Способ электрофоретического анализа белков

Способ электрофоретического анализа белков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗО БРЕТ ЕН И Я

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1»1 561898

Союз Советских

Соцмммст@98cKNx

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.12.74 (21) 2082316/25 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 15.06,77. Бюллетень <¹ 22

Дата опубликования описания 26.07.77 (51) М. Кл."- G 01N 27/26

Государстеенный комитет

Совета Министроа СССР па делам изобретений и открытий (53) УДК 543.275(088.8) (72) Авторы изобретения

Л. И. Стекольников, Д. Г. Чукаева, Г. Е. Цимаркина и Л. В. Александрова

Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промышленности (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОГО

АНАЛИЗА БЕЛКОВ

Изобретение относится к изучению свойств и состава различных биологических объектов, связанных с производством продуктов питания, оценкой новых способов технологической обработки сырья, с производством лечебных препаратов.

Известен способ электрофоретического анализа смесей веществ, заключающийся в разделении смесеи на бумаге ь электричсс!том поле, фиксации фракций нагревом, окраске и отмывке фона (1).

Недостатком способа является длительность анализа и абсорбия разделяемых веществ бумагой.

В качестве прототипа взят способ электрофоретического анализа смесей веществ, заключающийся в разделении смеси на пленках из ацетата целлюлозы в электрическом поле, фиксации разделенных фракций нагревом или обработкой растворителями, окрашивании, отмывке фона и регистрации разделенных компонентов (2).

Недостатком известного способа является длительность анализа и разрушение ацетатной пленки при фиксации и окраске.

Целью изобретения являются улучшение качества элсктрофореграмм и сокращение продолжительности анализа. Г1оставленная цель достигается тем, что окрашивание пленок проводят раствором красителя в смеси с трихлоруксусной и сульфосалицпловой кислотами, взятыми в концентрации 1 — 3%.

Пример. Ацетатные пленки пропитывают мединал-цитратным буфером, рН 8,7, промо5 кают между листами фильтровальной бумаги, помещают в электрофоретическую камеру, в электродные отделения которой заливают буферный раствор того же состава. Камеру закрывают крышкой и пропускают ток в тече10 ние 10 мин при градиенте напряжения

15 В/см, после чего камеру отключают от источника питания и с помощью дозатора наносят образцы исследуемой смеси в количестве 0,005 мл. Затем камеру закрывают крыш15 кой, подключают к тому же источнику питания на 20 — 30 мин при этом же электрическом режиме и проводят разделение смеси белков. По окончании электрофореза пленки извлекают из камеры и окрашивают раство20 ром 1%-ного амидочерного красителя в смеси с равными объемами 3%-ных растворов трихлоруксусной и сульфосалициловой кислот в течение 10 мин.

Использование в качестве окрашпваюц;его

25 раствора смеси равных объемов 3 (О-ного раствора трпхлоруксусной и сульфосалициловой кислот исключает операци:о фиксации разделенных фракций.

При этом отсутствие в окрашивающем рас30 творе уксусной кислоты обеспечивает непроч561898

Формула изобретения

Составитель Н. Строганова

Текред 3. Тараненко Корректор И. Позняковская

Редактор Л. Попова

Заказ 1949/8 Изд. М 550 Тираж 1109 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 ную связь красителя с самими пленками, и фон легко и быстро в течение 10 — 15 мин отмывается смесью уксусной кислоты, метилового спирта и воды, взятыми в соотношении

1: 5: 4.

Затем пленки споласкивают дистиллированной водой и высушивают между листами фильтровальной бумаги или на воздухе.

Более разбавленный в отношении спирта отмывочный раствор, действующий в течение

5 — 10 мин, не изменяет свойств пленки и позволяет сохранять ее длительное время.

Количественная обработка результатов анализа может проводиться на мпкроденситометре или путем колориметрирования растворов после элюции окрашенных участков электрофореграмм.

Способ электрофоретического анализа белков, заключающийся в разделении смеси белков на пленках из ацетата целлюлозы, фиксации фракций, окрашивании, отмывке фона и регистрации разделенных компонентов, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью сокращения продолжительности анализа и улучшения ка10 чества электрофореграмм, окрашивание пленок проводят раствором красителя в смеси с трихлоруксусной и сульфосалициловой кислотами, взятыми в концентрации 1 — 3%.

Источники информации, принятые во вни15 мание при экспертизе:

1. Патент ЧССР г:з 94567, кл. 42L 3/06, опубл. 1969.

2. Журнал «Clinical Chem» 5, М 3, 1963.