Штамм lертоsрirа canicola вгнки-3
Патент 555666
Авторы
Штамм lертоsрirа canicola вгнки-3
Иллюстрации
Реферат
О С НИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Соцналистнческих
Республик
<>555666
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свыд-ву (22) Заявлено 30 ° 01. 76 (21) 2321227/15, с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет
Р М К з
A 61 К 39/00
С 12 и 1/00
Государственный комитет
СССР по делам изобретений н открытий
Опубликовано 30 01 83 Бюллетень № 4
Дата опубликования описания 30 ° 01. 83
РЗ1УДК 616. 986. 7 (088 ° 8) Ю.A. Малахов, A.Ï. Самохвалов, В.С. Соловьева, И.Г. Серегин, A.Н. Щуплико и Н.М.,Иванова (72) Авторы изобретения
Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов (71) Заявитель (54 ) ШТАММ LEPT0SP I RA CAN I COLA ВГНКИ-3
Изобретение относится к производству ветеринарных биологичЕских препаратов и представляет собой, новый штамм Leptosp i ra Can i co l a, испоФ льзуемый для приготовления вакцин против лептоспироэа сельскохозяйственных и проьисловых животных.
Высокая иммуногенная активность штаммов лептоспир, из которых изготавливается вакцина, является одним иэ основных условий, обеспечивающих получение активной вакцины про- тив лептоспироэа животных. В настоящее время в ветеринарной биологической проьышленности изготавливают убитую вакцину против лептоспироэа из 24-39 штаммов лептоспир, относящихся к 6 серологическим группам, в том числе содержащую 4 штамма серологической группы Canicola 513.
Однако зти штаммом имеют низкую . иммуногенную активность, получение вакцины трудоемко, так как требует использования баллонного метода выращивания лептоспир.
Цель изобретения — получение штамма леатоспир серологической группы
Cani
Штамм Leptosp i ãà can i cola ВГНКИ-3 выделен от свиньи в Московской области в 1973 году и хранится в коллекции микроорганизмов ВГНКИ ветпрепаратов МСХ СССР под Р 3. Штамм тп Leptosp i ra сап cola ВГНКИ-3 характеризуется сдедующими признаками.
Морфологические признаки. Обладает характерными для лептоспнр морфологическими признаками. При микроскопии в темном поле представляет собой серебристо-белые плотные спирали с утолщениями в виде крючков на концах. Витки спирали незаметны при увеличении в 200-400 раз, но
20 хорошо видны в электронный микроскоп.
Длина лептоспир 8-17 мк, диаметр
0,1-0,15 мк. Наиболее отчетливо видны лептоспиры при микроскопии н темном поле и менее отчетливо — при фаэово-контрастной микроскопии, невидимы при обычном освещении, плохо окрашиваются анилиновыми красками, при импрегнированни серебром становятся темно-коричневыми.
Физиологические свойства. Рост на среде, содержащей 4-5% сыворотки
555ббб баранов или кроликов с фосфатнобуферной основой при рН 7,2-7,4.
Максимум роста при .26 27 С. На 510 день роста накопление 10х10616 10 лептоспир в 1 мл. В последуюЬ щие сроки роста происходит лиэис бактери альных клеток. В жидкой среде они подвижны, у них характерное быстрое ротационное движение вокруг оси и перемещение беэ полярной дифференциации.
Антигенные свойства. Штамм Leptospi га can i cola ВГНКИ-3 сравнивали но . антигенным свойствам со смесью про10
Таблица 1
Дни и сследов ани я, по сле
Наименование штаммов первой вакцинации второй вакцинации
28 56 92
Can i col а ВГНКИ-3
1г120
1:320 1:640
Смесь: Неман, Нимфа, Дания, Собака
1:40
1:80. 1:240
1:40
1:10 0
Антигенные свойства изучали также в опыте на кроликах. Семидневную культуру,лептоспир доводили сывороточной средой до концентрации 75000 35 лептоспир в 1 мл, консервировали фенолом до 0,5Ъ концентрации и вводили четырем кроликам весом 2,5 кг внутривенно по 1 мл. Через 7, 14, 21 и 28 дней после введения культуры 4п у кроликов брали кровь и исследовали сыворотку в реакции микроагглютинации лиэиса. При этом сравниваТаблица 2
Титр антител в сыворотке крови кроликОв
Наименование штаммов дни после вакцинации
1!2500+500
1:250+50
1: 830+170
Can i со1а ВГНКИ-3
1:830+170
1:250+50
1:83+15
Как видно из таблиц 1 и 2, штамм
Leptosp i ra Cani col a ВГНКИ-3 отличается от смеси производственных штаммов более активными антигенными свой ствами, 65
Смесь: Неман, Нимфа, Дания, Собака иэводственных штаммов: Неман, Нимфа, Дания, Собака в опыте на овцах.
Семидневную культуру лептоспир консервировали 0,5% фенола и вводили овцам внутримышечно в дозе 5,0+
5,0 мл двукратно с интервалом 7 и
21 день. При этом установили, что антигенные свойства штамма Leptospiãà canicolа ВГНКИ-3 в 3-4 раза выше, чем антигенные свойства смеси производственных штаммов.
Результаты опыта приведены в табл. 1.
1:120 1:40 1:10 ли титр антител кроликов, которым вводили культуру штамма ерйоэр ra
cani cola ВГНКИ-3 и смесь производственных штаммов: Неман, Нимфа, Дания, Собака. Установлено, что антигенная активность смеси производственных штаммов в 3-4 раза ниже антигенной активности штамма Leptospi ra canfcola
ВГНКИ-3.
Результаты опыта приведены в табл. 2.
Из шести селекционированных штам.мов лептоспир, в том числе Leptosplra Can i со1а .ВГНКИ-З, была приготовлены опытные серии поливалентной вакцины, иммуногенные свойства которой
555666
Формула изобретения
Редактор Е. Хейфиц Техред N.Êîøòóðà
Корректор Л. Бокшан
Заказ 10825/10 Тираж 711 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Филиал IIIIII "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4 изучали на сельскохозяйственных животных в сравнении с вакциной, приготовленной нз смеси производственных штаммов. Установлено, что вакцина, изготовленная из шести селекционированнык штаммов, содержащая в том числе штамм Canicola ВГНКИ-3, создает в 2-5 раз более напряженный иммунитет, чем вакцина, приготовленная из смеси производственных штаммов лептоспир.
Использование предлагаемого штамма вместо применяемых в настоящее время 4 штаммов лептоспир дает также возможность заменить при изготовлении вакцины крайне трудоемкий 15 баллонный метод выращивания лептоспир {в 10-12 литровых объемах) реакторным методом.вырашивания (в объеме
1-2 тыс.л), что значительно упрощает и удешевляет изготовление вакцины. 2{) Штамм i.eptospira Caniсо1а ВГНКИ-З, 25 используемый для приготовления вакцин.против лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных.
Хранится в коллекции микроорганизмов
Всесоюзного государственного научноконтрольного института ветеринарных препаратов.
Морфологические признаки. При микроскопии в темном поле представляет. собой серебристо-белые плотные спирали с утолщениями в виде крючков на концах. Витки спирали незаметны при увеличении в 200-400 раз и хорошо видны в электронный микроскоп. Длина лентоспир 8-17 мк, ди.аметр 0,1-0,15 мк. Наиболее:хорошо видны лептоспиры при микроскопии в темном поле и менее отчетливо— при фазово-контрастной микроскопии, невидимы при обычном освещении. Плохо окрашиваются анилиновыми краска мн. При импрегнирований серебром становятся темно»коричневыми.
Физиологические свойства. Растет на среде, содержащей 4-5% сыворотки барабанов или кроликов на фосфатно-буферной основе при рН 7,27,4. Максимум роста при 26-27ОС. На
5-10 день роста накопление 10 10
Ь
16к106 лептоспир в 1 ьщ. В последующие сроки роста наступает лизис бактериальных клеток. В жидкой среде клетки очень подвижны, у них характерное быстрое ротационное движение вокруг оси и перемещение беэ поляр-, ной дифференциации.
Антигенные свойства. Антигенные свойства штамма Can i cola ВГНКИ-3 в
3-4 раза выше, чем антигенные свой-. ства смеси производственных штаммов серогруппы Can i col а: Неман, Нимфа, Дания, Собака {опыты на овцах и кроликах ) ..
Иммуногенная активность. Поливалентная вакцина, изготовленная из данного штамма с использованием пяти других селекционированных штаммов, имела в 2-5 раз выше иммуногенную активность, чем вакцина, приготовленная из 39-.производственйых штаммов лептоспир..
Источники информации принятые во внимание при экспертизе
1. Инструкция по изготовлению и контролю поливалентной вакцины llpoтив лептоспироза сельскохозяйственных и промысловых животных. Утверждена Главветупром МСХ СССР 27 мая
1968, с. 6.