Способ получения уратоксидазы

Способ получения уратоксидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е (11)ае5938

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союэ Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДВТЕЛЬСТЬУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 21.03.75(21) 2117038/13 (51) М. Кл.

С 12 10 13/10 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Государствеииый комитет

Совета Мииистроа СССР оо делам изооретеиий и открытий (43) Опубликовано 25,07.77Би)ллетень № 27 (53) УДК 663.11 (088.8) (45) Дата опубликования описания16.08.77 (72) Авторы изобретения

Р, И. Акишина, А. П. Ткаченко, B. А. Миронов, Е. Е. Либер и 3. С. Каган

Я1

Всесоюзный научно-исследовательский витаминный институ т-(71) 3 а я в ит ел ь (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ УРАТОКСИБАЗЫ

Гидролизат БВК

1,0-2,5 (по сухим веществам)

0,2-0, 35

0,01-0, 1 5

0,01-0,07

0,01-0,07

Мочевая кислота к 1- иРО4 м ь04

КС1

Гидролизат БВК

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано для получения биологически активных веществ, выращенных на жидкой пи тательной среде, например yратоксидазы из мицелия Ас1<лок усе species 313-152, Известен способ получения уратоксидазы, предусматривающий культивирование 4с1йо нуdies Ьрес ео313-152 в аэробных условиях на ферментационной среде содержашей мочевую 1О кислоту и минеральные соли, с последуюшим выделением фетМента t fj, С целью повышения выхода и активности фермента по предложенному способу в посевную и ферментационную среды вводят гидролиэат белкововитаминного концентрата в количествах соответственно равных

1,0-2,0% и 1,0-2;5% по весу сухих веществ.

Способ осуществляют следуюшим образом.

Культуру Ас1< конусов species 313-152 вырашивают в аэробных условиях на посевной и ферментационных средах, содержащих м<>чевую кислоту, минеральные соли и гидролизат белково-витаминного концентрата (БВК) 25 в количествах соответственно равных 1,02,0% и 1 0-2,5% по весу сухих веществ с последующим выделением фермента.

Состав ферментационной среды, вес.%:

Р состав среды входят микроэлементы

Ре, Си

Состав посевной среды, вес. %:

1-2 (по сухим веществам)

КТО. 0,01-0,07 КСЕ, О, 01-0, 07

М 50

0,01-0,07

Дфеда тадке содержит микроэлементы е, Си

Пример 1. Посевную культуруДс1 ио т y cue а р е c i e e 31 3-1 52 вырашиваюч на среде, содержашей 1% гидролизате БВК .

565935

Гидролизат БВК

1,5(по сухим вещес тв ам )

0,3

0,1

0,05

0,05

Мочевая кислбте

КН2Р04

М УО4

КСИ т идролизет ЪЗ К

Мочевая кислота

1,5 (по сухим веществам)

0,3

0,1

0,05

0,05

ЦНИИПИ 3екез 2318/17 Тираж 541 Подписное

Филиал ППП Патент", r Ужгород, ул. Проектная, 4 з

Выращивание ведут в еэробных условиях о при 28 и 1 С в течение 24-28 чес„

Готовый посевной материал (5 об.Ъ) переносят в ферментационную среду состава, вес. %:

Среда также содержит,5 мг/л Fe О, 1 мг/n Си 504 и воду дистиллированную. рН среды (6,8-6,9) устанавливают до стерилизации.

Стерилизацию проводят ъри 0,5 ати, 30 мин, фдру йнФарию — 12 — 16 час. Полученный мицелий 8одержит уратоксидазу с активностью 8 — 20 ед, на 1 г влажного веса клеток и 150-400 ед. в расчете на

1 л культуральной жидкости.

Удельная активность экстракта составляет 0,25-0,6 ед. на 1 мг белка или 40-90 ед. на 1 г сухого мицелия.

Пример 2. Гидролизет БВК готовят.из 30 г«сухих дрожжей, которые вносят в 100 мл 1 í. HCI. Гидролиз проводят

30 мин при 0,5 ати. Затем объем суспензии доводят до 300 мл водой н фильтруют. ,Оля приготовления среды используют фильтрат гидролизета БВК.

Посевной материал готовят следующим обрезом . Суспейзию спор с 7-.14 — суточной культуры сбиои сее syec eBI 313-152j, з выращенной на овсяной агеризованной среде, переносят в 750 мл колбу со 100 мл j о . посевной среды состава, вес. /о:

Гидролизет 1,0 (по сухим веществам)

КН РО4 0,1 му go 0,5 ксР 0,05

Среда также содержит 5 мг/л Ре5О, и 4>

Х мг/л 0 f04 рН среды устанавливают до стерилизации 1н,"КОН (6,8-6,9).

Стерилизацию проводят 30 мин при

0,5 ати.

Посевную культуру ектиномицета выращивают в аэробных условиях на качалке при

220 o6/мин в течение 24-28 час при

28й1 С.

5 мл культуры переносит в 100 мл ферментапионной среды состава, вес. 7: 5

В состав среды также входит 5 мг/л

РеБО4,1 мг/л Си5О< и вода дистиллированная. рН среды устанавливают до стерилиза. ции 1 н. КОН вЂ” 6,8-6,9. Стерилизацию проводят 30 мин при 0,5 ати.

Ферментецию ведут в 750 мл колбах со (100 мл среды в еэробных условиях при встряхивании на качалке при 220 об/мин при 28+1 С. о

Через 12-16 час ферментацию прекрешают, мицелий отделяют оТ культуральной жидкости фильтрованием, промывают водой и разрушают ультразвуком на установке

MgE 100 в течение 4 мин.

При этом активность уратоксидезы в бесклеточном экстракте составляет 0,250,6 ед. на 1 мг белка или 8-20 ед, на 1г влажных клеток.

Последующее осаждение сульфатом аммония дает частично очищенный экстракт с активностью 3-4 ед/мл. Фермент уратоксидезы катализует окисление мочевой кислоты и может быть использован в диагностике, а в BbIcoKoo÷èøåííîM состоянии — для лечения заболеваний, связанных с нарушением пуринового обмена.

Формул а . изобретения

Способ получения уратоксидазы, предусматривающий культивирование let< vo w pce S

apecies 313-152 в аэробных условиях на посевной и ферментационной средах, содержащих мочевую кислоту и минеральные соли, с последующим выделением ферменте, о тл и ч а ю ш и и с я тем, что, с целью повышения выхода и активности фермента, в посевную и ферментационную среды вводят гидролизет белково-витаминного концентрата в количествах, соответственно равных

1,0-2,07 и 1,0-2,5% по весу сухих веществ.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе:

1. Авторское свидетельство СССР

¹ 457723, кл. С 12 Э 13/10, 01.09.74,