Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля

Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ > 565242

Союз СоветскиХ

Социалистинескик

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 09.06.75 (21) 2146087/25 с п рисоединен ием заявки ¹â€” (23) Приоритет— (43) Опубликовано 15.07.77. Бюллетень № 26 (45) Дата опубликования описания 24.10.77 (51) М. Кл, G 01N 27/26

Государственный комитет

Совета Министров СССР ао делам изобретений н открытий (53) УДК 543.544(088.8) (72) Авторы изобретения

А. А. Покровский, Б. В. Оттесен и К. А. Коровников

Институт питания АМН СССР (71) Заявитель (54) УСТРОЙСТВО ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАДИЕНТНОГО

ПОЛИАКРИЛАМИДНОГО ГЕЛЯ

Изобретение относится к устройства м, используемым в практике биохимических и клинических лабораторий для получения столбиков градиентного полиакриламидного геля, применяемого в электрофоретических исследованиях веществ белковой природы.

Известно устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее две емкости, разделенные герметичной прокладкой, связанные тройниковой трубкой с регулятором .и выводным каналом.

Недостатками этого устройства является сложность регулировки, зависимость от вязкости жидкости и температуры.

Известно устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее два цилиндра с поршнями, связанными через редукторы с электродвигателями, управляемыми электронным программатором.

Конструкция этого устройства сложна, оно громоздко, отсутствует распределительное устройство для заполнения электрофоретических трубочек, Прототипом предлагаемого изобретения является устройство для получения градиентного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров,с поршнями, камерой смешения, мешалкой и,приводом и имеющее вывод ной канал.

Гель в этом устройстве получается в виде

2 блока, который затем необходимо разрезать.

Целью изобретения является обеспечение возможности заполнения множества электрофоретичеоких трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте.

Поставленная задача достигается тем,чго известное устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров с поршнями, мешалкой и приводом, снабжено дозатором-распределителем, расположенным симметрично под центральной частью смесителя, Дозатор выполнен в виде конической

15 тефлоновой пробки, связанной с вращающим приводом. Верхний торец пробки служит дном камеры смешения и мешалкой. От его центра под углом к оси вращения проходит канал, выход которого соединен с распредели20 тельной трубкой. Конец этой трубки имеет возможность касаться фитилей, укрепленных на резиновых полосках, расположенных наклонно к вертикальной оси, н опускающихся в электрофоретические трубочки, расположен25 ные по окружности на штативе.

Изобретение иллюстрируется чертежом.

Устройство состоит из блока двух цилиндров 1 и 2, изготовленных из нержавеющей стали, двух тефлоновых поршней 3 и 4 с упзо лотнениями из сплоконовой резины, перем"-565242

3 щаемых приводом через механические устройства 5, 6 кулачкового типа. Рабочие объемы цилиндров 1, 2 через выведенные наружу резиновые трубочки-петли 7 и 8 соединены с камерой смеш"- ния 9. Дозатор-распределитель выполнен в виде тефлоновой пробки 10 с ка налом, выход которого соединен со стеклянной трубочкой 11, сужающейся на конце.

На диске 12 под углом 40 закреплены полоски резины 13 с фитилями 14 из ленточек фильтровальной бумаги. Вращение механических устройств 5 и 6, а также тефлоновой пробки 10 (дозатора-распределителя .осуществляется от редуктора и гистерезианого трехфазного двигателя. Электрическая схема устройства обеспечивает кнопочное управление основ ными операциями и сигнальными лампочками, информирующими оператора о характере работы прибора.

Работает устройство следующим образом.

Поршни 3 и 4 находятся в верхнем положении (рабочие объемы цилиндров максимальны). Исходные растворы акриламида во избежание преждевременной полимеризации приготовляют непосредственно перед заполнением цилиндров. Заполняют цилиндры с помощью 20-миллилигрового шприца, начиная с цилиндра 1, низкоконце нтрированным раствором акриламида через имеющуюся в поршне 3 трубочку (на чертеже не показана), предназначенную для жидкости. Через другую трубочку в поршне 3 (на чертеже не показана) из цилиндра 1 выводится воздух.

Далее вытесняется воздух из,петли 7 и камеры смешения 9. Цилиндр 2 заполняют раство ром высокой концентрации таким жс образом, как и цилиндр 1.

После вытеснения воздуха из петли 8 цилиндра 2 и низкоконцентрированного раствора из камеры смешения 9 о существляется смачивание всех десяти фитилей высококонцентрированным раствором акриламида через трубочку 11.

На неподвижный стол устанавливают круговой штатив 15 с электрофоретичеокими трубочками 16, фитили 14 вставляют внутрь трубочек, включается электродвитатель. Растворы акриламида из цилиндров 1 и 2 выжимаются поршнями через петли 7 и 8 в камеру смешения 9, где они перемешиваются за счет вращения пробки 10. Смешанная жидкость проходит через трубочку 11. В процессе вращения на ее конце образуется каплч диаметром около 1,5 мм. При контакте с очередным фитилем капля снимается. Жидкость то нкой пленкой стекает по фитилям 14, затем по внутренним стенкам трубочек 16 и наслаивается на поверхность слитой ранее жидкости. Наслаивание начинается с раствора ма к симальной концентрации и завершается раствором минимальной концентрации Распределение акриламида по длине трубочек ли нейно (постоянный градиент).

Для повышения точности распределения

Устройство для получения градиентного полиакриламидного геля, содержащее смеситель в виде блока двух цилиндров с поршнями, камерой смешения, мешалкой и приводом и имеющее выводной канал, о т л и ч а ю щ ее ся тем, что, с целью заполнсния множества электрофоретических трубочек смесью с одинаковым линейным распределением концентрации акриламида по их высоте, устройство снабжено дозатором-распределителем, расположенным симметрично под центральной ча4 раствора акриламида между электрофорети ческими трубочками 16 сужающийся конец труб очки 11 обрабатывают гидрофобным веществом, например парафином. Той же цели

5 способствует смазка в нутренних поверхностей цилиндров 1 и 2 и трущейся поверхности пробки 10 силиконовым маслом.

Во избежание перемешивания раствора акриламида в трубочках общий цикл запол10 пения .их проводят в течение 20 мин, при этом скорость вращения пробки 10 составляет

1 об/4 сек.

Для предотвращения полимеризации раст15 воров акриламида в устройстве после окончания разлива внутренние объемы смесителя и трубочки 11 промывают водой.

Эффективность изобретения состоит в получении столбиков геля с постоянным градиентом одновременно в десяти стандартных электрофоретичсских трубочках, приготовление которого, например, вручную, невозможно. Программированное перемещение поршней, обеспечивающее принудительный и стро25 смешения исходных расгворов в предлагаемом устройстве гарантирует, как показали проведенные испытания, стандартность закона распределения концентрации акриламида по высоте геля, независимо от вязкости, кочцентрации и температуры растворов, что, в конечном итоге обеспечивает высокую воспроизводлмость определения молекулярного веса и геометрических размеров молекул белковых фракций от их относительного пробега в «градиентном» геле. Кроме того, использование градиентного геля расширяет сферу применения электрофоретического метода: позволяет проводить изучение законов электрофоретической подвижности белковых молекул в геле с меняющейся структурой молекулярных сит. Это особенно существенно при изучении физико-химических свойств новых белковых веществ методом электрофореза.

45 Автоматическая работа устройства и исключение благодаря этому ошибок оператора делают прибор удобным в работе при достаточно высокой производительности (60 — 80 заполненных трубочек за рабочий день). При50 бор может найти практическое применение в работе биохимических лабораторий.

Фо р мул а из о бр етени я

565242

Составитель Л. )Каркова

Техред 3, Тараненко

Коррсктор Л, Денискина

Редактор P. Киселева

Изд. № 585 Тираж 1109 Подписное

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская паб., д. 4/5

Заказ 6249

МОТ, Загорский филиал стью смесителя, вылолненным в виде конической тефлоновой пробки, связанной с вращающим приводом, причем верхний торец пробки служит дном камеры смешения и мешалкой, от центра верхнего торца пробки под углом к оси вращения проходит канал, выход которого соединен с распределительной труб6 кой, конец которой имеет возможность касаться фитилей, укрепленных на резиновых полосках, расположенных по окружности на клонно к вертикальной оси и опускающихся

5 в электрофоретические трубочки, расположенные по окружности на штативе.