Штамм 451-50-продуцент гиалуронидазы

Штамм 451-50-продуцент гиалуронидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

011 563433

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз СоветскихСоциалистических

Республик

-! (51)-Х Кл". ГТЖ1 710//

С 12К 1/00

161) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 04.09.75 (21) 2173773/13 с присоединением заявки ¹â€” (23) Приоритет

Опубликовано 30.06.77. Бюллетень ¹ 24

Дата опубликования описания 20.10.77

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 615.779.94 (088.8) (72) Авторы изобретения

С. Б. Гендина, С. А. Коновалов, Р. H. Гребешова, H. H. Патенко, С. П. Воротило и В. Т. Морозова

Всесоюзный научно-исследовательский биотехнический институт (71) Заявитель (54) ШТАММ ASPERGILLUS AWAMORI 451-50 — ПРОДУЦЕНТ

ГИАДУРОН ИДАЗЫ

Изобретение относится к микробиолэгии, в частности к производству ферментных препаратов.

Известен. штамм Aspergillus awamori 22/12— продуцент .гиалуронидазы.

Однако для этого штамма характерна невысокая активность продуцируемого фермента.

Цель изобретения — получить штамм, апособный продуцировать активную гиалуронидазу.

Для этого используют штамм Aspergillus

awamori 451 — 50.

Штамм Aspergillus awamori 451 — 50 получен в результате многоступенчатой селекции. Способы, ведущие к получению этото активного штамма, состояли в под готовке и отборе лучшего варианта для проведения селекционных исследований. Отобранный более активный вариант Aspergillus awamori 224 — 21, полученный .на третьей ступени селекции, подвергали четырехкратному воздействию химическо;о мута гена — этиленимина концентрацией 1:

4000 при экспозиции 30 мин в сочетании с ультрафиолетовыми лучами в дозе 25 10 эрт/мм . Выделенный при четырехкратном комбинированном воздействии этиленимина и ультрафиолетовых лучей и .многоступенчатом отборе новый активный штамм 451 — 50 подвепгали проверке по ферментативной активности в процессе хранения и пассированпя на сусло-агаре.

Штамм Aspergillus awamori 451 — 50 хранится в коллекции культур ВНИИ генетики п се5 лекции промышленных микроорганизмов IIO;I, номером F-82 и характеризуется следующими признаками.

Морфологические признаки.

На сусло-агаре мпцелий сильно разветвлен.

10 Стенки клеток мпцелпя извилистые, около перегородок часто наблюдается утолщение стенок. Ширина клеток мпцелия варьирует от 2,3 до 4,75 мк, длина — oT 15,0 до 50 мк. Конпдпеносцы извитые, коричневые, без перегородок, 15 ширина конпдиеносцев достигает 6,25—

11,25 мк. Конидии круглые, с,гладкой ооолочкой, светло-коричневые, диаметр их составляет

2,75 — 5,0 мк.

Культур а льны е при зн акп.

20 Сусло-агар. Колонии круглые, выпуклые, пушистые, с глубокой радиальной складчатостью. Конидпеобразование обильное. Диаметр ги|гантских колоний На шестые сутки роста достигает 67 — 72 мм.

Агаризованная среда Чапека с 6% крахмала и 10%-ным экстрактом из солодовых ростков.

Колонии неправильной круглой формы, бархатистые, темно-бежевого цвета с коротким воздушным мпцелпсм и резко выраженной ра30 диальной волнистой склад|la TocTblo ua верх563433

10

0,10

0,001

6,0

НПО Заказ 1680/7 Изд. Л% 574 Тираж 563 Подписное

Сапунова, 2

Типография, пр. ней и нижней поверхностях. Периферическая часть белая, широкая. Диаметр колоний на шестые сутки роста достигает 58 — 65 мм, края круп.нозубчатые.

Ломтики картофеля. Рост хороший, бархатистый, с глубокой складчатостью, конидиеобразование обильное. Цвет колоний темно-бежевый. Окраску субстрата не изменяет.

Биохимические свойства.

Мясо-пептонную желатину разжижает. Молоко свертывает и пептонизирует. Пигмент в молоко не выделяет.

Нитраты восстанавливает.

Крахмал гидролизует.

Отношение к углеводам.

Глюкозу, ксилозу, сахарозу, мальтозу тидролизует с образованием щелочи; талактозу, лактозу тидролизует с образованием кислоты, Глицерин, маннит гидролизует с образованием кислоты.

Газообразование отсутствует.

Культивирование мутанного штамма .проводят в глубинных условиях на жидкой среде

Чапека, содержащей, % ..

Натрий азотнокислый 0,9

Калий хлористый 0,05

Магний сернокислый 0,05

Калий фосфорнокислый однозамещенный

)Келезо сернокнслое

Крахмал растворимый

10Я>-ный водный экстракт из солодовых ростков, мл 10

Рост штамма Aspergillus awamori 451 — 50 на указанной среде при .глубинном способе культивирования в колбах на качалке при

180 об/ мин и 30 С очень интенсивный, имеет вид мелкозернистой, густой, кашицеобразной массы.

Максимальное образование гиалуронидазы в культуральной жидкости наблюдается после

72 час выращивания; активность гиалуронидазы, определяемой методом Систона Касса, составляет 11 — 12 ед/мл. В культуральной жидКосТН кроме 1гиалуронидазы имеет место также накопление глюкоамилазы, мальтазы.

Показатели активности глюкоамнлазы равны 18 — 20 ед/мл, мальтазы — 2,30 — 2,50 ед/мл.

Прп хранении и нассировании высокий уровень ферментативной активности штамма Азpergillus awamori 451 — 50 не снижается. Повышенная продуцирующая способность штамма 451 — 50,проявляется;при выделении препарата ферментов пз глубинной культуры трехсуточного возраста. Препарат гиалуронидазы получа. ог путем осаждения фильтрата культуральной жидкости четырьмя объемами этилового спирта при температуре смеси 2—

4 С. Фермснтный препарат отделяют цсптрифугпрованием, затем промывают спиртом, сушат. В высушенном и измельченном до порошкообразного состояния препарате опреде15

60 ляют активность гиалуронидазы и сопутствующих ферментов. Выделенный препарат имеет следующие показатели активности: гиалуронидазы 500 ед/мг, глюкомилазы 1850—

2000 ед/г, мальтазы — 16,5 — 18,0 ед/г.

Мутант 451 — 50 обладает большими преимуществами, состоящими в усиленной способности к биосинтезу,гиалуронидазы и сопутствующих ферментов амилолитического комплекса — тлюкоамилазы, мальтазы. Совместное действие перечисленных ферментов обеспечивает гидролиз мукололисахаридов.

Формула изобретения

Штамм Aspergillus awamori 451-50 — продуцент гиалуронидазы, хранится в коллекции культур ВНИИ генетики и селекции промышленных микроорганизмов под номером F-82.

Морфолотические признаки.

На сусло-агаре мицелий сильно,разветвлен.

Стенки клеток мицелия извилистые, около перегородок часто наблюдается утолщение стенок, ширина клеток мицелия варьир„2,3 до 4,75.мк, длина 15 — 50 мк. Конидиеносцы извитые, коричневые, ширина достигает 6,25—

11,25 мк. Конидии кру1глые, с тладкой оболочкой, светло-коричневые, диаметром 2,75—

5,0 мк.

Культуральные признаки.

Сусло-агар. Колонии круглые, выпуклые, пушистые, с)глубокой радиальной складчатостью.

Кони диеобразование обильное.

Диаметр гигантских колоний на шестые сутки, роста достигает 67 — 72,мм, Агаризованная среда Чапека с 6 /p крах,мала и 10jPp-ным экстрактом из солодовых ростков. Колонии неправильной круглой формы, бархатистые, темно-бежевого цвета с коротким воздушным мицелием и резко выраженной радиальной волнистой складчатостью на верхней и нижней поверхностях. Периферическая часть белая, широкая. Диаметр колоний на шестые сутки роста достигает 58 — 65 мм, края крупнозубчатыс.

Ломтики картофеля. Рост хороший, бархатистый, с 1глубокой складчатостью. Koíèäèåoáразование обильное. Цвет колоний темно-бежевый. Окраску субстрата не изменяет.

Биохимические свойства.

Мясо-:пептонную желатину разжижает. Молоко свертывает и пвптонизирует. Пигмент в молоко не выделяет.

Нитраты восстанавливает. Крахмал тидролизует.

Отношение к углеводам.

Глюкозу, ксилозу, сахарозу, мальтозу,гидролизует с образованием щелочи; галактозу, лактозу |гидролизует с образованием кислоты.

Глицерин, маннит гидролизует с образованием кислоты.

Газообразование отсутствует.