Способ разделения биологических жидкостей

Способ разделения биологических жидкостей

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Союз Советскик

Соцмалмстммаскми

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К *ВТОРСКОМУ С еИДИТЙЛЬСТВУ (11> 560т:.)07 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 11.02.76(21) 2325819/13 с присоедииецием заявки № (23) Приоритет(43) Опубликовано 05.06.7 7Втоллетеиь ¹21 (45) Дата опубликования описания 28.09.77 (Ь1) М. Кл.

С 12 К 1/00//

/!С 01 Н 33/16

Гвоудврстееннив комитет

Свввтн Министров СССР оо деиам изобретений н открытий (53) УДК 578. 085. ,1 (088.8) (72) Авторы изобретения

В. В. Каменская, Н. А. Сизова, А. B. Столяров, В. И. @опенков и Л. А-. Куликове

Новосибирский государственный медицинский институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БИОЛОП .ЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ лям (Ц;

Изобретение касается разделения .биологических жидкостей, например„крови, н может быть использовано при исследованиях в медицине, клинической и теоретической биофизики и биохимии. 5

Наиболее близким решением к описываемому изобретению по технической сущности и достигаемому результату является известный способ разделения . биологи» ческих жидкостей путем отбора клеточных !6 частиц по их физико-химическим покаэатеОднако однократное прйменение иэвест ного способе часто не обеспечивает эффек» t5 тивного разделения. Необходимо нспользо» ванне многоступенчатого варианта известного способа, например, противоположног распределения, что является трудоемким повторением процесса распределения частиц. йя

Кроме того, для разделения смеси необходимо встряхивание взвеси, что может отрицательно действовать на свойства и состояние разделяемых биологических частиц. 25

При этом процесс полного разделения на фазы по известному способу длителен и сопровождается образованием труднодносоцируемых комплексов разделенных частиц с полимерами, в связи с чем необходима дополнительное введение этапов отделения частиц от полимеров, Таким обрезом известный способ не обж печивает высокой разрешающей способности и является сложным.

С целью повышения разрешающей способности и упрощения способа исследуемую биологическую жидкость помешают в термостатируемый сосуд, создают температурный градиент и затем отбирают клеточные частицы, локализованные в зоне нагрева.

Способ осуществляют следующим образом. Иссследуемую среду, например, взвесь клеток крови- аритроцитов в растворе пома шают в пробирку, которую в свою очередь помещают в термоститнруемый сосуд, пред ставляющий собой кювету, расположенную и водяной бане.

В исследуемую среду на заданном рас» стоянии от слоя взвеси вводят тепловой

560907

1икрозонл (1 1икротерморэзистор), герметиз»р Ванный В тонком Стеклянном капиляре, что позволяет подвести точечную энерги..1 к системе за cчет достаточно ВысОкОГО зле к ри .. с к01 О Gottð > ивления этих ат«1и 5 к1>в с Одновременной изоляцией их от биологической жидкости посредством стеклянhOÉ ОбОЛОЧКИ. . С помощью микротерморезистора создают температурный Градиент путем подачи к н1 1 у постоянно.o тока мо костью около

30 мвт при этом локальная температура на 4-" С больше температуры >кружающей средьt.

Возбуждаемые в исследуемой биологической жидкости конвективные потоки :. увлекают более легкие частицы в область меньшей плтиости в зоне микротерморезистора, при этом в последней*образуется характерное "облако иэ клеток с меньшей плотностью, регистрируемое визуально. Оптический эффект усиливается благодаря поме . шению пробирки в термостатируемый сосуд. а также гладкой поверхности клеток с меньшей плотностью, 25

Через 1-2 мин Отделившиеся От основ ной взвеси клетки, локализованнь.е в зс ие нагрева, отбирают микропипеткой и переносят в приготовленную для них емкость.

Lfалее через несколько секунл наблюдают 30 образование следующего "облака" клеток. крови,. плотность которых несколько больше ч«.м плотность клеток первого "облака и ,т. д.

П р и м е p . Пробирку Видаля ОбьемОм 35

1,5 мл нанолняют буферной смесью. Состав б;;ч1>ерной смеси: 3 -t.физиОлогического pscT вора и " ч..калий=фосфатного буфера 1/15 М, рЛ 7,.2:-- 7«4. Б эту смесь вносят

0 у;, >1 сус1 еизии oT . ы "ых эритропитов. «g

Пробирку погружают в стекляину э водяну>о баню л 1я дости кения режима постоянной температуры микротерморезистора (тецлового мигрозонда). После осаждения эритроцитов в пробирку погружают ми Ч>отерморе- 45 зистор типа MT-54 или МТ-.64, конструкции Б. Г. Карманова на глубину 2-3 мм

or поверхности слоя эь.1троцитэв. Включают мостовую схему, в измерительное плечо которой присоединен микротерморезистор и последовательно с ним миллиамперметр, контролирующий ток микротерморсзистора, Напри.1ер, лля микротерморезистора типа

МТ-54 при токе 4,5 ма. сопротивление

<ротерморезкстора,1500 oui, что сооТ М ветствует мощности рассеяния порядка ЗО мвт, а температура среды в микрозоне микротеро мо1.езистора на 4-5 С превышает температуру окружающей среды. Все исследования проводят при комнатной температуре.

В образовавц1уюся зону вводит пастеровскую микропипетку, снабженную отсасываюшим устройством, и отбирают данную эритроцитариукт взвесь, котору о перенося f про» бирку. После отбора в зоне микротерморезистора формируется очередная фракция клеток.

Эту и последующую фракции отбирают аналогичным методом, Ввиду того, что нахождение микротер-: морезистора вне жидкой среды приводит к немедленному его повреждению в,указанном режиме работы, периодически при отборе последних фракций в пробирку вносят путем наслаивания по стенкам буферную смесь, Отобранные фракции эритропитов используются для из" чения липидного состава клеток и для их микроскопического изучения.

Полученные биохимические данные по определению содержания холестерина лиги» тониновым методом дают следующие реэультаты.

В первой, верхней ракции содержание холестерина 6,8«10 мг на одну клетку.

-IO

Во второй фракции - 4,6 ° 10 мг на одну клетку. В эритроцитах, лежащих на дне

«Ю пробирки, содержание холестерина 2,6 10 Мг на одну клетку, Полученные результаты хорошо согчасу ются с; литературными данными, показывающими что содержание липидов и в частности холестерина зависит от возраста и со- кращается при старении.

Параллельно проводят микроскопические исследования..Приготовляют мазки с использованием в качестве красителя расТвора бриллианткризилбляу, что позволяет обнаружить зетикулоциты в самой первой фракции.

Этот результат наиболее четко наблюдают при разделении эритроцитов животных с экспериментальной гемолитической анемией (содержание ретикулоцитов в .верхней фракции 529o}.

Предлагаемый способ разделения жидких биологических систем по сравнению с из»ьестными способами обеспечивает возможность минимального воздействия на исслелуемую среду благодаря исключению дополнительных ингредиентов - участников реак ции, а также за счет применения микроэонда с малой мощностью рассеяния, при этом эффект разделения нв фракции проявляется весьма быстро, в течение 1 2 мин.

Способ легко осуществим в аппарату ном отношении и дает вобможность фракци оиировать клетки {эритроциты, лимфоциты) по возрасту.

Формула изобретения

Спосná разделен>)я биологических жидкостей, например крови, путем отбора клегочнь)х частиц по их физико-хильическим показателям, о т л и ч а ю ги и и с я тем, что, с целью повьняения разрец)ак))ией способности и упрогиения способа, исследу=мую жидкость цомегиа оТ в термостатируемь)й сос>> л, созлакт ) t 11>с )>аi ) 1 t it диент и затем отбирая т ил то ни > ) -) tti!;, локализот>анап))яе в зоне наср т а.

5 >1сто>)ники ))нф>>рл>A))i!it, ll)>)Itive) ) p )>;> tt! It t.мание при эксц рги.:".:.

Пер--()к>=-. >>л),б т) .r>)t "I );-..>. -rt> ii;it. клето>пн)х частиц и л>>а).ро>.н)лг г; ", Ч., "Мир, 1 .)74.

Составитель A. Бражникова

РедакторЛ. Гончарова Техред ц. Бабурка Коррек гор М, Лемчик

Заказ 1662/139 Тираж 541 Подписное

1ЯНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открь)тий

1 1 3035, Москва, Ж35, Раушская: наб„д. 4/5

Филиал ППП "Патент, г. Ужгород, ул. Проектная. 4