Способ получения фосфолипазы д

Способ получения фосфолипазы д

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

I C y д4трнт

Ф Ай отна MF /

Оп HCAHMГ

Союз Советскин

Социалистических

Республик (11) 56Î614 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено11.02.76 (21) 2324341/13 с присоединением заявки М (23) Приоритет (43) Опубликовано05.06,77. Бюллетень № 21 (45) Дата опубликования описания 20.07.77 (Ч) М. Кл, А 61 К 35/78

С 07 G 7/022

С .12 D 1 3/10 4

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам ызооретенчй и открытый (53) УЛК 5 77. 15 (OP 8,8) (72) Авторы изобретения

М. М, Рахимов, Ill, Р, Мадьяров и А, Х. Абдумяликов

Среднеазиатский нау (Ho-èññëåäîâëòåëüñêHII и проектнскон трукторский институ1 пищевой промышленнос l и (71) Заявитель (51) спОсОБ полу1Рния атос 1олнпАзГ.1 D

900 ) .

Изобретение относится к технической биохимии, а именно к способам получения фосфолипазы 1) и может быть использовано в медицине и -пищевой промышленности.

Известен способ получения фосфолипазы

D,âêëþ÷àþøèé экстракцию белков из семян хлопчатника, осаждение целевого фермента и его адсорбционную очистку из раствора11).

Одна полученная поэто,му способу фосфолипаза D нестабильна в раств орах,с одер- 1о жаших сульфат аммония,и теряет свою каталитическую активность.

С целью повышения выхода и каталитической активности фермента по предлагаемому способу экстракцию белков осуществляют 15 трис-буфером с рН 7-9, при этом адсорбционную очистку проводят на силикагеле.

Концентрации трис-буфера равна 0,01-0,1 М, а раствор имеет концентрацию 0,1-1,0 г/л по белку. 20

Способ заключается в том, ITo экстрак— цию белков проводят трис-буфером концентрацией 0,01-0,1 N, рН 7-9 и адсорбируют фосфолипазу после растворения. Адсор— бцию проводят из разбавленного раствора 25 концентрацией 0,1-1,0 r/л по белку и колличестве силикагеля - 0-120 г/л при

0 — 90 С в течение 1 5 мин — 24 ч.

Г1 р и м е р . 11авеску семян хлопчатника размельчают и экстрагируют десятикря гным объемом 0,1 М трис — буфера, рН

8,H,ãàìoãåíèçèðóþã н отделяют растворимые белки от осадка центрнфугированием.

К недос TQточной жндкocãè добавляют два о. объема охлажденного ацетона (— 10 С) и перемешивают. Образовавшийся осадок от деляют декан тацией, промывают ацетоном и растворяют в воде. 1оводят рН до 6 раствором 1 í. СН СООН и нагревают 15 л< »

3 при 50 С. Выпавший осадок удаляют центрифугированнем (15 мнн прн 1HOOOg).

Разбавляют ряс тв ор О, 1 М яце та тным буфером, рН 5,6 до концентрации 0,1 мг/мл по содержанию белка н к раствору добавляют снликагель КСК 14 2 нз расчете 80 г/л и оставляют инкубироваться не менее 1 5 мин.

Адсорбированную фосфолнпазу т) отделяют от раствора центрифугировт ..:нем (1 0 мнн

Использование предлагаемого способа получечия фосфолипазы 0 повышает выход фосфолипазы g в 1,8-2,5 раза; увеличива" ет каталитическую активность полученного црепарата в 3-6. раз; фосфолипазу 9 получают в адсорбированной на силикагеле не растворимой форме и многократно используют.

1. Способ получения фосфолипазы рключающий экстракцию белков из семян .хлопчатника, осаждение целевого фермента и его адсорбционную очистку иэ раствора, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и каталитической активности фермента, экстракцию белков осуществляют трис-буфером с рН 7-9, при этом адсорбционную очистку проводят на сицикагеле.

2.Способпоп, 1, отличающийс я тем, что концентрация трис-буфера

1О равна 0,01-0,1 М, а раствор имеет концентрацию 0,1-1,0 г/л по белку, Источники информации, принятые во внимание при экспертиэе:

1. Авторское свидетельство % 353725, кл. А 61 К 35/78, 1972.

Составитель T. СеРебРЯнникова

Редактор 1. Гончарова Техред H. Андрейчук Корректор-A. Гриценко

Заказ 132:1/1 22 Тираж 677 П одписн ое

10111111111 Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

1 1, 1Г), 15, Мск.ква, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Финна:i 111!П "11атент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4