Патент 565060

Способ получения лизата бактериофага

 

сг, > .,.». к -4

1 .- ;-::.;,-: зт;чн ЩзА

56566Î

А FH4

ОПИС

Союз Соеетскнк

Социалистических

Республик

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 17.02.76 (21) 2321201/13

М, Кл, - С 2K 7/00 с присоединением заявки №

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делан изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 15.07.77. Бюллетень № 26

Дата опубликования описания 24.08.77 (53) УДК 576,858.9 (088.8) (72) Авторы изобретения И. М. Ллутин, Б. Н. Мишанькин, В. И. Марченков, Н. Н. Новосельцев, К. К. Рожков и A. В. Суичмезова

Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (71) Заявитель (54) СПОСОВ ПОЛУт1ЕНИЯ ДИЗЛГЛ ВЛКтГРИОФЛГЛ

Полученные табл. 1. результагы приведены в

Таблица 1

Температура выращиваиия смеси, С

Титр фага в лизате, частиц/мл

1;(10

4,4Х108

1><10

6,4Х 10"

3,3 108

1Х10

3X10

1 Х 108

1;10

20

21,3

25

26,4

36,4

20 изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к получению бактериофагов микроорганизмов, которые применяются для диагностических целей.

Известен способ получения лизата бактериофага путем совместного выращивания культур бактерий и фага на твердых или жидких питательных средах, при котором температура для выращивания бактериофагов является температурой оптимума роста бактерии — хозяина фага (11.

Однако титр полученного лизата бактерио,фага недостаточно высок.

С целью повышения титра фага по предлагаемому способу культуры выращивают прои температуре ниже оптимальной для культивирования бактерий.

Для получения чумного фага «Д Эрелля» культуры выращивают при 21 — 25 С, для получения холерного фага «С» культуры выращивают при 30 — ЗЗ С.

Пример 1. Опытные пробы, содержащие смесь 5)(10 бактерий чумы штамма ЕВ

1290 и 5р, 16 частиц чумного фага Д Эрелля в 5 мл казеиново-ферментативного бульона, BbIpGIlIèâàþò в течение 20 ч при разных температурах, и клетки бактерий убивают хлороформом. Полученный фаголизат осветляют центрифугированием, титруют, подсчитывают образовавшиеся негативные пятна и вычисляют титр фага.

Наиболее высский титр фага в лизате получен при 23 С, в то время как при 28—

30 С вЂ” общепринятой оптимальной для чумного микроба температуре выращива ия— только 1 — 3 10а.

Таким образом, за счет снижения температуры выращивания смеси «бактерии - фаг»

30 мо кно пол) чить величение титпа фага в

21 — 64 раза, Пример 2. Опытнн1е пробы, содержащие по 5 мл бульона Мартена рН 7,6 со смесью клеток холерного вибриона штамма М-124 с холерным фагом «С» (концентрация клеток бактерий 1у, 10, концентрация фага 1Х 10 частиц на 1 мл среды), выдерживают при заданных температурах в политермостате 18 ч.

По окончании инкубации фаголизаты обрабатывают хлороформом, осветляют центрифугированием и раститровывают. В зависимости от температуры выращивания титры фага в лизатах изменяются следующим образом (см. табл. 2).

Таблица 2

Титр фага в лизате, части ц/мл

Температура выращивания, смеси, С

Следовательно, при температуре 33 — 35 С титр фага в лизате был в 3 — 3,5 раза выше, чем при 37 С вЂ” общепринятой оптимальной

Составитель С. Малютина

Техред А. Камышникова

Корректор Л. Орлова

Редактор В. Блохина

Заказ 1661/12 Изд. № 596 Тираж 563 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 4 5

Типография, пр. Сапунова, 2

18

23,6

29

31

33

34,6

36,5

38,3

1у,10

2,9y,10

2>(10в

1у10

5,1 y,10 бу 10

1,8Х 10

1,4у,10

Зу10 температуре для выращивания холернйМ вибрионов.

Таким образом, выращивание смеси бактерий и фагов при температурах нийе обще5 принятых оптимальных для данного вида микроорганизмов постоянно сопровождается повышением титра фага в полученных лизатах. Поэтому введение предлагаемого способа в производственные условия позволит noI0 лучать исходные фаголжзаты с более высокой литической активностью, чем обычно выпускаемые препараты, что значительно улучшит их качество и приведет к снижению как себестоимости готовой продукции, так и по15 следующих операций, связанных с получением чистых препаратов бактериофагов.

Формула изобретен ия

1, Способ получения лизата бактериофага

20 путем совместного выращивания культур бактерий и фага на питательной среде с последующим отбором фаголизата, о т л и ч а ющийся тем, что, с целью повышения титра фага, культуры выращивают при температу25 ре ниже оптимальной для культивирования б а ктер ий.

2. Способ по и. 1, отл ич а ющи и ся тем, что для получения чумного фага «Д Эрелля» культуры выращивают при 21 — 25 С.

30 3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для получения холерного фага «С» культуры выращивают при 30 — 35 С.

Источниии информации, принятые во внимание при экспертизе

35 1. Адамс M. «Бактериофаги», M., Изд. Иностранная литература, 19б1, стр. 29, 30, 401—

403.