ЕД/мл.

Припосевев молоко 1% 18-часовой бульонной культуры сгусток образуется за 11 — 12 час.

Сгусток плотный, равномерный, колющейся консистенции.

Слабый рост по линии укола. разжижения среды нет.

При посеве на агар из гидролизованного молока в чашке Петри через 2 дня образуются круглые, гладкие, белые, блестящие, выпуклые колонии размером 1„2-1,5 мм.

Отношение к углеводам. Сбраживает глюкозу,галактозу, лактозу, мальтозу с образованием кислоты. Сахарозу и маннит не сбраживает.

При изучении чувствительности штамма Streptococcus lactis и 7104 — $ к 52 вирулентным бактериофагам молочнокислых стрептококков установлено, что новый штамм чувствителен к двум (51,52) бактериофагам, встречающимся в природе.

Выявление фагов с помощью штамма Streptococcus lactis и 7104 — $ проводится следующим образом.

Отбор проб. Пробу молока отбирают в стерильную посуду, подогревают до 40 С и в молоко добавляют 10%-ную молочную кислоту до образования хлопьев белка, после чего фильтруют через стерильный ватный или бумажный фильтр. В полученный фильтрат добавляют 1 об% раствора стрептомицина с концентрацией 20000 ЕД/Мл.

Сыворотка, закваска, вода, рассол. Пробу сьворотки, закваски, воды и рассола отбирают в стерильную посуду и фильтруют через стерильный ватный или бумажный фильтр. Затем, если сыворотка или закваска сохранила мутность, к ним добавляют 10 o-ную молочную кислоту до образования хлопьев белка и вновь фильтруют через стерильный ватный или бумажный фильтр, В полученный фильтрат вносится 1 об. % раствора стрептомицина (20000 ЕД/мл) .

Навеску сыра около 1 r растирают в стерильной ступке, добавляют 20 мл подогретой до 45 С стерильной воды. Полученная сырная суспензия фильтруется через ватный или бумажный фильтр, и в фильтрат вносится 1 об% раствора стрептомицина (20000 ЕД/мл) .

Пробы с посуды, аппаратуры, оборудования, инвентаря и в помещении берут с помощью сухих стерильных ватных тампонов, которые закреплены на деревянных палочках и помещены в пробирки, закрытые ватными пробками. Тампоном тщательно протирают в нескольких местах поверхность исследуемого объекта. Тампон помещают обратно в пробирку, которая хранится до исследования на холоду, При исследовании тампон споласкивается в течение 1 — 2 мин в 10 мл стерильного бульона из гидролизованного молока со стрептомицином в концентрации 200 ЕД/мл.

Отобранные для выявления фагов пробы хранят при 4 С не более 6 час.

Подготовка газонов штамма Streptococcus lac.tis и 710 — S . В чашки Петри разливают по

25 — 30 мл 1,5 - ного агара из гидролизованного молока с 200 ЕД/мл стрептомицина. После застывания агара чашки подсушивают в течение 3 — 4час. В пробирки предварительно разливают по 2 мл

0,6 ного агара из гидролизованного молока с

200ЕД/мл стрептомицина. Перед использованием пробирки подогревают в водяной бане при 100 С до расплавления агара и затем охлаждают до 45оС.

Затем в каждую пробирку вносят по 0,5 мл 18-часовой культуры Streptococcus lactis и 7104 — $, и содержимое каждой пробирки выливают на поверхность 1,5%-ного arapa в чашке Петри, равномерно распределяют и выдерживают до застывания верхнего слоя 0,6 o-ного агара с культурой.

На застывший верхний слой наносят капли испытуемых проб. На одной чашке одновременно испытьвают четыре пробы, для чего чашку делят на четыре сектора и в каждый сектор помещают по одной капле из различных проб. После подсыхания капель чашки инкубируют в термостате при 30 С

18 — 24 час.

Учет результатов проводят следующим образом.

Засеянные методом двойного слоя бактерии образуют равномерный мутный газон.

Если на месте нанесения капель образуется прозрачное пятно или мелкие прозрачные пятнышки, то это свидетельствует о том, что в данной пробе содержится бактериофаг, активный против штамма Streptococcus lactis и 7104- S . В случае, если на месте нанесения капли образуется такой же газон, как и на всей чашке, то бактериофагов, лизирующих штамм Streptococcus lactis М 7104 — S, в испытуемой пробе нет. б

19

1б

И

Формула изобретения

Штамм Streptococcus lactis N 7104 — S, используемый для выявления бактериофагов молочнокислых стрептококков, хранится в коллекции

Всесоюзного научно — исследовательского института маслодельной и сыродельной промышленности, Морфологические признаки. Величина клеток суточной культуры на агаре из гидролизованного молока 0,9 — 1 мкм. Форма клеток слегка эллип555133

Составитель А. Бражникова

ТехРед Г. Родак Корректор A. Лакида

Редактор А. Бер

Заказ 418/13

Тираж 582 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 соидная. Цепочки клеток короткие — из трех, четырех клеток.

Физиологические признаки. Органическая среда. В бульоне из гидролизованного молока в стадии интенсивного роста образует равномерную густую взвесь. Суточная бульонная культура равномерно мутная с небольшим осадком в виде комочков.

При взбалтывиии осадок легко взмучивается.

При пересеве 18 — часовой бульонной культуры в свежий бульон из гидролизованного молока в количестве 1 об.% наблюдается laa - фаза 30:

40 мин. Максимальная концентрация клеток

6 — 8 10 клеток/мл достигается за 7 часов инкубиа рования при 30 С.

Способность к росту сохраняется при концентрации стрептомицина в бульоне до 1000 ЕД/мп.

При посеве в молоко 1% 18 — часовой бульонной культуры сгусток образуется за 11 — 12 час.

Сгусток плотный, равномерный, колющейся консистенции.

Слабый рост по линии укола. Разжижения среды нет.

При посеве на агар из гидролизованного молока в чашке Петри через два дня образуются круглые, гладкие, белые, блестящие, выпуклые колонии

1,2 — 1,5 мм.

Отношение к углеводам. Сбраживают глюкозу, галактозу, лактозу, мальтозу, с образованием кислоты.

Сахарозу и маннит не сбраживает.

Чувствителен к двум бактериофагам молочнокислых стрептококков, встречающихся в природе.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Труды Литовского филиала ВНИИ маслодельной и сыродельной промышленности, 1973 г., т.

8, с. 169 — 172 (прототип) ..