Способ получения глюкоамилазы

Способ получения глюкоамилазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

(ii) 556173

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ .

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 21.09.73 (21) 1960135/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Оп1бликовапо 30,04.77. Бюллетень № 16 (51) М. Кл. С 120 13/10

Государственный комитет

Совета Министров СССР

Во делам иаооретений и открытии (53) УДК 577.15.563.1 (088.8) Дата опубликования описания 29.0G.77 (72) Авторы нзобр стенич

Иностранцы

Хайнц Руттлофф, Альфред Тойфель, Фритц Циклер, Гюнтер Купке, Фридрих Ширбаум, Манфред Рихтер, Йоханн Хубер и Клаус Ридель (ГДР) Иностранная фирма

«Форшунгсинститут фюр ди Гэруигсиидустри Энцимологи унд

Технише Микробиологи» (ГДР) (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕН ИЯ ГЛЮКОАМИЛАЗЫ

Изобретение относится к способам получе.ния глюкоамилазы, используемой при ферментативном превращении крахмала.

Известен способ получения глюкоамилазы, предусматривающий культивирование Endomycopsis bispora на производственной питательной среде, содержащей обезжиренные соевые бобы, крахмал и бифосфат калия (1).

Получаемый таким способом фермент имеет невысокую активность, а сам процесс его получения длителен.

Ближайшим решением к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является известный способ получения глюкоамилазы, предусматривающий культивирование Endomycopsis bispora на производственной среде, содержащей крахмал, кукурузный экстракт и фосфорнокислый калий (2).

Но процесс культивирования фермента по указанному способу длителен, а его выход невысок, При культивировании в течение четырех суток получают глюкоамилазу активностью с 70 — 80 IE/ìë (международных ед/мл) фильтрата, а после 5 — 6 суток повышения активности не наблюдается.

Цель изобретения — повышение активности фермента и сокращение продолжительности процесса.

Для этого по предлагаемому способу получения глюкоамилазы, предусматривающему культивирование Endomycopsis bispora на производственной питательной среде, содержащей крахмал, кукурузный экстракт и фосфорнокислый калий, указанную производственную питательную среду перед началом культивирования вносят токоферолсодержащее вещество в количестве 500 — 2000 мг/г, преимущественно 500 — 1000 мг/г, а культивирование осуществляют при расходе 1,0 — 1,4 л воздуха в 1 мин.

Способ осуществляют следующим образом.

На производственной питательной среде, содержащей крахмал, кукурузный экстракт, фосфорнокислый калий и токоферолсодержащее вещество, в качесгве которого используют от 0,5 до 5,0% растительного масла или животного жира, например рисовое, рапсовое, 2О кукурузное или соевое масло, свиное сало или рыбий жир, культивируют Endomycopsis bis.pora. Токоферолсодержащее вещество вносят в производственную питательную среду перед началом культивирования в количестве

25 500 — 2000 мг/г, преимущественно 500—

1000 мг/г, а культивирование осуществляют при расходе 1,0 — 1,4 л воздуха,в минуту.

Пример 1. На четырехнедельной культуре косого агара по Викерхаму от Endomycop556173

Т аб лица 1

Активность глюкоамилазы, IE/ìë

Длительность культивирования, добавка Зо; рапсового масла без определяемого перекисного числа добавка Зо . рапсового масла с перекисным числом 0,7 добавка Зу, рапсового масла с перекисным числом 1,6 контроль дни

46,7

112,8

185,2

30,0

38,0

48,0

28,0

62,2

84,4

29,5

61,8

88,2

Таблица 2

Активность глюкоамилазы, 1E/ìë

Длительность культивирования, дни

23

71

103

158

209

225

1,0

2,0

3,0

4,0

5,0

6,0

6,5

sis bispora получают 3 — 4 мл затравочной суспензии (физиологический раствор поваренной соли); 0,5 — 1,0 мл этого раствора добавляют к 20 мл среды по Викерхаму. Инкубируют

48 — 72 час при 25 С 1 мл этой суспензии, переводят ее в качалочную колбу объемом

500 мл, в которой находится 100 мл доведенной до рН 5,0 водной суспензии, содержащей (/е): жидкий кукурузный экстракт 2,0 (50 /О сухого вещества); КНяРО 0,5 и кукурузный крахмал 1,0, и 24 час при 25 С встряхивают при 200 об/мин. Затем 1 мл этой культуры,B форме мицелия переносят в качалочную колбу объемом 500 мл, в которую предварительно помещают при рН 5,0 100 мл водной суспензии, содержащей (O ): жидкий кукурузный экстракт 2,0; рапсовое масло 3,0; кукурузный крахмал 1,0; КНяРО4 0,5 и .встряхивают в течение 5 дней при 200 oo/ìèí.

Пример 4. На восьминедельной культуре косого агара Endomycopsis bispora при помощи петли переводят мицелий, размером около 1 мм, в среду по Викерхаму (20 мл) и инкубируют 100 ч при 25 С.

Образующуюся суспензию мицелия переводят в круглодонную колбу объемом 2 мл с

400 мл питательной среды, содержащей (о/о): кукурузный крахмал 1,0; кукурузный экстракт

1,0; КН РО 0,5, и при рН 5,0 инкубируют 24 ч при 28 С на качающемся столе. ,Затем содержимое колбы используют для затравливания 20 л производственной пита40

4

Активность глюкоамилазы при культивировании в течение 3 дней составляет 101,5

I Е/мл, в течение 4 дней — 159,4 IE/ìë.

П р и м е,р 2. Процесс осуществляют по методике примера 1, за исключением того, что в производственную питательную среду вносят

3 /о свежего масличного жмыха от производства кукурузного масла.

Активность глюкоамилазы при культивировании в течение 4 дней составляет 118,5 IE/мл, в течение 5 дней — 158,5 IE/ìë.

Пример 3. Процесс осуществляют по методике примера 1, за исключением того, что в производственную питательную среду вносят 3 /о рапсового масла без определяемого перекисного числа и для сравнения — добавку рапсовых масел с перекисными числами 0,7 и

1,6.

Результаты испытаний приведены в табл. 1. тельной среды в стеклянном ферментационном сосуде.

Производственная питательная среда содержит (% ): жидкий кукурузный экстракт 1,0; крахмал 1,0; рапсовое масло 1,0; КНяРО4 0,5. рН среды 5,3, температура 30 С, аэрация 1: 1 (спаренная мешалка — 340 об/мин).

Результаты испытаний приведены в табл.2.

Прим ер 5. Процесс осуществляют по методике примера 1, но в производственную питательную среду вносят 3% свиного сала с добавкой 1000 мг токоферола на 1 г жира.

Активность глюкоамилазы при культивировании в течение 3 дней составляет 73IE/мл, 4 дней — 110 IE/мл, 5 дней — 162 IE/мл.

П р и м ер б. Процесс осуществляют по методике примера 1, но в производственную питательную среду вносят 3% рыбьего жира (тунца, макрели) с добавкой 500 мг токоферола,на 1 кг жира.

Результаты испытаний приведены в табл. 3.

Пример 7. Восьминедельную культуру

Endomycopsis bispora,:BûðàùåíHóþ на косом агаре, при помощи петли переносят в одномиллиметровую грибницу в 20 мл среды по

Викерхаму и инкубируют 100 час при 25 С.

Образовавшуюся суспензию переносят в двухлитровую круглодонную колбу с 400 мл питательной среды, содержащей (% ): куку556173

Таблица 3

Таблица 4

Активность глюкоамилазы, 1Е/мл

Активность гпюкоамилазы, IE/ìë

Длительность культивирования, Длительность культивиро5 вания, дни с добавкой Зо, рыбьего жира и 500 r токоферола на 1 г жира без добавки рапсового м ас,па с добавкой 1; рапсового масла с добавкой

Зо рыбьего жира дни

38,0

48,0

112,8

185,2

52

59

54

77

151

Формула изобретения

Составитель А. Бражникова

Редактор Н. Хубларова Техред М, Семенов Корректор Л. Денискина

Заказ 112i/7 Изд. № 421 Тираж 560 Подписное

Ц11ИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунов:ч 2 рузная вода набухания 1,0; кукурузный крахмал 1,0; КН РО4 0,5. Инкубируют (при рН

5,0) 24 ч при 28 С,на .вибрационном столе, после чего содержимое колбы инокулируют в 20 л производственной среды, содержащей (%): кукурузная вода,набухания 2,0; кукурузный крахмал 1,0; КНяР04 0,5, при рН 5,0.

Перед началом ферментации добавляют 1% рапсового масла в качестве токоферолсодержащего вещества (950 мг токоферола на 1 г масла), для чего используют стеклянный прибор. Ферментацию проводят при 30 С, аэрации в ходе фазы роста грибницы — до 24 ч ферментации — 1: 1 (20 л воздуха в 1 мин) и затем 1,0:0,5 до 0,8 (10 — 16 л воздуха в

1 мин) iHB сдвоенной мешалке.

Результаты испытаний приведены в табл. 4.

Описываемый способ получения глюкоамилазы по сравнению с известным обеспечивает повышение активности фермента при сокращении продолжительности процесса в 1,5—

3,0 раза.

Способ получения глюкоа мил азы, предусматривающий культивирование Endomycopsis hispora на производственной питательной

20 среде, содержащей крахмал, кукурузный экстракт, и фосфорнокислый калий, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью повышения активности фермен га и сокращения продолжительности процесса, в производственную

25 питательную среду перед началом культивирования вносят токоферолсодержащее вещество — 500 — 2000 мг/г, преимущественно

500 — 1000 мг/г, а культивирование осуществляют при расходе 1,0 — 1,4 л воздуха в 1 мин.

30 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Патент Франции Ха 1380854, кл. С 12D, 1965.

2, Патент ГДР Мя 60536, кл. 6 а 22/04, 35 1969 (прототип).