Способ получения антибиотика ципропоптипа

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

">. «>,«<г - с ОП ЙСАНИЕ

; ИЗОЬРЕТЕЙИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДНЕДЬСТВУ

«» 563027

1 (61) Дополните.)ьное Е< я вт. свил-в<с (22) Заявлено 06.12.73 i 2 ) 1980551 13 ! 999339, 13

1 с присоединением заявки Л (23) Приоритет (51) М. Кл-, С 12 D 9/14

Гооударотее))иый комитет

СССР по делам изооретвиий и открытий

Опубликовано 15.11.79. Бюллетень № 42

Дата о)-.убликования описания 25.11.79 (53) УДК 615.779. .931 (088.8) (> с.) ><В:О>."- .

В Фго "Ова А 1 b, зев. з >"

Всесо>озны Й научно-исследовательский институт антибиотиков (71) Заявите)! ь (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА

ЦИНРО! (ЕПТИНА

Из<>Йрс r(lilt(OTIIO(I< T(H k IlpOE!3E30лств>с анти(>ио! Иков.

Сlloco(> Iþëó÷ållè5! янтиоиотикре нс o!tnся.!.

I kj)L, «>:.,"мый с>юсоб lio;I че;шя <>>и >,ici!Tся в том что к;,>ьт р, Аст. cine«ÿ(епв п. >3р. ¹

ВЬ)Р<3<ДИВ<)ЮГ !3 СP(., (I;

ЭКСТРс)КТЯ, ((» В()й И,. 3И Pb!OEIOE ММКИ И УГЛЕРОДЯ (ЮС,>Ест, К>ГДИМ ВЬЦС,(С> ИС;I СЛС,3 )i O

npo (,!, (>:- . j) я киис!I м>;!.елl>5, on! !.

А I,"> I l, ; И !< l i < > k I р (, <: С I ! И I 5! 3. я С 1 < 5! . < " . с!боли-(>:..л>,I p:,: Ас(. (, (гясеив и. Эр. Он

fiре.(став, >я I < (>(бой бесцветный I;I!l свcT,!ожелты)! и()р >)иof, с !(Хj !) !6!),4" (С -- 0.36, (:Н(. ). I> с::(«

т С, Н, Х.

О.

Н я ил(>к:, „,: (. - . 9,;)6, -!!.", .:;>;; 5.2I5

5,31, 12,28, l 2,2;5; S 16,15. 16).,57.

>1ол. в(с. Ii!72 (си(>кт)o;j;o>(..метри!Cс)(и))

1200 (гс(,м(g. сктри:3е(E(E!)

В (I> " (>(т <>Г L(è )i )0! ()E3OM Pfle I :)ОР I ИЯО, IIO;!2K >С>3 .,)ЯКСИ>> мl! ИОглои<СII!IEI ири 2IH, 232, 30- и 364 нм.

В ИК-(нсктрс име:отся полосы погло3цения 3370 см (ОН- или 3Н-грi EIEIû), 1660 см (ямилные связи). 1600, 1530. 1140, 1100 (ароматич(скис систск>

Цинрои< пт и! р>)ст)>орик! в >irioðoôopìå, 5 (>(. Изо Ic, Лим< т>!.!формямиде. лсдяноЙ ук," сно(! кис(>отe. вол Io>i j>;ECTE)oj>e WE!OH, трудiIo растворим и спирте, Не растворяется

H эфире, воле, волны>; раствора>; кислот и аммиака. Растворы антибиотика имеют >кел)в тую флуорссцеипик> в УФ-свете. ! I!i!! j>on(!IT!i!i 5. I3CIEIC >c5I серосолер>каши )<3 ! i l> (l !," ". (> 3 >

OI, являe i< я активным в отношении грамиог>о>китс>)! Иы>; бактерий, резистентны. < к антиби )1 ик(3>!. IL!> .роко применяемым в ме-! 5,1lillitнск(й:>р )ктикс. (!р; i!< с," гг)> C»»!>to! o биосинтеза антибиотика <)с) . с)псгясспв ня среда>; с кто р зиымм экстр<>ктом. рыбной мукой и к> курузcoevoft и!, i(on. (1рсдночтit2о ! <, Ьtlо>! и ВЛ Я(T . и < Рe:Eс> С КУ E< < Р\ Зkl Ы>М ЭКСТ—

:.-.;! кт(>::".

Ант(юи<;тик эксгрягируloT из мицелия орг lilil÷ccêitм ряс гворитслем, экстракт упари5630

Рыбная мука 0,5

Пеитон 0,5

Натрий хлористый 0,5

Г,тгокоза 2,0 рН 7,0.

Фирлгу«га изооретени;г

Составитель С..Малютина

Техред О. Луговая Корректор М. Шароши

Тираж 526 Подписное

Редактор Л. Письман

Заказ 7003/43

ЦИ И И П И Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, ж — 35, Раушская наб., д. 4j5

Филиал П llIl «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 вают в вакууме до 1/5 первоначального об.ьема, при 4 С выпадает осадок неочищенного цинропептина, который отделяют и очищают переосаждением из органических растворителей или хроматографированием на кремневой кислоте. Из органических растворителей предпочтительным является ацетон.

Пример 1. Процесс глубинного биосинтеза антибиотика осуществляют к .гьтивированием Act. cineraceus на среде следующего состава, о1о:

Кукурузный экстракт

Аммоний сернокислый 0,35

Натрий хлористый 0,5

Ме Jl 0,5

Крахмал 1,0

Глюкоза 1,5 рН 6,8 — 7,0 в колбах емкостью 750 мл.

Через 96 ч ферментации от 3 л глубинной культуры отделяк1т мицслий (300 г) .

Антибиотик извлекают из мицелия эксгракцией 900 мл ацетона. Экстракт уиаривакгт в вакууме до 0,2 л. Из упаренного экстракта выпадает светло-желтый аморфный осадок, который отделяют и многократно промывают петролейным эфиром. Остаток высушивают в эксикаторе иад СаС1а при 20"С.

Выход неочищенного продукта около 0,5 г.

0,8 г неочищенного антибиотика растворяют в этилацетате при комнатной температуре, отфильтровывают нерастворившийся темный осадок, фильтрат наносят на 4 г кремневой кислоты и высушивают на воздухе

Полученную взвесь антибиотика иа кремневой кислоте вносят в колонку с кремневой кислотой в эфире и промывают эфиром до получения бесцветного элюата. Затем антибиотик элюируют этилацетатом, растворитель упаривают досуха. Остаток (0.45 г) растворяют в минимальном обьеме хлороформа и выливают в пятикратный обьем эфира.

Светло-желтыи осадок отделяют и вьгсх— шивают в вакууме при 60 С. Вес около 0,4 г (ej8 — 169,4 (C — 0,36, СНС! g) .

0,5 (по сырому весу) Найдено, о1о: С 49,66, 49,95; Н 5,26, 5,31; N 12,28, !2,23; > 16,15, 16,37.

Пример 2. Биосинтез осуществляют на среде состава, 1,:

По примеру 1 выделяют 0,05 г цинропептпна.

При.кер 8. Мицелий (300 г) получают ио примеру 1, промывают его многократно эфиром и экстрагируют антибиотик хлороформом. Хлороформный раствор упаривают досуха и очищают полученный продукт по примеру 1. Получают 0,3 г цинропеитина.

Пример 4. 0,5 г неочищенного антибиотика, полученного по примеру 1, растворяют в х.10ðîôoðìå нри комнатной температуре, отфильтровывают нерастворившийся осадок и фильтрат вливают в 3-кратный обьем спирта. Г1олучают аморфный желтый антиоиотик, который отделяют от смеси растворителей и высушивают в вакууме. Получают

0,3 г цинропеитина в виде темно-желтого порошка. (1ример 5. Светло-желтый цинроиептин (0,5 г), полученный ио примеру 1, растворяют и 300 мл кипящего спирта. После. охлаждения из раствора вьшадает бесцветный осадок, ко1 орый отделяют, BblcvUIHH2JoT в вакууме. Получают 0,4 г цииропептииа.

Способ получения антибиотика цинропептина, от гггчающиися тем, что культуру Act. сепегaceus u. sp. № 1 выращивают на среде иа основе кукурузного экстракта, соевой или рыбной муки и vlлевода с последующим выделением целевого продукта экстракцией мицелия органическим растворителем.