Способ получения межклеточной среды

Способ получения межклеточной среды

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

пи 559954

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕПЬСТВУ

Вевв Свввтсних

Свциапистичеснин

Рввттубпин (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.09.74 (21) 2059452/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.05.77. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 28.06.77 б (51) аЧ. Кл.- еС 12К 9/00

Гвсударстеенный комитет

Совета Министров СССР па делам изобретений и втнрытий (53) УДК 612.014(088 8) (72) Лвторы изобретения

М. В. Голованов и И. П. Терещенко

Московский научно-исследовательский онкологическиЙ институт им. П. А. Герцена (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕЖКЛЕТОЧНОЙ СРЕДЫ

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в процессе проведения гистологических, цитологическпх, иммунологических и других медикобиологических исследований.

Известен способ получения межклеточной среды, заключающийся в рассечении ткани на отдельные кусочки и помещении ее в среду и механическом воздействии соударенпем отдельных кусочков между собой путем качания емкости (1).

Однако известный способ не обеспечивает сохранения натпвных свойств межклеточной среды, Целью изобретения является сохранение нативных свойств межклеточной среды.

Эта цель достигается тем, что кусочки ткани помещают в физиологический раствор и дезагрегируют активным соударением при температуре от 20 до 40 С, отделяют клетки центрифугированием, удаляют диализом хлористый натрий и концентрируют полученную межклеточную среду лиофилизацией.

Способ осуществляют следующим образом.

Извлекают из забитого животного орган (печень, селезенку, лимфатические узлы) или ткань (опухоль и другие) и помещают в стакан с физиологическим раствором. От органа или ткани отделяют волокнистую капсулу (оболочку) и вазрезают его бритвой или скальпелем на 5 — 150 кусочков кубической формы объемом 1 — 8 мм . Полученные кусочки ткани промывают физиологическим раствором, трижды наливая и сливая раствор. Промытые кусочкн ткани помещают в рабочий термостатированный сосуд объемом 140—

32000 мм

В сосуд, в котором поддерживают температуру от 20 до 40 С, .наливают 1 — 50 смл физио10 логического раствора. Включают мотор, еращающпй ротор-мешалку, находящуюся в сосуде, со скоростью 100 — 250 об/мин. Дезапрегацию кусочков ткали проводят в течение

1 — 60 мин. Полученную суспензию центрифу15 гируют, и осевшие клетки удаляют. В физиологическом растворе остается только межклеточная среда. Затем удаляют ионы NaC1 (физиологический раствор) путем дпализа.

Оставшуюся межклеточную среду в водном

20 растворе концентрируют (с помощью лиофильной сушки или других приемов) .

Пример. Из забитого животного извлекают селезенку. Готовят образцы ткани кубической формы объемом 8 мм . 10 кусочков

25 ткани помещают в рабочий термостатированный сосуд объемом 4000 ммз при температуре

37 С. Наливают 10 мл физиологического раствора. Включают мотор на 10 мин со скоростью 200 об/мин. После выключения мотора

ЗО жидкость с отделенными клетками и освобож559954

Составитель С. Малютина

Редактор Ю. Комаров Техред И. Карандашова Корректор Т. Добровольская

Заказ 1386/12 Изд. 1Чь 504 Тираж 563 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, 5Ê-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 денной межклеточной средой сливают через фильтр. После центрифугированпя насадочную жидкость очищают от NaC1 и концентрируют.

Предлагаемый способ позволяет получать неограниченные количества межклеточной среды прп сохранении нативных свойств ее компонентов.

Фор м ула изобретения

Способ получения межклеточной среды путем механического воздействия на ткань, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью сохранения нативных свойств межклеточной среды, кусочки ткани помещают в физиологический раствор и дезагрегпруют активным соударени5 ем при температуре от 20 до 40 С, отделяют клетки центрифугпрованием, удаляют диализом хлористый натрий и концентрируют полученную межклеточную среду лиофплизацпей.

Источники информации, принятые во вни10 мание при экспертизе:

1. Cancer Reseach, 1951, 11, 240.